TABLEAU VII

Apperçu général des opérations.

Butanol 1) Rubiazol inchangé > Dosé comme Rubiazol- C inchangé selon la , ’ méthode au butanol 2) Rubiazol-C inchangé DE R« Hydrazoique É Para-aminophényl

sulfamide Ni - HCI > Sulfanilamide X 2 —

. A DU Hydroxylaminophényl- —@—————— Te Rubiazol-C =, S«

Acide sulfanilique Oxya z oique

3) Tous les corps cités

: Hydrolyse + Ni-HCI

Us no) te D HUE à > Sulfanilamide X 2 = nie dérivés reti Rubiazol - C

acétylés — ,T*

L'opération (3) donne le Rubiazol-C total.

(2) moins (1) donne les métabolites d'hydrogénation.

(3) moins (2) donne les dérivés acétylés.

Nous ne faisons donc pas des dosages séparés des différents dérivés d’hydrogénation ce qui constituerait une tâche difficile, vu l'instabilité de quelques-uns d’entre eux. Par exemple le dérivé hydrazoique se réoxyde facilemient à l'air. D'autre part ces dérivés prennent naissance en bonne partie dans l'intestin par les fermentations et putréfactions qui s'y déroulent et dont l'intensité dépend de l'alimentation et change au jour le jour. C’est justement là un avantage de notre méthode, de contourner la question alimentaire, nous recevons des produits dégradés avec l'urine, nous les dégradons encore et complétons l'oeuvre commencée dans l'organisme. Nous poussons la dégradation jusqu'au dernier terme encore caractéristique, et nous saisissons tout ce qui est encore cyclique et porte une fonction amine. Au lieu d'écrire en pure perte tel ou tel dérivé hydrogéné intermédiaire dont l'importance varie avec la nature du contenu intestinal, nous cherchons seulement à obtenir ce qui est sulfamide en lui.

Pour ce qui est de l’acide sulfanilique, cité par Scudi (16), plus dégradé déjà, nous le dosons comme p-aminophénylsuifamide. La faute n'est pas grave, le poids moléculaire du p-aminophényl-sulfamide est de 171,19, celui de l'acide sulfanilique de 173,19.

Un écart plus grave est causé par la présence de p-aminophénol, dont Paget signale la présence et dont le poids moléculaire est de 109,12. Ce corps reste le seul susceptible d'apporter des troubles dans nos résultats.

Nous nous sommes bornés à déceler la présence de ces métabolites.

Pour la recherche du p-aminophénol et de l’hydroxylaminophénylsulfamide, nous nous sommes servis de la méthode de Pucher et Day (29):

À 10 cc. d'urine on ajoute 0,5 cc. d'HCI et on place 10 minutes

au B-M. On laisse refroidir, on neutralise et épuise à l’éther.

Les épuisements sont évaporés, mais avant évaporation totale

on reprend par de l’eau dont on ajoute 20 cc. Ces 20 cc. sont

ensuite divisés en deux. Sur l’une des parties on cherche le p-

aminophénol, sur l’autre l’hydroxylparaaminosulfamide. Para-aminophénol: Chauffer au B-M les 10 ec. et 2 ec. d’une solu-

tion de phénol à 0,5°/. On refroidit et oxyde avec 2 ec. de chlo-

rure de chaux à 2°/. Quand la réaction est positive, on obtient une Coloration bleue dont le maximum est atteint en 10 minutes.

Hydroxylaminophénylsulfamide: Les 10 ec. sont neutralisés en présence de phénolphtaléine, puis on ajoute 10 ec. d'alcool absolu. On laisse refroidir et on ajoute 2 gouttes de chlorure de benzoyle et 2 cc. d’acétate de soude à 2°. On mélange et on verse 2 ec. d'un réactif contenant:

Chlorure ferrique 05, HCI PROC:

Eau dist. CSADIDORECE:

En cas de présence d’hydroxylaminophénylsulfamide on obtient une coloration violette. Nous avons recherché l'hydrazoique par oxydation en Rubiazol-

5 cc. d'urine sont extraits au butanol, 5 autres sont oxydés par le perhydrol et extraits ensuite au butanol. S'il y a une différence de coloration entre les deux extraits butanoliques, il y a présence d’hydrazoique.

Toutes ces recherches ont donné des résultats très inconstants, quelquefois les réactions étaient légèrement positives, quelquefois elles étaient nettement négatives.

Les urines après ingestion de Rubiazol-C contiennent cependant toujours, en quantité appréciable, un produit immédiatement diazotable par la méthode de Marhall. Nous pensons qu'il s’agit là surtout du p-aminophénylsulfamide libéré. A plusieurs reprises nous avons opéré cette diazotation sur l'urine diluée qui n’a pas subi les manipulations de réduction et d’hydrolyse. Les colorations qui se formaient s’approchaient dans bien des cas de la coloration obtenue après réduction. Même si l’on considère que dans notre technique, une partie du sulfamide reste adhérente au papier-filtre et que de ce fait, l'écart entre les valeurs par diazotation après réduction, et celles obtenues par diazotation immédiate, où l’on n’opère pas de filtration, devient plus ptit, il faut reconnaître que la fraction immédiatement diazotable, donc probablement p-aminophénylsulfamidique, est de loin la plus importante et l'emporte largement sur les autres métabolites tel l’hydrazoique, l’hydroxylaminophénylsulfamide etc. ainsi que sur le Rubiazol-C qui, nous le répétons, n'apparaît dans les urines qu’en faible quantité.

Avant de procéder aux mesures de l’'Hémikrèse et de la Protorrhée ce qui constitue la partie essentielle de notre travail, nous avons tenu à vérifier notre méthode sur des urines qui S’approchaient autant que possible d’urines naturelles, après ingestion de Rubiazol-C. Ces urines étaient préparées à partir de solutions urinaires de Rubiazol-C, de p-aminophénylsulfamide, du dérivé acétylé

de cette dernière. Ces solutions mélangées dans des proportions variées furent soumises au dosage d’après le point 3 de la méthode. Par le calcul nous avons pu prévoir le résultat à obtenir.

Par exemple: Nous mélangeons

0,5 cc. de la solution à 0,0025°/ de Rubiazol-C

1,5 cc. de la solution à 0,0025°/ de sufanilamide

0,5 cc. de la solution à 0,0025°/ de l’acétylsulfanilamide.

2,5 cc. d'urine au dixième après réduction et hydrolyse ce mélange doit donner au photocolorimètre la somme des valeurs correspondantes à chacun des composants, dans ce cas 33,5. C’est la somme des valeurs partielles:

Rubiazol-C 4 Sulfanilamide 28 Acétylsulfanilamide — — 6,5

Nous avons répété cette expérience bien des fois, dans le tableau IX nous publions quelques-uns de nos résultats. Les résultats furent en général comme prévus, à une condition, les solutions des différents sulfamides doivent être du même jour, une solution vieille d’un jour donne des valeurs sensiblement trop basses.

L'exemple 3 du tableau IX, montre les valeurs trouvées pour des solutions préparées la veille.