N =N—OH N—N—OH

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Or, ce sel de diazonium donne par copulation avec l’acide À résorcylique une coloration rouge orangée dont l’intensité peut être mesurée au photomètre, avec écran bleu.

M. PESEz transforme donc par décarboxylation tout le P. À. S. du milieu biologique étudié en méta-aminophénol et dose alors ce produit obtenu, par copulation avec l’acide Ê résorcylique provenant du P. A.S. luimême.

Voici la technique adoptée pour le sang. Nous avons systématiquement opéré sur le sérum après exsudation à la glacière, car il semble bien probable que la teneur en P. A.S$S. diminue assez notoirement au cours d’un séjour prolongé à la température ordinaire.

1 cm de sérum est additionné de 2 em’ d’eau distillée et de 2 em d’acide trichloracétique à 10 %. Après

agitation, on ajoute 5 em d’eau, on agite à nouveau et on filtre.

On obtient ainsi une dilution au dixième du sang à étudier.

Dans un tube à essai jaugé à 10 cm’, on introduit 2 cm de ce filtrat et 1 cm d’acide trichloracétique et on porte une demi-heure au B.M. bouillant, après avoir bouché le tube au coton cardé. Le P. A.S. est alors intégralement transformé en méta-amino-phénol. On met alors le tube dans la glace fondante et l’on attend cinq minutes environ pour que l’équilibre de température soit réalisé.

| Dans un deuxième tube à essai, jaugé à 10 cm’, on introduit aussi 2 cm du filtrat que l’on porte dans la glace fondante. Lorsque le premier tube est prêt pour la diazotation, on ajoute dans ce deuxième tube témoin 1 cm° d’acide trichloracétique, puis l’on ajoute les réactifs suivants dans les deux tubes maintenus dans la glace :

3 cm d’eau distillée ; 0,5 cm de solution de P. A. S. à 0,1 % ;

0,5 cm° de solution de nitrite de sodium à 1 %.

On attend trois minutes, puis on ajoute 2 cm’ de solution de carbonate de sodium à 10 % (en CO3 Na2 anhydre). Après quinze minutes de séjour à la température ordinaire, on complète à 10 em’ avec de l’eau distillée. On lit alors au photomètre l’intensité des colorations obtenues. (Nous avons utilisé un photomètre Bonnet Maury, écran bleu n° 12.)

On compare avec une gamme étalon préparée avec du P. A. S. sodique pur, cristallisé à 2 OH2 (soit 137 g. pour 100 g. de P. A. S.). Cette gamme est obtenue en mettant des quantités croissantes d’une solution aqueuse titrée de P. A.S. sodique dans une série de tubes à essais.

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On complète à 2 em avec de l’eau, puis l’on ajoute 1 cm’ d’acide trichloracétique à 10 % et l’on porte, comme dans le cas du dosage, une demi-heure au B.M. bouillant. Après quoi l’on opère la diazotation et la copulation comme précédemment.

L’on construit une courbe en portant en abcisse le P. A. S. évalué en * et en ordonnée les graduations du photomètre. À l’aide de cette courbe, on déduira les quantités de P. A. S. contenues dans la prise d’essai. Or, dans l’expérience précitée, cette prise d’essai est de 2 cm° d’une dilution au 1/10, soit 0,2 em’ de sérum. Il faudra done multiplier le résultat par 5.000 pour avoir la teneur en * par litre de sérum ou par 5 pour l’avoir en mg. par litre de sérum, qui est le mode d'évaluation que nous avons adopté.

L’on déduit évidemment la coloration de « base » donnée par le témoin non décarboxylé.

En ce qui concerne l’urine, l’on fait d’abord une dilution au 1/100° et l’on opère sur 2 em comme pour le sang. Le résultat devra alors être multiplié par 0,05 pour avoir la concentration en grammes par litre.

Pour le liquide céphalo-rachidien, dont les teneurs sont plus faibles que celles du sang, nous ne faisons qu’une dilution au demi, soit 3 em° de L.C.R., 0,6 cm° d’acide trichloracétique et 2,4 em° d’eau. Le résultat en mmg. par litre est alors directement obtenu.

Pour les selles, nous avons mis au point une technique d’extraction qui n’est pas parfaite, mais qui donne cependant une approximation intéressante.

Nous faisons d’abord une dilution au 1/10° dans l’eau distillée d’une prise d’essai de matières fécales (5 à 10 gr. environ), après les avoir triturées au mortier, en ayant soin de peser la totalité des matières fécales, soit 1/p le rapport de la prise d’essai au poids total des fèces de vingt-quatre heures. On introduit alors cette prise d’essai dans un flacon à large goulot bouché émeri

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et contenant des billes de verre. On ajoute la quantité d’eau calculée pour avoir une dilution au 1/10° environ, et l’on soumet à l’agitation mécanique pour obtenir une suspension bien homogène. On acidifie alors par de l’acide chlorhydrique et l’on ajoute environ 100 em d’acétone. On agite à nouveau, puis l’on introduit du sulfate d’ammonium sec pour relarguer l’acétone et l’on sépare le solvant dans une ampoule à décantation. On évapore sous vide, à froid, l’acétone et reprend le résidu par un volume V exactement mesuré de soude. N/10° environ. On traite un volume déterminé de cette dernière solution comme les dilutions de sang ou d’urine, en ayant soin cependant de faire un essai sur la solution pure et sur la solution diluée au dixième, car les concentrations de P. A. S. dans les selles peuvent être parfois assez importantes.

Dans le cas d’un volume de dilution au 1/10° représentant un centième de V, on aura le chiffre de l’élimination en grammes, par 24 heures, en multipliant le

chiffre en V donné par la courbe étalon par

Ce dosage ne peut être qu’approximatif pour les raisons suivantes :

1° Il serait nécessaire, pour être rigoureux, non pas de traiter une prise d’essai de selles, mais la totalité de celles-ci, car le médicament n’est pas uniformément réparti comme dans un liquide, et bien des fois il nous est arrivé de retrouver, dans les selles, des dragées à peine délitées ;

2° L’extraction par l’acétone n’est pas totale et le coefficient de partage du P. A. S. entre la suspension aqueuse et le solvant n’est pas négligeable.

Néanmoins, cette technique nous a permis d’évaluer les quantités de P. A.S. transitées par l'intestin au cours de traitements par voie buccale.

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Certaines précautions sont cependant indispensables pour obtenir par cette technique de diazotation des résultats valables.

1° Il est très souhaitable de préparer extemporanément d’une part les solutions titrées de P.A.S. destinées à faire la gamme ou à servir de copule, d’autre part, la solution de nitrite de sodium ;

2° Le temps de diazotation doit être assez strictement mesuré et trois minutes correspondent à la durée optima;

3° La température de la glace fondante est indispensable pour obtenir un bon rendement et une diazotation, effectuée par exemple à 20°, conduit à une erreur par

défaut, d’environ 30 % (16) ;

4° IL est nécessaire, bien entendu, d’agiter soigneusement chaque tube après l’introduction de chaque réactif.

En ce qui concerne les résultats, un point intéressant mérite une attention particulière. Lorsque l’on fait un témoin avec le sérum d’un sujet non soumis à un traitement médicamenteux comportant du P. A. S. ou divers produits à fonctions amines, on obtient toujours une coloration de base très faible et peu variable.

Lorsqu’au contraire, l’on fait un témoin avec le sérum d’un sujet traité au P. A.S., l’on obtient parfois une coloration de base très importante. Nous en avons déduit qu’une portion non négligeable du P. A.S. pouvait probablement être décarboxylée dans l’organisme et transformée en méta-amino-phénol et les taux de méta-amino-phénol ainsi évalués sont parfois très importants dans les urines.

Enfin, il paraît très souhaitable d’exécuter les dosages assez rapidement après le prélèvement ou, au pis aller, de conserver les échantillons à la glacière.

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