D) COLORATION DES MICROBES DANS LES COUPES
Le frottis, le grattage sont suflisants pour savoir si un tissu renferme des microbes. La coloralion dans la coupe histologique est indispensable pour étudier la distribution des microbes, leur quantité, etc.
Wercerr a, le premier, en 1871, coloré les microbes d'une coupe.
4° Préparation de la coupe, — De bonnes coupes érès minces sont absolument indispensables.
On recueillera les pièces aussitôt que possible après la mort, iimédiatement après pour les pièces expérimentales.
La jiration s'obtient en plongeant immédiatement, des cubes de 1 centimètre d'arête de l'organe dans un bain fixateur.
On emploiera le sublimé acétique (sublimé à saturation dans Venu avec 5 p. 100 d'acide acétique cristallisable) pour les organes volumineux comme le poumon par exemple; au bout de six heures, on praliquera quelques incisions; le séjour com pletest de douze heures.
Le liquide de Flemming :
Acide chromique à 1 p. 100. - . . . .. 15 grammes. Acide osmique à 2 p. 100. . . . . , .. 4 Acide acétique glacial, . . . . . . ES 1 = est préférable, mais pénètre moins.
288 EXAMEN MIGROSCOMIQUE DES MICRÔBES
On emploie aussi un mélange : a .
Sublimé à saturation . . - : -. . 5 Acide chromique à 4 p. 100. , . . . . 500 = Acide cosmique ... 0.4. 121 0. 1 |, 4 Acide acétique glacial. , . . . . . . .. 400
Le durcissement s'oblient ensuile par des séjours successifs de vingt-quatre heures dans des alcools à 60%, 80, 96°, et 1000. On suspend, au moyen d'un hameçon, les fragments dans des flacons bouchés à l'émeri. Un séjour trop prelongé dans l'alcool entraverait la coloration, On évitera le liquide de Müller.
L'inclusion doit se faire de préférence dans la paralline, et mon dans la celloïdine. Au sortir de l'acool absolu, la pièce | ést plongée pendant vingt-quatre heures dans le: æylol à la température du laboratoire. On la transporte alors dans un mé:
lange à parties égales de paraffine et de xylol, placé dans une étuve à + 34, où elle fait un nouveau séjour de vingt-quatre heures. Enfin, on la met, pendaut au moins vingt-qualtre heures, dans la paraftine fu- Fig. 180. sible à + 54° maintenue liquide Microtome Minot, dans une étuve réglée à + 55% ù Le fragment sort assez mou: on “élaisse durcir à l'air pendant quelques instants, on le déposé “(ans un cadre métallique où on verse de la parailine qui se | C'est ce morceau de parafline contenant le fragment quiest fixé au microtome.
fragments sant lrès minces, on peut supprimer le me temps et diminuer des deux tiers la durée des deux On doit même y tendre le plus possible, ms'obliendra au moyen des microtomes les plus pernés; on recherche plutôt la minceur que l'étendue. On ir besoin de coupés en séries (numéralion des ba-
Épur un RdéseuuEs PRNe RS sde blanc d'œuf et d'essence de gi ke:alors. par l'alcool et on traite la lame
de ‘la coupé: — D'une façon générale, lteo es s'obtient par les mêmes méthodes que
eee née il fat uns action-plés proie où décolorants. En outre; lén: coupe RES eur.
ri où cherche à découvrir duns une à robes dant on ne connait pas d'avance les pro NEA servir d'ane méthode pouvant colorer toustes inctement. Lorsqu'on suit d'avance quel mierobe on ne se servira de la méthode générale que os ne prenant pas le Gram et ne se colorant pas
laisser séjourner la coupe pendant dix minutés. n hydro-aleoolique quelconque et de décolé=
à 90°. On peut, secondairement, colorer le solution aqueuse de teinte opposée à la pre-
nt certaines couleurs qui sont à conseiller en préconise le bleu de méthylène comme [a e le mieux l'ensemble des bactéries. 1l consuivante :
oûe, 2% édit, 19
4 Séjour d'une demi-heure dans :
Alcool absolu. . . . . . . . . . . . . . 10 grammes Bleu de méthylène . . . . ....... A gr. 5 Solution phéniquée 5 p. 400. . . . . . . 400 —
% Rincer à l'eau; 3 Rincer dans:
Acide chlorhydrique. . . . . . ..... 40 gouttes. Eau bouillie. . . . . . . . . . . . . .. AÙ grammes.
jusqu'au bleu tendre :
& Rincer dans:
Sol. aq. concentrée de carbonate de li-
thine sis mien dre Are 6 à 8 gouttes.
nuits Pose 8 eee ae A0 grammes.
5v Rincer quelques secondes dans l'eau:
6 Déshydrater légèrement dans l'alcool absolu;
7 Déshydrater complètement par un séjour de quelques minutes dans:
Huile d'aniline pure . . . . . . . . 10 Blen de méthylène. . . . ... .. Une pointe de couteau.
dont on met quelques gouttes dans de l'aniline pure;
8° Rincer dans l'huile d'aniline pure;
9 Séjour de deux minutes dans une essence bien fluide (thymène, térébène, ele
40° Deux séjours successifs dans le xylol pour débarrasser de l'huile d'aniline.
Puis si où veut une double coloration :
41e Séjour de deux à dix minutes dans le bain :
Huile d'aniline. . . . . . . . . .. 40 grammes. Safranine . . . . ... . . . .... Une pointe de couteau.
42° Rincer dans l'huile d'auiline pure; les coupes doivent conserver une teinte rosée ; 13" Deux minutes dans une essence bien fluide:
e la thionine comme le seul colorant à
bes qui ne prennent ni de Gram ni
{violet de Lauth) est une couleur soufrée
me groupe que les bleus de méthylène et de:
surcolore pas. Elle constitue « le réactif énergique et le plus sûr », grâce à son allinité
s et sa faible solubilité dans l’aclool absolu. ée de la paraïline à l'aide de xylol, absolu.
minute à une minute, dans la solution:
éthionine dans alcool à 50, 40 cent, cubes
les colorations microbiennes, Annales Pasteur,
292 EXAMEN MIGNOSCOPIQUE DES MICROUES
Lavage à l'eau;
Déshydratation par alcool absolu; Eclaireissement au xylol; Montage au baume,
On emploie
il l'éosine pour une seconde coloration
Fig. 181.
Coupe de foie de « e contenant des Bacilles churbonneux.
Les bacilles son violets
La figure 181 représenté une coupe de foie de cobaye contehant des bacilles charbonneux traitée par la thionine et l'éosine
B. CormunatIon van LA MÉTHODE DE Gnam, — On colorera par le Gram les coupes contenant des microbes qui restent colorés par côtte méthode (p. 270). On emploiera la méthode modifiée par
pad dcoolique de fucsine après a déco:
ques modifié la méthode” de Gram en/décélorabt
‘très soluble dans l'huile d’'aniline. A le et les préparations brunissent à la longue,
DES BACILLES ACIDOPHILES. — On recommande de B. Faæxkes (p. 284). Je lui préfère la (p. 285). On laisse les coupes dix minutes
cant chauffé. Après la décoloration, HEnMANN e pour teinter le fond; le chrysoïdine est préonde est celle de Küuxe (p: 283).
les noyaux par un séjour de deux minutes | ou mieux l'hématéine ;
Alaierii'ennsil: du) vupigu el luyŸ WE | 27 liquide de Zish} =
Séjour de quinze minutes dans le
Faire pas quelques seconde dans Taie clohydrique à 2 p. 1000; 14 LUN sf PTE … Décolorer à l'alcool: usé de Pipe fe HITIEE Eclaircir au xylol ; | vw l Lui Monter au baume. site t À SE
de re dela fus " HAE ÎLE dires pen rfparin Lei au æylol. L'alcool est le meilleur déshydratant, lu souvent trop; l'huile d'aniline (WEIGERT) nya F dans tous les cas. KüuNe recommande de colorer très ment l'huile d'aniline avec la matière qui a servi coupe, pour éviter une trop grande déoi rm sg at (Kümxe). Pour pr LU 6 Mer CE ee
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Les eos suivants sont bons se î MEhrlichen es tn alt | ps, } secondes dans nat dans la thionine :
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F) ErIQURTTAGE, CONSERVATION DES PRÉPARATIONS
Nous conseillons de placer les préparations dans des boîtes de Cogit en forme de livres. La place de chaque préparation est marquée d'un chiffre. Une étiquette collée sur la lame porte une lettre correspondant à celle de la boîte et au chiffre de sa place, Un registre indique la nature des préparations d'après leur numéro, Chaque préparation est ainsi facilement trouvée puis remise en place.
$ #. — Dessix ET PHOTOGRAPHIE DES PRÉPARATIONS MIGROSCOPIQUES
On à le plus grand intérêt à pouvoir reproduire fidèlement par le dessin, ou mieux par la photographie, les préparalions microbiennes qui s'allèrent assez rapidement. C'est d'ailleurs le seul moyen dé mettre sous les yeux du lecteur les pièces justificatives d'une publication.
4° Chambre claire. — On dessinera à la chambre claire, Le principe de la chambre elaire est le suivant. Un prisme dont la section est un parallélogramme, et dont l'ouverture de l'angle aigu est de 459, est placé au-dessus de l'oculaire que regarde sa face oblique tandis que sa face horizontale est en dehors du microscope. Un petit prisme collé à la face oblique laisse passer les rayons de l'oculaire sans les dévier. L'œil recoit donc en même temps les rayons venus de la préparation et ceux partis de la pointe d'un crayon qui appuie sur une feuille de papier placée sous la face horizontale du premier prisme. Il suflit de suivre avee le crayon les contours de l'image.
Macassez a disposé les prismes de telle façon qu'on peut incliner le microscope à 18° ou à 45°, Cette seconde inclinaison permet de dessiner sur le papier placé derrière le pied du microscope.
La ï
HOTOGRAPHIE DES PRÉPARATIUNS 297
» 2 Phc — La photographie a presque complète-
ment remplacé l'usage de la chambre claire ; son exaclitude ne
peut être suspectée. Il peut même arriver qne le cliché révèle des détails qu'on n'apercevait pas en examinant directement la préparation. C'est sur des clichés que Koën a découvert les cils des microbes.
Les appareils de photomicrographie sont très nombreux, Nous citerons, en France, les modèles de Nachet, Verick ; en Allemagne, ceux de Zeïss, E. Leitz ; en Autriche, Ploessl, Reichert ; en Angleterre, Beck, Ross, Watson.
. Tous ces appareils, verticaux ou horizontaux, et à quelque marque qu'ils appartiennent, se composent essentiellement :
4° D'une source lumineuse pour éclairer la préparation ;
2 D'un microscope qui en projelte l'image ;
% D'une chambre noire, destinée à fixer cette image sur la plaque sensible, à l'abri de la lumière extérieure.
Jl n'est donc pas nécessaire pour obtenir de bons photogrammes d'acheter des appareils spéciaux loujours assez com pliqués et d'un prix élevé.
Il faut cependant que les appareils employés réunissent certaines conditions que nous allons énumérer.
. La plus importante est la stabilité, cause de nombreux insuccès, IL faudra donc opérer de préférence dans un local situé au rez-de-chaussée et autant que possible éloigné des trépidations extérieures, La tablelle portant les appareils sera fixée directement au sol ou sur des consoles en fer attenant au mur,
A. Sounce LuMINEUsE. — La lumière solaire et les lumières
artificielles peuvent être également employées. Nous ne recomin pas la première, son emploi nécessitant l'usage
dun héliostat dont le réglage est délicat.
s. Parmi les lumières artificielles, l'électricité, l'acétylène, la
lumière oxhydrique, le gaz (bec Auer) et le pétrole donnent
de bons résultats.
» Toutes ces sources lumineuses réclament, pour obtenir un
iSoleirage convenable de la préparation, l'emploi d'un conden-
poterie daniel er hit que dés “de la série ordinaires © 1.
Depuis AUCHAN: Del 5e REETES OTNE. “horgeiha sntits né nous permet
r dans la description des: nombreux modèles de à vue de la photographie microscopique.
nte un appareil de Zeiss pouvant s'en
. Cette: position de l'appareil devient photographier des animaux vivants Î ee ei mlliene liquides: + LME la plupart des cas, les appareils sont'placés que celte disposition ne demande pas une : Chi ea chambre ordinaire est
lition cependant que son soufllet aitun timôtrés à 4 mètre et que son tirage
s'effectue par le corps arrière. Ilnous paraît inutile de dépasser le format 18 x 2% em. ;
Le meilleur dispositif, pour réunir le microscope à la chambre, consiste à coller, à la place occupée par la planchette de l'objectif, une feuille de caoutchouc percée en som
Fig. 182.
Appareil microphotographique.
net Pompe pr cuvolle. — 1, diaphragme iris, — Ë 0, banc oplique. — $, condensateur, |
milieu d'une ouverture circulaire d'un diamètre inférieur à ne tube du microscope. On peut également se servir mchon d'étoffe imperméable à la lumière, fxé à la êt réuni au microscope par un anneau en caoulw ces dispositifs, on évite l'admission de la lumitre æt les vibrations imprimées à la chambre, pendant point ou le placement du châssis. Ces opéralions ne rs déranger la mise au point.
ispénsable, pour obtenir de bons résullats, que l'axe par le centre du verre dépoli et que lu lèle à ce verre dépoli.
ge de la chambre dépassera 50 centimètres, pouvant manœuvrer facilement la vis michroau point s'obtiendra en actionnant deux coroie attachés à l'extrémité d'un levier fixé crométrique de réglage.
ition offre une réelle supériorité sur
est actuellement trop perfection compétence spéciale. A Lyon, de pholographie pour toute TU
um
