D. — COLORATION DES CILS

a) Méthode de Lôfjler-Nicolle-Morax. — Pour la coloration des cils il importe de ne faire usage que de lamelles ou lames bien propres, qu’on lave à l'alcool, puis à l’éther, et sur lesquelles on laisse tomber avec une anse de platine une goutte de culture jeune, diluée dans l’eau stérile. Après dessiccation à l’étuve, sans passer sur la flamme, on verse sur la préparation une grosse goutte du mordant ci-après, en chauffant jusqu'à émission de vapeurs ; on lave aussitôt à l’eau distillée et on recommence de même 3 ou 4 fois.

Mordant (encre de fuchsine) :

Tanin (à l’éther) sol. aq. à 25 p. 100. . 10%6c Sol. sat. à froid de sulfate ferreux. . . 5 cc. Sol. alcool. saturée de fuchsine , . . . 1 cc.

Colorer ensuite par la fuchsine de Ziehl à chaud jusqu’à émission de vapeurs, pendant 10 à 15 secondes. Laver aussitôt à l’eau distillée, sécher, monter.

b) Méthode de van Ermengem (très élégante, recommandée).

10 Fixateur : Faire agir pendant une demi-heure à froid ou 5 à 10 minutes à chaud, sur platine chauffante

Acidelosmique à 2%... 1 1 cc.

LAON DO MOSS OR 2 cc.

AE ACétIqUE OS PR IV gtt.

Laver soigneusement à l’eau distillée.

2° Sensibilisateur : solution aqueuse de nitrate d'argent de 0,5 à 2 p. 100. Faire agir pendant 2 à 3 minutes jusqu'à ce

que les gouttes prennent une teinte grisâtre. Ne pas laver. Plonger 1 à 2 minutes dans :

39 Réducteur :

Acidersallque.s tt A RO RE MP ETS LANIN PNE ue CE PSE AR 3 gr.

Acétate de soude foi uns MA PRET 10 gr.

Eau’disthlces MOIS CR 300 gr.

Après lavage, sécher rapidement ; examiner. Si la coloration n'est pas suffisante, on recommence, après lavage, la sensibilisation et la réduction. Renouveler la solution argentique dès qu'elle commence à noircir.

c) Méthode de Pütfield, modifiée par Benignetti et Gino.

Solution colorante : À 3 centimètres cubes de solution alcoolique saturée de violet de gentiane, on ajoute 5 centimètres cubes d’une solution aqueuse saturée d’alun et 5 centimètres cubes de la solution suivante :

Sulfates de! An COR AMEN OR PRE RE 1 gr.

Taniméis: ah TR Gas RM AE TIRE 10 gr.

Fau 4 E 3, 0 ANNE ER NC TELE 100 cc.

On dépose quelques gouttes de la solution colorante ainsi préparée sur la lamelle, sur laquelle on a préalablement fixé par la chaleur une gouttelette de l’'émulsion des microbes dont on veut colorer les cils. On chauffe directement à la veilleuse d’un bec Bunsen jusqu’à émission de vapeurs ; on lave soigneusement à l’eau et on sèche à l'air, puis on monte dans le baume.

Cette méthode, très simple, donne de bons résultats.

d) Méthode d'Edgar Lancereaux.

1° Mordant :

Chlorure/d'antmome. ee. MNT Lot.

Tan CONTE PSE PER UNeE 5 gr.

Formol. . TRE PPT ER ET > 10 ce.

Eaudistiliee ONE 100 cc.

‘20 Sensibilisateur :

Natrate d'argebt en ne 1 gr.

Eau:distiliée "CCR RENE 20 cc.,

3° Réducteur :

Métol TE A DENT EE “re ler.

Eau distillée. . AFRO 20 ce.

(On peut le stabiliser avec le sulfite de soude en ajoutant 5 grammes de ce produit.)

Utiliser des lames propres, lavées à l'alcool. Mettre des gouttes séparées d’une dilution de culture de 24 heures dans de l’eau ordinaire (l’eau physiologique précipiterait les sels d'argent et rendrait la préparation opaque). Faire sécher à l'étuve.

1° Mettre le mordant sur la préparation à colorer; chauffer fortement au Bunsen vers 60° ; laisser refroidir 10 minutes. Laver à l’eau courante, puis à l'eau distillée.

2° Faire agir le nitrate d'argent ammoniacal. On peut obtenir un noircissement de la préparation immédiatement. On chauffe légèrement sur la flamme du Bunsen jusqu’à ce qu'on obtienne une teinte métallique, laver largement à l’eau ordinaire ou à l’eau distillée.

30 Faire agir le réducteur au métol pendant une minute.

Laver à l’eau ordinaire, sécher et examiner à l’immersion.