FIXATEURS A BASE D'ACIDE OSMIQUE
Pour obvier aux inconvénients des solutions d'acide osmique, on a tenté d'y adjoindre d'autres réactifs qui en complètent et en modèrent l'action. Les principaux sont les acides acétique et chromique el le chlorure de platine. Il faut en exclure a priori les agents réducteurs tels que l'alcool. L'acide acétique réalise l'acidité du milieu, nécessaire pour une bonne fixation fp. 269): il augmente la })énélration, lixe la chromatine nucléaire et atténue la surfixation du cyto}»lasme, tout en améliorant la différenciation optique. L'acide chromique contribue à la fixation de la chromatine et diminue le noircissement des tissus. Le chlorure de j)latinc possède un pouvoir coagulant considérable et, en outre, agit comme mordant énergique pour les colorants basiques, tels que la safranine et le bleu de toluidine.
Parmi les nombreux mélanges qui ont été proposés, nous ne retiendrons que ceux de Flemming, d'Hermann et de Lindsay Johnson.
Mélange de Flemming ou chromo-acélo-osmique.
Il existe deux formules, dites mélange fort et mélange faible. Nous ne donnerons que celle du mélange fort^ qui fournit d'excellents résultais. D'ailleurs, comme l'a montré Carnoy, les proportions peuvent varier un peu sans inconvénient. Pour éviter la réduction de l'acide osmique ])ar l'acide acétique, on fait à part les deux solutions suivantes :
Solution A. Acide ctiromi(iue à 1 \). 100 11 vol.
Eau distillée 4 —
Acide aeélique cristallisable 1 —
Solution B. Acide cliromique à I p. 100 100 cm^.
Acide osmique cristallisé 2 gT.
Au moment de l'emploi, on mélange 4 parties de A avec une partie de B . Si on désire un fixateur plus faible, on ajoute 4 à y parties d'eau distillée.
Le mélange de Flemming est un lixateur cylologique de premier ordre, mais non un réactif universel. Aussi ne convient-il pas pour le travail courant des recherches topographiques ou pathologiques.
Il ne peut être emplové que pour de très petits objets ou de très [tetits fragments d'organes. En effet, son pouvoir de pénétration est très faible : l'acide osmique, qui en est l'agent fixateur le plus actif, ne fait guère sentir son influence au delà de 5 à G couches de cellules. Aussi les fragments doivent-ils avoir au plus 2 à 3 millimètres d'épaisseur. Malgré ces précautions, la partie vraiment utilisable et bien fixée est très faible, à cause des phénomèues de surfixation ou action périphérique qui se produisent dans les couches superficielles Ceux-ci se manifestent, comme nous l'avons dit p. 274, par une apparence homogène et vitreuse du contenu cellulaire, très nuisible à la bonne différenciation optique. Les opinions sont encore partagées sur la cause de cette surtixation : nous ne pouvons discuter ici cette question qui est traitée à fond dans les ])ublications de Fischer^, lAiann-, von Tellyesniczky ^ etc.
1. Anat. Anzc'ifjcr, IX, p. &lè, 1891 et X, p. 769, 1895. — Fixierung, Fiirbung nnd Bau des Proloplnsmas, 1899.
2. Physiological hislology, methods and theonj, Oxford, Clarendon Press, 1902.
3. EncyklopCidie der mikroskopischen Tec/inik, 2'- édit., 1910; article Fixation.
MÉLANGES FIXATEURS 281
Le volume du liquide doit être environ 4 fois celui des tiagmenls et la durée de la fixation de vingt-quatre heures au moins, et de quaranle-liuil heures au plus. Pour le lavage des pièces ainsi fixées voir p. 294.
Le mélange de Flemming ne permet pas de bonnes colorations par les laques d'hémaloxyline. Par contre, il se prête très bien à remploi de la safranine et des couleurs d'aniline, par exemple le Irichromique de Cajal (p. 126).
Mélange de Hermann on plalino-acéto-osmiqae.
Ce mélange dilTère de celui de Flemming- en ce que l'acide ctiromiqiic est reinplacé par du clilorurc de plaline. On prend par exemple :
Ghlonire de plaline a 1 p. 100 15 vol.
Acide acétique cristallisable 1 —
Acide osmique à 2 p. 100 4 —
Il est bon de ne pas préparer à la fois de grandes quantités de ce mélange. Le mode d'emploi est le même que pour le Flemming.
La valeur de ce liquide a été très contestée par certains auteurs. Aussi a-t il élé souvent modifié : ses deux principaux dérivés sont les mélanges de Borrel et de Lindsay Johnson.
Mélange de Borrel.
Acide osmique 2 gT.
Chlorure de plaline 2 —
Acide chromique 3 —
Acide acétique cristallisable 20 —
Eau distillée 350 —
On fixe de très petits fragments à la g:lacière, pendant vingt-quatre heures. On colore au trichromique de Cajal.
Mélange de Lindsay Johnson.
Bichromate de potassium à 2,5 p. 100 .... 70 vol.
Acide osmique à 2 p. 100 10 —
Chlorure de platine à 1 p. 100 15 —
Acide acétique ou formique 5 —
On n'ajoute ce dernier réactif qu'au moment de l'emploi, pour éviter la réduction de l'acide osmique.
Ce dernier mélange est très vanté par Lee et Henneguy. Ce serait un des meilleurs réactifs pour lixer le cytoplasme et ses inclusions.
Pour tous les fixateurs de ce groupe, le volume des objets à fixer, la durée de la fixation, le mode de lavage, la colorabilité des pièces fixées sont exactement les mômes.
