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Fig. 1. — a — [. Sang normal desséché — à, b, c, hématies avec lacune centrale, l’hématie € est crénelée. — d, e, f, h, hématies avec lacune centrale, au milieu de la lacune débris de l’hématie. — 9, hématie avec plusieurs petites lacunes. — 2,7, k, !, hématies déformées avec lacunes centrales. — m-y, allérations des hématies par la chaleur (57°). — m, n, o, premiers degrés de l’altération, les hématies ont des lacunes et sur les bords se forment de petites boules sarcodiques. — p, q, r, altérations plus avancées, il se forme des prolongements animés souvent d’un mouvement oscillatoire ; —$s,{,u, v, degrés plus avancés de l’altération; les hématies se décolorent, diminuent de plus en plus de volume eten fin de compte on ne trouve plus que des granulations .-en chaînette æ ou libres, y.

crites plus d’une fois comme des éléments para:

sitaires; elles restent incolores sur les prépara-

tions traitées par les réactifs colorants, ce qui permet de les distinguer des protoplasmas parasitaires.

L'action de la chaleur comme celle de la dessiccation est très variable suivant les conditions dans lesquelles elle s'exerce. Lorsque la chaleur agit sur du sang frais, elle donne lieu à des altérations profondes des hématies et à la destruction complète de ces éléments lorsqu'elle atteint 57 degrés; au contraire, lorsque le sang est desséché, la chaleur est un des meilleurs procédés de fixation des hématics.

L'action de la chaleur sur les hématies à l’état frais a été bien étudiée par Max Schultze et par Ranvier.

Lorsqu'on met une préparation de sang frais sur une platine chauffante dont on élève peu à peu la température et qu'on examine la préparation avec un grossissement de 300 à 400 diamètres, on constate ce qui suit :

Tant que la température est inférieure à 56 degrés C., on n’observe pas d’altérations des hématies ; à 56 ou 57 degrés les hématies commencent à se déformer, elles deviennent sphériques et se séparent lorsqu'elles étaient empilées; sur les bords apparaissent de petites boules sarcodiques qui deviennent de plus en plus saillantes, refoulées qu’elles sont par la sortie d’autres boules

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semblables ; il se forme ainsi des prolongements de longueur et d'épaisseur variables qui sont

. animés quelquefois d’un mouvement oscillatoire.

A côté de ces prolongements adhérents aux hématies on trouve des boules sarcodiques libres, animées d’un mouvement brownien.

Ces déformations augmentent avec l'élévation de la température; à 70 degrés on ne trouve plus guère dans la préparation que de petits globules transparents, incolores, de volume variable (x-1 fig. 1).

Ranvier a indiqué un procédé commode pour étudier ces altérations des hématies : après avoir fait une préparation histologique de sang frais on chauffe un petit barreau d’étain et l’on pose pendant quelques secondes l’extrémité chaude de ce barreau sur un point de la lame couvre-objet; au point de contact, les hématies sont détruites; mais en s’éloignant de ce point on trouve des hématies qui ont subi des déformations de moins en moins profondes.

Talamon a appelé de nouveau l'attention sur

ces altérations des hématies et en particulier sur

ce qu'il a nommé les déformations flagellaires. Talamon produit ces altérations en plaçant la préparation de sang frais à 8 ou 10 centimètres d’un feu de coke très ardent; 10 à 12 secondes suffisent pour produire les déformations; la lamelle porte-objet appliquée sur le dos de la main

donne à ce moment une sensation de brûlure assez marquée. Ce procédé expérimental ne vaut pas les précédents : si l'on chauffe trop la préparation, tous les globules du sang sont détruits; ; d'autre part on ne sait pas à quelle température se produisent les déformations.

Ces déformations des hématies ne se produisent qu’à »7 degrés, c’est-à-dire à une température qui n’est atteinte que lorsqu'on chauffe le sang | par un procédé artificiel; nous ne les avons jamais observées dans du sang quin’avait pas été chauffé, alors même qu'il s'agissait d'individus profondément anémiés; or nous verrons plus loin que l’anémie est une condition prédisposante des déformations des hématies.

Lorsque le sang a été desséché avant d’être chauffé, les hématies supportent parfaitement une température de 100 ou 110 degrés, sans se déformer; la chaleur a même pour effet de les fixer dans leur forme et de leur permettre de résister à l’action de réactifs qui les altèrent profondé-. ment à l’état frais ou lorsqu'ils ont été simplement desséchés.

Les conclusions pratiques à tirer de ces faits” sont les suivantes : |

Lorsqu'on veut conserver du sang desséché, il faut avoir grand soin de ne pas le soumettre à une température égale ou supérieure à 57 degrés avant

de l’avoir desséché presque complètement; faute

de quoi les hématies subissent de profondes altérations.

En second lieu, il faut se rappeler que les espaces clairs qui se montrent dans les hématies desséchées sont fréquemment le résultat de la dessiccation.

La congélation altère profondément les hémaes, l'hémoglobine se dissout dans le sérum, et les hématies réduites au stroma deviennent très pâles, puis incolores ; en même temps elles prennent la forme sphérique.

L'eau altère très rapidement les hématies, l’hémoglobine est dissoute, les hématies décolorées deviennent très difficiles à voir, elles perdent leur forme discoïde caractéristique pour prendre la forme sphérique. Il suffit de déposer sur la lamelle couvre-objet qui reçoit le sang une légère buée avec l’air expiré pour que quelques globules rouges se décolorent et prennent la forme sphérique (Hayem).

Il arrive souvent, lorsqu'on se procure du sang par la piqûre du doigt, que le sang se mélange à un peu de sueur; les hématies s’altèrent rapidement dans ces conditions, elles prennent l’aspect crénelé, avec des espaces clairs; un certain nombre d’entre elles se décolorent et deviennent sphériques.

L'action de l’eau se produit surtout sur le sang

frais ; elle est moins rapide et moins profonde sur

les hémalies desséchées, surtout lorsque la dessiccation date de plusieurs jours; néanmoins, quand on veut faire agir des solutions aqueuses sur du sang desséché, il faut toujours employer au préalable un des moyens de fixation des globules rouges que nous indiquerons plus loin.

On peut se servir de la propriété qu'a l’eau de détruire les hématies pour mettre en évidence certains éléments parasitaires que l’eau n'’altère pas (éléments en croissant dans le sang palustre).

Nous n'avons eu en vue jusqu'ici que les allérations des hématies provenant d'individus à l’état sain ; sous l'influence d'états pathologiques variés, les hématies peuvent subir des altérations dont nous devons maintenant nous occuper.

La vulnérabilité des hématies augmente sensiblement chez les anémiques. :

Dans certains cas d’anémie grave, les hématies s’agglomèrent dans les préparations; au lieu de globules empilés, on trouve des îlots lobulés jaunâtres (Hayem).

Chez les anémiques les hématies sont moins nombreuses et moins colorées que chez l’homme sain. Nous ne pouvons que mentionner ici les belles recherches de Hayem et Malassez sur la numération des globules et sur le dosage de lhémoglobine; l'exposé de ces recherches nous éloignerait de notre sujet, c’est-à-dire de l'étude des altérations des éléments figurés du sang pou-

rt

vant donner lieu à confusion avec des hématozoaires.

Les hématies altérées des anémiques montrent presque toujours, lorsqu'on dessèche le sang, des vacuoles ou mieux des taches claires qui sont dues soit à une rétraction de l’hémoglobine, soit à une déchirure de l’hématie ; dans le premier cas l’éosine donne encore une coloration, très pâle, il est vrai, au niveau de la tache claire; dans le deuxième cas, après coloration par l’éosine, la tache reste claire, incolore. |

Lorsqu'on chauffe ou lorsqu'on comprime ce sang malade, on produit les altérations décrites ci-dessus, mais avec une facilité d'autant plus grande que les hématies s’éloignent davantage: du type normal. On peut observer à 50 degrés, par exemple, les altérations qui d'ordinaire ne se produisent qu'à 57 degrés.

Hayem a appelé l’attention sur certaines déformations des hématies qui s’observent dans les anémies profondes; ces déformations ont été rattachées par lui aux quatre types suivants:

1° Certains globules rouges parfois très volumineux ont la propriété de changer de forme sur place (contractilité amiboïde).

20 Certains globules rouges montrent des prolongements en doigt de gant immobiles ou mobiles ; les mouvements de ces prolongements sont le plus souvent de simples oscillations; quelque-

fois il se produit un prolongement tentaculaire très délié.

5° Mouvement oscillatoire des globules nains qui restent en suspension dans le plasma.

4 Éléments se déplaçant dans la préparation (pseudo-parasites). Le plus souvent ces derniers éléments se présentent sous l'apparence de bâtonnets noueux, étroits, d’une longueur très variable.

« Ces pseudo-parasites sont animés d’un mouvement d'oscillation continue autour de leur axe vertical et, de plus, de mouvements d’inflexion suivant leurs faces. Il résulte de ce double mouvement et de l'irrégularité de leur contour que chacun d’eux considéré individuellement change constamment de forme, particularité qui, à elle seule, suffirait pour distinguer ces corps mobiles des parasites avec lesquels on pourrait les confondre.

« Tel élément qui, à certain moment, a l’apparence d'un bâtonnet, prend tout à coup celle d’une petite masse arrondie portant une sorte de flagellum. D’autres fois, le bâtonnet simulant une bactérie s’incurve pour prendre la forme d’un V ou d’un petit triangle. Dans d’autres cas encore l’élément prend l'aspect d’un diplocoque.

« Quelle que soit leur forme, tous ces petits corps se déplacent activement dans la préparation.» (Bulletin dela Soc. méd. des hôpitaux, 1890, p. 119.)

À Browicz a constaté que les mouvements décrits 20

par Hayem persistent pendant plusieurs jours dans des préparations faites aseptiquement et qu'on peut les provoquer en élevant brusquement la température du sang.

Il paraît évident, comme le dit Browicz, que ces mouvements ne sont pas d'ordre vital.

Mosso a prétendu qu’en injectant du sang de chien dans la cavité péritonéale d’un oiseau on constatait, trois ou quatre jours après l'injection, des déformations des hématies du sang injecté,

À analogues à celles que produit l'hématozoaire du paludisme.

Tous les observateurs qui ont entrepris de contrôler les recherches de Mosso ont constaté que ces assertions élaient inexactes. |

A. Cattaneo et Monti ont injecté dix-huit fois du sang de chien dans le péritoine des oiseaux (poulets et pigeons) d’après la méthode de Mosso, et ils ont examiné le contenu du péritoine à des époques variant du premier au quinzième jour après l'opération.

Le sang injecté se sépare dans les premiers jours en une partie liquide et. un coagulum; à mesure qu'on s'éloigne du moment où l'injection a eu lieu, la partie liquide diminue et le coagulum devient plus consistant.

On trouve dans la partie liquide et dans le coagulum des globules rouges (d'oiseau et de chien),

plus ou moins altérés, des globules blancs normaux ou granuleux, des cellules globulifères ou pigmentifères analogues à celles qui ont été décrites par Bizzozero dans la moelle des os, qui paraissent dériver de l’endothélium péritonéal. Ces éléments du sang altéré ne sauraient être confondus avec les éléments parasitaires du sang palustre.

Marchiafava et Celli, qui ont reproduit l’expérience de Mosso, sont arrivés aux mêmes conclusions que Cattaneo et Mont.

Les hématies elliptiques présentent souvent des espaces clairs ou vacuoles qui sont parfois extrémement nombreux dans les préparations de sang desséché.

Nous avons déjà eu l’occasion de signaler la déformation particulière aux globules elliptiques qui consiste dans l'apparition de stries rayonnant du centre vers la périphérie; il s’agit d’un plissement de l’hématie qui a une certaine analogie avec la déformation qui donne aux hématies des mammifères l’aspect crénelé.

Les effets de la chaleur, de la dessiccation, de l’eau sur les hématies elliptiques sont, à très peu près, les mêmes que sur les hématies rondes. Le noyau des hématies elliptiques résiste à la destruction par la chaleur ou par l’eau.

Ici, comme pour le sang de l’homme, la résis-

tance des hématies est assez variable; les hématies des grenouilles et des tortues qui ont été soumises à un long jeûne sont très difficiles à conserver; les hématies sont pâles, elles se déforment rapidement et présentent de nombreuses vacuoles.

III. Examen histologique du sang. Moyens de fixation des éléments normaux. Action de quelques réactifs colorants sur le sang. — L'étude des hématozoaires doit être faite en premier lieu dans le sang frais et pur; c’est le meilleur moyen de se préserver d’un grand nombre de causes d'erreur. Lorsque le sang frais a été recueilli dans de bonnes conditions et qu’on procède immédiate-

- ment à l'examen, les éléments normaux du sang

se présentent avec leur aspect caractéristique, et les hématozoaires se distinguent facilement au milieu de ces éléments, d'autant plus qu’ils sont animés parfois de mouvements très vifs et très caractéristiques.

Dans le sang desséché les éléments normaux ont subi assez souvent des altérations : formation d'espaces clairs, fragmentation des hématies, etc., qui peuvent jeter le doute dans l'esprit de l’observateur lorsqu'il s’agit de la recherche des hématozoaires les plus inférieurs; enfin on ne trouve plus que les cadavres des hématozoaires, qui peuvent être déformés, difficiles à reconnaitre.

Lite

-pres ont été préparées à l'avance. En pressant le

24 SANG NORMAI.

Examen du sang frais. — Le procédé le plus simple pour étudier le sang de l’homme consiste à piquer le bout du doigt avec une épingle flambée ; des lamelles couvre-objet et porte-objet bien pro-

doigt piqué on fait sortir une goutte de sang qui. est recueillie sur une lame porte-objet ct recouverte aussitôt avec une lamelle; le sang s'étale,

-on presse légèrement sur la lamelle couvre-objet

de façon à obtenir une préparation suffisamment mince, le sang en excès est absorbé sur les bords de la lamelle avec un linge fin.

Les hématozoaires se présentent en général sous des formes trop caractéristiques pour qu'on soit exposé à les confondre avec les poussières qui se trouvent en suspension dans l'air ou à la surface de la peau; il n’est donc pas indispensable de recueillir le sang avec pureté; il est bon toutefois de se mettre autant que possible à l'abri des poussières qui gêneraient l'examen.

Si le doigt du malade dont on veut examiner le sang n’est pas propre, il faut le laver à l’eau d'abord, puis à l’alcool, en ayant soin de le sécher complètement avant de faire la piqûre. Pour peu que la peau soit humide, le sang s’étale, se mélange à l’eau, etles hématies se déforment; au contraire, lorsque la peau est bien sèche, le sang qui sort par la piqûre forme une goutte bien limitée et saillante qu'il est facile de recueillir et dans laquelle

les hématies ne se déforment pas, si l’on opère

assez vite.

Lorsque la peau est couverte de sueur, il faut s’efforcer d'éviter le mélange du sang à la sueur; on sèche la peau et l’on recueille le sang aussi vite que-possible à sa sortie de la piqûre.

On peut border à la paraffine, mais cette précaution n’est pas indispensable; le sang qui se coagule sur les bords de la préparation, au contact de l'air, fait lui-même obturation; il reste liquide au centre pendant plusieurs heures, ce qui est

‘suffisant pour les examens ordinaires. Lorsqu'on

veut faire l'examen du sang avec de forts grossissements ou qu'on se propose d'étudier les mouvements des éléments parasitaires, il est bon de border à la paraffine afin de supprimer les mouvements que l’évaporation du sang imprime aux hématies.

Pour examiner le sang des oiseaux, on fait avec une épingle une piqûre à une des veines du pli de l'aile, après avoir enlevé quelques plumes; le sang est recueilli avec une pipette.

Pour avoir du sang du rat, on saisit la queue de l'animal avec une longue pince à travers les bar reaux du piège et l’on en coupe l'extrémité; le sang qui s'écoule est recueilli directement sur une

lamelle couvre-objet.

Chez la grenouille, on coupe un des doigts de l’une des pattes.

Chez le lézard, on coupe l'extrémité de la queue: - Le grossissement à employer pour l'examen varie naturellement avec la nature des hématozoaires qu'on veut étudier.

Examen du sang desséché. — Pour obtenir de bonnes préparations de sang desséché il faut se

mettre à l’abri de toutes les causes d’altération

des hématies qui ont été signalées plus haut; on opérera vite pour éviter l’action de l’air, on ne comprimera pas trop fortement le sang, on aura soin de ne pas le porter à la température de 57 avant d’avoir oblenu une dessiccation presque complète. Bien qu'ils’agisse d’un procédé d'examen. très simple, nous croyons qu’il n’est pas inutile. d'entrer ici dans quelques détails.

1° On nettoie avec soin quelques lamelles «

couvre-objets dans l’eau d’abord et au besoin dans l’eau additionnée d’acide chlorhydrique, puis dans l'alcool.

2° On recueille une goutte du sang à examiner … sur une lamelle couvre-objet.'

3° On applique aussitôt sur la première lamelle . une deuxième lamelle, de manière que le sang s'étale en couche mince et uniforme entre ces deux lamelles.

4 On fait alors glisser les lamelles l’une sur l’autre, on les sépare et on les agite dans l’air; le sang, qui forme une couche très mince à la sur-

Ge

TECHNIQUE. to

face de chaque lamelle, se dessèche rapidement.

9° On saisit à l’aide d’une pince chaque lamelle et on la passe trois fois dans la flamme d’une lampe à alcool, en ayant soin de ne pas tourner du côté de la flamme la surface recouverte de sang.

Le sang desséché peut être examiné sans autre préparation, sans coloration, et ce procédé donne d'excellents résultats pour certains éléments para-

sitaires. La lamelle couvre-objet est placée sur

une lame porte-objet et l’on borde à la paraffine; la préparation est montée à sec; le baume rendrait les éléments trop transparents.

Lorsqu'on se propose de soumettre les préparations desséchées à l’action des réactifs colorants en solution aqueuse, il est bon de fixer les hémalies plus complètement qu’elles ne l’ont été par la dessiccation et par la chaleur.

Le mélange à parties égales d’alcool et d’éther, conseillé par Roux, fixe très bien les hématies; on verse quelques gouttes de ce mélange à la surface de la lamelle recouverte de sang desséché, on laisse en contact pendant quelques secondes;

on sèche après avoir fait écouler le liquide en

excès.

Les vapeurs d’acide osmique fixent bien les hématies, mais elles sont d’un emploi moins commode que le mélange d’alcool et d’éther. Le sang desséché est laissé pendant quelques secondes

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au-dessus de l’orifice d’un flacon à large tubulure 2 renfermant une solution d'acide osmique au centième. 4

On peut obtenir aussi la fixation des hématies par l’action prolongée de la chaleur (étuve sèche, tem= pérature de 100 degrés pendant 15 à 50 minutes), ou par les solutions des acides picrique ou chromique (acide picrique en solulion concentrée, : acide chromique en solution au 1000). 12

Réactifs colorants. — Lorsqu'on veut colorer | les éléments du sang frais, il faut avoir soin d'employer des réactifs colorants qui ne déter-* minent pas la coagulation du sang et qui n'allèrent pas les hématies. Les matières colorantes seront dissoutes dans du sérum naturel ou artificiel ou 4 bien introduites directement dans le sang. 4

Le procédé suivant a été recommandé par # Soulié : on dépose une goutte de la solution : alcoolique de bleu de méthylène sur une lame 4 porte-objet et on laisse évaporer; la goutte 4,2 sang est déposée au niveau de la tache formée par le bleu de méthylène et recouverte avec une lamelle, le bleu se dissout dans le sérum A méd. de l'Algérie, 1890, p. 250).

En général il est préférable de faire agir les 4 matières colorantes sur le sang desséché et fixé par un des procédés indiqués plus haut; on ob- !; tient des préparations persistantes. |