III. — FIXATEURS A BASE DE SUBLIMÉ CORROSIF
On em}»loie rarement la solution aqueuse pure. 11 est préférable d'y ajouter au moins une certaine quantité d'acide acétique.
1. Je rappellerai, pour mémoire, que le mélange de Perenyi doit être rangé parmi les formules surannées et irrationnelles. Il était en effet composé d'alcool, d'acide nitrique et d'acide chromique : ces corps réagissent entre eux. do telle sorte que, tinalement, on n"a plus qu'un mélange d'éther azotique, d'oxyde de chrome, d'alcool et d'acide d'azotique. Autrement dit, c'est un alcool nitrique, très médiocre fixateur (Mayer).
MÉLANGES FIXATEURS 283
Sublimé acétique.
Solution aqueuse satarée de sublimé 95 cni-^
Acide acétique cristallisable o —
Sous celle forme ^, le subiimé est un excellenl lixaleiir à peu près universel, convenant très bien pour tons les travaux courants. Il pénètre vite et ne gêne pas les colorations, mais il ne faut pas le laisser agir trop longtemps, sous peine de rendre les objets friables : il faut donc les retirer dès qu'ils ont pris jusqu'au centre une teinte blanchâtre opaque, indiquant qu'ils sont pénétrés.
Sublimé alcoolique de Schaudinn.
Solution aqueuse saturée de sublimé 1 vol.
Alcool absolu 2 —
'Ce réactif joue un rôle très important dans l'étude des Protozoaires. On l'emploi à froid, ou chauffé à 60"-7Û°.
Je ferai deux remarques à son sujet : on peut le préparer avec de Tacool à 90°, les résultats sont exactement les mêmes. En outre, ce fixateur, très vanté par l'ccole allemande, n'est pas supérieur, à aucun point de vue, aux mélanges de Bouin et de Duboscq-Brasil (p. 284 et 285).
1. C'est à dessein que je n'indique pas, dans le texte, la formule du mél-oif/e de Dorainici au sublimé iodé et formolé. Ce lîxateur a donné d'excellents résultats entre les mains de Dominici et de ses élèves. Personnellement je ne le trouve pas supérieur aux formules courantes et je lui fais le grand reproche d'être irrationnel et instable, puisqu'il est constitué par deux corps chimiquement incompatibles, incapables de donner naissance à des composés stables et définis. Aussi, sans nier la valeur do ce mélange, je n'eu conseille l'emploi ni pour les débutants, ni pour le travail courant. D'après Doiniiiici et son élève Rubens Duval voici comment ce liquide doit être préparé : à une solution de sublimé saturée à 40° (obtenue en refroidissant à 40", puis décantant la solution saturée aux environs de 60'') on ajoute goutte à goutte, et en agitant, de la teinture d'iode, jusqu'à teinte jaune orangé, sans toutefois produire ni un précipité, ni une teinte rouge. Il se forme ainsi, d'après les auteurs, de l'iodo-chlorure de mercure iode. On ajoute alors, à 100 volumes de cette solution. 12 volumes de formol à 40 p. 100. Au besoin verser quelques gouttes de teinture d'iode si le liquide a trop pâli : ce mélange ne se conserve pas, il faut le préparer au moment de l'emploi. Les pièces y restent de 2 à 4 ou 1-2 heures. On peut acidifier par ô p. 100 d'acide acétique. Laver à l'alcool ou à l'eau et inclure le plus tôt possible.
Au fond, on ne connaît pas la composition du mélange et je doute qu'il y reste du sublimé, car ce corps, sous l'action de l'iode, donne du biodure de mercure, soluble dans un excès de réactif, de l'iodochlorure de mercure, composé mat défini, et du chlorure d'iode, soluble dans l'eau en la colorant en jaune. Peut-être ce dernier corps joue-t-il une rôle dans la fixation.
Consulter à ce sujet : Doniinici, Sur un i)rocédé de technique histologique appliqué à l'étude des cellules conjonctives. Folia hxmatoloi/ica, II, p. 219-226, 1905. — Rubens Duval, Cytologie des inflammations cutanées. Thèse de la Fac. de raéd. de Paris, lOOS. Cf. p. 15-18.
Mélange de Gilson.
On dissout du sublimé à saturation dans le- mélange suivant :
Alcool absolu 1 vol.
Acide acétique cristallisable 1 —
Chloroforme 1 —
Ce fixateur est un dos plus pénétrants ([ui existent et convient pour des objets très difficiles à fixer ', (cls que les œufs de Nématodes {Ascaris, p. G06,\
Mélange de Zenker.
Bichlorure de mercure 5 gr.
Bichromate de potassium 2,5 —
Sulfate de sodium 1 —
Eau distillée 100 cm-^
Acide acéliiiue (ajouter au moment de l'emploi). . 5 —
Ce réactif, très vanté, convient assez bien pour le travail courant. Personnellement, je ne le trouve pas supérieur au Bouin ou au Tellyesniczky et il présente, en outre, l'inconvénient d'exiger un lavage soigneux et prolongé, d'abord à l'eau pour éliminer le bichromate, puis à l'alcool iodé pour éliminer le sublimé.
Sa vogue est probablement due à ce qu'il est une aniélioralion du vieux liquide de MïiUer, devenu par trop insuffisant et démodé, mais dont l'emploi est extraordinairement enraciné.
Pour le mode d'emploi de ces mélanges et pour le lavage après fixation, se reporler aux pages 288 el 29i.
lY. — FIXATEURS A BASE D'ACIDE PICRIQUE
Nous savons que Tacide picrique seul, en solution saturée, aqueuse ou alcoolique, n'est pas uu bon fixateur des tissus animaux, bieu qu'il possède une grande puissance de pénétration et de précipilatiou. Aussi l'emploie-t-on toujours enmélauge.
Picroformol de Bouin.
Solution aqueuse saturée d'acide picrique. . . 30 vol.
Formol à 40 p. 100 10 —
Acide acétique cristallisable 2 —
Ce liquide, extrêmement ])énétrant, peut être considéré comme un fixateur universel. A mon avis, il peut convenir ])our toutes
1. Dans ce but, on peut employer le mélange de Carnoy ou de van Geliuchten, qui est également un fixateur, des plus pénétrants :
Chloroforme 3 vol.
Alcool absolu 6 —
Acide acétique cristallisable 1 —
Ml'XANGES FIXATEURS 285
sortes de travaux, même pour les recherclies de cytologie. Son emploi est des plus faciles parce qu'on peut y plonger des objets assez volumineux et les y laisser un temps quelconque (3 jours au moins, 8 jours au plus d'après P. Massonj. En outre, il ne nécessite pas de lavage particulier après la fixation (voir p. 271, note 1, et p. 348, procédé rapide de Jellinek pour Félimination). Il suffit de transporter les pièces dans Talcool à 90" qu'on change deux ou trois fois (p. 295). C'est le fixateur que je recommande le plus chaudement pour Tusage courant. Avec lui, les débutants n'auront jamais d'insuccès.
Mélange de Duboscq-Brasil.
Ce mélange se nomme encore Bouin alcoolique, hquide de Bouin-Duboscq, ou de Brasil.
On peut dire que ce mélange complète heureusement celui de Bouin, en lui donnant des qualités encore plus pénétrantes. Aussi convient-il parfaitement, d'une part pour les frottis humides (p. 173). d'autre part pour les objets difficiles à fixer, tels que les Arthropodes ^
Alcool à 80° 150 cm'.
Formol à 40 p. 100 00 —
Acide océliquc cristallisablc 15 —
Acide picrique t gr-
Mélanges au sublimé et à l'acida picrique.
Ces mélanges, préconisés d'abord par Mann et RabI, puis par Branca, Bouin, etc., sont aussi d'excellents fixateurs universels.
Mélange de Mann.
Bichlorure de mercure 2,5 gr.
Eau bouillante 100 cm^
Après dissolution, ajouter acide picrique. . . 1 gr.
Au moment de l'usage, ajouter formol. ... 20 cm-'
On peut lîxer dans ce liquide des objets assez volumineux, pourvu qu'ils ne soient pas trop épais : ils peuvent y rester plusieurs jours. On lave ensuite à l'alcool iodé (p. 294) pour éliminer à la fois Facide picrique et le sublimé.
Mélange picronitique de Mayer.
Eau distillée 100 cm3
Acide azotique à 25 p. 100 5 —
Acide picrique q. s. pour saturer.
1. Pour les travaux très délicats, Bouin et Duboscq recommandent d'éviter l'emploi de l'alcool absolu. On passe de l'alcool à 00" d'un mélange à parties égales d'alcool absolu et do chloroforme, puis au chloroforme pur. On imprègne de paraffine à basse température et on enrobe définitivement dans la paraffine dure.
286 MKTHODES GÉNÉRALES
Ce mélange est destiné à remplacer Tancien mélange picro-sulfurique <le Kleinenberg. 11 donne des résultats au moins aussi beaux et possède l'avantage de ne pas former de ciistaux de sulfate de calcium, dans les organismes renfermant du carhonale de calcium. Il convient surtout pour les Arthropodes, mais, niénie à ce point de vue, ne présente pas de supériorité sur le mélange de l)u!)osc(i-Brasil. Ce dernier, grâce à la présence de l'acide picrique pénétre très bien la chitine.
