MÉTHODE DE COLORATION DES CILS
-Tanïn à 50 p. 100 (filtrer) . . , . . . . 100 cent. cubes, Solution saturée da sulfate ferreux . . 50 — Sol. alcoolique saturée de fuchsine . . A0
et chauffer, à quatre reprises différentes sur la flamme jusqu'à dégagement de vapeurs. Laver à l'eau, Colorer au Ziehl. Laver, etc. Suivant que le microbe a une sécrétion alcaline ou acide, ôn neutralise avec quelques gouttes d'une solution à 40 p. 100 de soude on d'acide sulfurique.
Procédé de Rossi (1900). — Se servir d'une culture fraîche, sur agar, ne contenant pus de chlorure de sodium en excès, On verse sur la lamelle : & à 5 gouttes d’une solution de Ziehl el une goulte de :
Solution aqueuse à 4 p. 1000 de potasse Le TRS 100 grammes.
Acide tannique . . . . . EP Abe à E
(Dissoudre à chaud.)
On laisse en présence 15 à 25 minutes, On lave et on monte.
ous ces procédés ! sont très délicats. Il ne faut pas employer üné culture en bouillon, mais une dilution de culture solide. Les microbes doivent être peu abondants et espacés. La lamelle sera bien propre, flambée (contre les matières grasses), et desséchée à l'abri de la poussière. On fixera sur la flamme de la lampe à alcool ; le bec Bunsen altère les cils.
Srnavs dit avoir vu les cils de bacilles cholériques vivants, en éxaminant une goutte de culture mélangée avec une goutte de liquide de Zichl très dilué. Ge procédé échoue, en ous cas, avec le B. d'Eberth et le Colibacille.
D, COLORATION DES MICROBES DITS ACIDOPHILES (B. TUBERCULEUX, B° DE LA LËPRE, AUTRES HACILLES AGIDOPHILES). — Kocu* (1882) a
M Voir In Revue générale de Rewixcen : Gazelle médicale des hôpi- Lance mililaires, 1896, ne 3.
ÆKocu, Die Æliologie der Tuberculose, Mit. a. d. k Gesundheitsumte 11, 1884,
EXAMEN MiGnOsconQue DE
coloré, le premier, les bacilles tuberculeux par Le bleu de me thylène alcalinisé par la potnsse; le mat était recoloré en brun avec la vésuvine. Le procédé n'a qu'un intérêt historique. Eunucn, quelques semaines après la découverte de Koeu substitue l'aniline à la potasse, ayant remarqué que le violel de gentiane, qui est très impur et contient de l'aniline, colorait mieux que Le violet de méthyle, Wriçeur, Koca perfectionnent le procédé d'Eunricn.
ph im substitue à l'aniline un autre corps de la série aromatique : l'acide phénique, et montre que l'alcalinité n'est pas indispensable. Paion emploie l'essence de térébenthine à la place de l'huile d'aniline; le thymol (Bugérn), le borax (Saut), l'ammoniaque (Wecenr) sont successivement essayés. KocH, Étmaon croyaient que le Bacille tuberculour avait une réaction tout à fait spéciale. Licurmmn, Gracom, Per, BAuMGAnTEN montrent que le Bacille tuberculewr se colore bien sans rien ajouter aux solutions de couleurs d'aniline, mais il faut le laisser longtemps en contact et chauffer; le Bacille de Koch se colore donc plus dificilement et se décolore plus lentement par les acides-miméraux que les autres microbes, Gependant, en faveur d'un protoplasma à réaction spéciale, on peut rappeler qu'Ennuion a montré, en 1886, la décoloralion presque écifique du bacille, coloré dans une solution Simple, par un ü dans une solution concentrée de bisullite de soude, et que us a retiré du corps des bacilles une matière amorphe ut la réaction d'Ehrlich.
son travail de 1897, Koch prouve définitivement que la colorants du: Bacille tuberculeux n'est pas due à la e d'une cuticule quelconque, mais qu'elle tient déci- Lune subsiance, qui. même isolée, à l'état amorphe, Êm propriété de rester colorée par la fuchsine à traitement par l'acide azotique dilué et un acide gras, non saturé, insoluble dans l'alcool le dans l'éther, très diflicilement saponiliable. du corps dés bacillés au moyen d'une soluude caustique; les bucilles perdent alors us spéciales, Get acide gras forme une
LOTATION DC N, TUBRRCULEUX 281 mé à la périphérie du bacille, une véritable
Ajoutons que le Bucille de la lépre présente les mêmes propriétés. Pour Nerssen, Küuxe, Bonvox-Urrreouzzi, il se colo. rerait plus facilement par le bleu de méthylène alcalin; pour Lusreanrex, il résisterait mieux (après coloration par l'Erdieh) à l'action décolorante d'une solution à 4 p. 400 d'hypochlorile de soude; pour Neissen, BAUMGARTEX, il pourrait se colorer à froid dans un bain simple.
Le Bacille de La tuberculose aviaire se coloré plus rapidement que celui de la tuberculose des mammifères.
Les Bacilles du smegma (Avvauez el TaveL) ét du cérumen (Gorrstein) ne présentent les réactions du Bacille de Koch que grâce à leur manteau graisseux provenant du milieu amhiant (Brexsrouk).
On a découvert récemment toute une série de bacilles, ayant les mêmes réactions colorantes que le bacille de Koch, on les x appelés plus spécialement : acidophiles (voy. p. 518).
On emploie plus volontiers les rouges que les violels; ils tranchent mieux à la Inmière artificielle, et se conservent plus longtemps: On préservera avec soin les lamellés des matières grasses qui empêchent les colorations,
Woiei le détail des principales méthodes.
40 Procédé d'Ehrlich. — Séjour d'une demi-heure, ou plus, à froid, de quelques minutes, à chaud (jusqu'à dégagement de Napeurs), dans la solution suivante à faire au moment de s'en. Servir :
: BAT RINE 100 cent. cubes.
Sol. alcoolique saturée dé fuchsine ou de violet de méthyle. - . . . 4 2... fl
agile ensuite la lamelle pendant quelques secondes
Acide nilrique (pur d'acide nitreux) .
he.
b = nn
we dans l'eau, et la lamelle reprend en parlie sa colora=
La
tion (le sel triacide peu coloré formé par l'acide, se décompose, devient monoacide, plus coloré). On repasse dans la solution acide, et ainsi de suite jusqu'à décoloration de la lamelle qui reste jaune pâle (fuchsine) ou verdâtre (violet). La décoloration ne doit pas être absolument complète ; elle ne s'obtient jamais pour les laches de matière colorante. Une décoloration trop complète décolorerait aussi les bacilles tuberculeux. On lave ensuite à l'alcool à 60° (Kocw), à l'eau; on sèche et on monte. On peut auparavant recolorer le fond en bleu si le bacille est rouge, en rouge s'il est violet.
2 Procédé de Ziehl-Neelsen. — La technique est ln même que pour le procédé d'Ehrlich avec les solutions suivantes :
{ Fuchsine. . . . . . . 1 grurume.
L A. phénique - . . . . Se — Solution colorante j pin delllées 400 —
| Alcool absolm . : . . 40 — (Quelques minutes à chaud, dégagement de vapeurs.)
Elle se conserve indéfiniment,
{ Acide sulfurique. : 2%
‘ Solution décolorante TT PNR RE
(Quelques secondes.
Laver et colorer dans une solution aqueuse de bleu de m6thylène. C'est le procédé le plus courant, — La figure 478 donne un spécimen du résultat.
% Procédé de Hauser (le meilleur). — Le temps délicat du procédé de Ziehl est la décoloration. Il faut décolorer suflisamment pour que seuls les bacilles tuberculeux restent colorés: il ne faut pas aller jusqu'à décolorer ceux-ci. Le procédé d'Hausen (1898) remédie à cet inconvénient.
On opère comme pour le procédé de Ziehl; seule la solution décolorante est changée. Un acide organique (l'acide lactique) est substitué à l'acide minéral. 11 décolore en dissolvant, au
\ Avoir soin de verser l'acide sulfurique dans l'eau et non l'eau dans l'avide de crainte de briser le récipient.
MÉTHODE DE COLOMATION DU WU. TÜUUERCULEUX 283
lieu de décolorer en substituant un sel triacide incolore au sel monoacide très coloré, On a, ainsi, un temps beaucoup plus long entre la décoloration suflisante et la décoloration trop prononcée,
On colore donc avec le Ziehl. On décolore avec une solution alcoolique à 2 p. 100 d'acide lactique. La décoloration est suili-
Préparation € bats tuberculeux.
tiehl. Les Haciller de Koch sont rouges. Gr. — 1 #00 D.
Coloration par le procédé de
iger sans inconvé-
sante en quelques secondes el peul se prolc ments pendant une demi-heure. C'est donc un proc tieéllement pratique, recommandé par Lesreun qui l'a étudié soigneusement dans mon laboratoire,
A0 Procédé de Kühne (un des meilleurs). — Bones a fait connaître, en 1893, l'excellent procédé suivant dû à Künxe, et resté inédit: L'agent de différenciation est l'aniline chlorhydrique, qui
essen-
décolore très bien sans nuire aux lissus, et dont l'action peut être prolongée longtemps sans décolorer les bacilles; l'aetion ultérieure de l'alcool décolore tout, sauf les Pees en quelques secondes.
Laisser dix à quinze minutes dans le liquide de Zion. - Faire passer quelques secondes dans une solution d'aniline rte à 2 p. 1000.
lPlonger rapidement dans alcool.
Monter.
5° Procédé de B, Fræntel. — Le premier temps est le même que celui du procédé d'Eunuieu. On'décolore et on recolore avec une solution unique {méthode substitutive) :
ABOOR D0e,, 1. , sm us 50 grammes.
A 5 tr fe pts, MOTS Acide nilrique pur . : , ,.- . ,,.. 2 — Bleu de méthylène . - 2... . 4. en excès.
Agiler et filtrer. On passe sans lavage du premier bain (luchsine) dans le second et on laisse une à deux minutes. Lavage à l'eau, déshydratation par l'aicool ; xylol ; baume, Sile premier bain était au violet, le second serait ainsi modifié :
70 grammes.
dC-LE
