août Grand-Marais

22. 3 août Champion (canal) 23. 21 août Estavayer 1928. 24. 3 mai Saint-Blaise 25. 3 mai Boudry (Pisciculture) 26. 29 mai Saint-Blaise 27. 18 juin Auvernier (mares) 28. 27 juin Grand-Marais 29. 1 juillet Yverdon 30. 1 juillet Yvonand 91. l'juillet Estavayer 32. 8 juillet Saint-Blaise 33. 8 juillet Etang du Château de Thièle 34. 8 juillet Etang du pont de la « Directe » 35. 8 juillet Grand-Marais 36. 8 juillet Champion (canal)

Le matériel.

Les mollusques recueillis étaient déposés isolément dans des cylindres de verre en vue de déceler les cas de parasitisme par l’apparition plus ou moins rapide des cercaires dans l’eau. Les infestations débutantes ainsi que celles dues au développement des Cercariaea qui ne quittent pas l’hôte intermédiaire ne sont pas révélées par le procédé de l'isolement. Seule, la dissection des mollusques paraissant indemnes permet d'établir le pourcentage exact de l’infestation. L’hépato-pancréas est l’organe le plus fréquemment parasité. Sa couleur anormale est due à la pigmentation des sporocystes ou des rédies qui s’insinuent dans les mailles du tissu conjonctif intertubulaire ou qui forment un amas blanchâtre ou orangé à la base du tortillon. Ces larves peuvent même envahir le poumon où s’amassent fréquemment les cystes provenant d’une invasion de cercaires issues d’un premier hôte intermédiaire.

Lors des dissections, une partie du tissu infesté était conservée pour les coupes, une autre, fixée et colorée pour les préparations totales, le reste utilisé pour l’étude des larves vivantes.

Etude du matériel vivant.

Cette méthode, révélant clairement l’anatomie des cercaires, a pour elle le double avantage d’être la plus simple et la plus précise. Elle est en outre seule capable de permettre l'étude du système excréteur, si complexe dans bien des cas. Généralement, l’évaporation trop rapide de l’eau, sous la lamelle, détermine la compression, puis l’écrasement de l’animal, ce qui suspend, au moment psychologique, les recherches qui devaient aboutir au dénombrement des flammes vibratiles et au tracé du parcours capricieux des canalicules excréteurs. Mais si, au lieu de prélever, au moyen d’une pipette, une petite quantité d’eau contenant les larves à observer, on prend, à l’aide des brucelles, un fragment de foie infesté qu’on

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secoue ou qu'on déchire sur la lame, les sporocystes, les rédies ou les cercaires qui s’en détachent se trouvent englobés dans un liquide légèrement muqueux, ne subissant qu’une très lente évaporation. Dans ces conditions, une étude très prolongée et bien facilitée peut être effectuée sur le même individu pendant plusieurs heures consécutives.

L'observation des larves jeunes, plus transparentes souvent que les adultes, ne doit pas être négligée. Elle fournit de précieux résultats complémentaires.

Préparations totales et coupes.

Le matériel à conserver a été fixé au moyen des liquides suivants : Alcool 70, Alcool 96, liquide d’Ochsmann, Sublimé acétique pur ou dilué. C’est ce dernier qui a fourni les meilleurs résultats. Les colorations pour préparations totales, faites au carmin très dilué (surcoloration et décoloration à l’alcool 70 + acide chlorhydrique 14 %), ont révélé la présence des cellules glandulaires caudales des Monostomes et des Furcocercaires et des cellules géantes, sous-cuticulaires, en forme de taches, réparties symétriquement, qui sont spécifiques pour les Cercariaea et les larves de Monostomes.

Les coupes, d’une épaisseur de 5 «, sont indispensables dans la plupart des cas. Les données d’ordre histologique que leur étude fournit, tiennent souvent lieu de preuve aux conclusions auxquelles aboutissent les recherches anatomiques faites sur le vivant.

Mesures.

En raison de la forme très variable des cercaires pendant la reptation, il est indispensable d’indiquer l’état de la larve au moment même de la mesure. D’une manière générale, on peut remarquer qu’à l’état d'extension, la larve est deux fois plus longue qu’à l’état de contraction. Seules, les Furcocercaires ont des variations moindres et la longueur de leur tronc caudal, le plus souvent, est constante. Les mesures prises sur des cercaires comprimées sous la lamelle, toujours excédantes, doivent être mentionnées spécialement. Sur les préparations totales, les dimensions peuvent varier notablement suivant le fixatif utilisé, mais on constate presque toujours une contraction très appréciable suivant les trois directions.

Fixation à la flamme.

La détermination des cercaires d’'Echinostomes ne peut être faite qu’au moyen du dénombrement des crochets de la couronne céphalique. Les larves sont placées sous la lamelle et l'excédent d’eau est absorbé progressivement au moyen d’un papier buvard jusqu’au moment où la reptation cesse. On passe alors la lame sur la flamme en évitant l’ébullition ; les larves, largement étalées,

sont ainsi fixées et le dénombrement de leurs crochets réfringents peut s’effectuer facilement. Pendant l'observation, il est prudent de déposer une goutte d’eau sur le bord de la lamelle afin d’empêcher l’écrasement.

Dénombrement des larves.

Les rédies et les cystes sont déposés dans un verre de Pétri sous lequel se trouve un réseau quadrillé et sont comptés un à un.

Les cercaires, issues d’un mollusque isolé, sont déversées dans un vase propre, car les mucosités déposées sur les parois du bocal provoquent des agglomérations de larves qui empêchent le dénombrement. Les cercaires sont fixées par addition de sublimé ou d’acide picro-nitrique. Ce dernier a l’avantage d'éviter une coloration ultérieure. Il est indispensable de brasser le liquide pendant 10 à 15 minutes pour empêcher l’adhésion des cercaires aux parois du récipient. Le dépôt des larves fixées est alors isolé par décantation, puis déversé dans un bocal à plancton de forme sphérique. Une certaine quantité d’eau est ajoutée ensuite de manière que le contenu du récipient atteigne 40 cm°. Le tout est alors secoué pendant une demi-minute en vue d’obtenir un mélange aussi uniforme que possible dans lequel on plonge rapidement une pipette « Hensen >» d’une contenance de 1 em. Le liquide prélevé est alors déposé sur une plaque à dénombrer divisée en 800 carrés de 1,5 mm. de côté qu’on fait défiler sous l’objectif. Le nombre réel de cercaires s'obtient en multipliant par 40 la moyenne tirée de 3 ou 4 dénombrements pareils à ce dernier. La différence en % d’une épreuve à l’autre est très minime si le brassage réalise l’uniformité nécessaire du mélange.