S Î — RÉSUMÉ ET CONCLUSIONS DE LA PREMIÈRE PARTIE

Dans la première partie de ce travail, j'ai étudié au point de vue de quelques-unes de leurs sécrétions diastasiques, un certain nombre de champignons parasites et plus particulièrement les espèces suivantes :

Aspergillus fumigatus, Rhizopus equinus, Rhizomucor parasiticus, Trichophylon gypseum, Achorion Shœntleini, Microsporum canis.

Cette étude résulte d'observations faites tant avec les cultures elles-

mêmes qu'avec l’aide des filtrats de ces cultures.

1° Ces espèces font subir au lait sur lequel elles végètent, des modifications physiques et chimiques qui intéressent plus particulièrement la matière albuminoïde caséine.

Cette caséine existe dans le lait sous trois modifications : solide, colloïdale et dissoute, formant ainsi un système en équilibre stable que peuvent modifier certains facteurs ; en particulier, les diastases présure et caséase.

Les champignons que je viens de citer, ensemencés sur le lait, en coagulent d’abord la caséine, grâce à de la présure qui agit au profit de la forme solide ; puis dissolvent le coagulum formé, grâce à de la caséine qui agit au profit de la forme dissoute. Ce sont là de simples modifications physiques.

La caséine devenue soluble, est représentée par une série de termes échelonnés (caséoses), dont le dernier constitue la caséone ; stade au-

quel la caséine présente les réactions des peptones. Ses propriétés ont alors été notablement modifiées, et très vraisemblablement à la suite d’une hydrolysation qui a dû intervenir à un moment donné. La dislocation se continue pour aboutir aux termes résiduels plus simples : urée, acides amidés, produits ammoniacaux volatils ou non, etc.

Je me suis alors demandé: 1° Si cette profonde dégradation de la caséine est l’œuvre de la caséase elle-même, ou bien celle d’une diastase trypsique qui lui serait associée. 20 Si la caséase est agent de décoagulation et de peptonisation à la fois, ou si elle est au contraire susceptible d’être dédoublée en une diastase simplement liquéfiante et une diastase peptonisante.

Chercher à résoudre ces propositions conduisait nécessairement à reprendre le problème de l’individualité ou de l'identité des diastases protéclytiques, caséase, trypsine et gélatinase.

À cet effet, j'ai examiné comment les champignons précités se comportaient vis-à-vis des principaux aliments albuminoïdes abandonnés à leur nutrition; puis, j'ai recherché et distingué les différents pouvoirs protéolytiques de leurs filtrats de culture.

20 Les espèces cryptogamiques désignées ci-dessus, sont ensemencées sur bouillon légèrement peptonisé en présence de flocons de fibrine, ou d’albumine coagulée sous forme de tubes de Mette. Elles ne tardent pas à donner au milieu nutritif, lorsqu il est neutre ou acide, l’alcalinité nécessaire à leur processus digestif. Dans ces conditions, certaines espèces opèrent une digestion appréciable de l’albumine ou de la fibrine, digestion qui ne peut être attribuable qu’à un ferment trypsique. Cependant, deux espèces se montrent dans ces conditions à peu près dépourvues de pouvoir albuminolytique ; ce sont : le Ahizomucor parasiticus et le Rhizopus equinus. L'absence de ce pouvoir ne semble pas constante chez le Rhizopus equinus, car, il apparaît si l’on substitue la glycérine au glucose dans le substratum nutritif.

3° Les six espèces cryptogamiques ensemencées sur une solution de gélatine à 12 0}, neutre, en amènent plus où moins rapidement la liquéfaction. Envisagées à ce point de vue, elles forment deux groupes bien nets par la façon et la rapidité avec laquelle elles liquéfient la gélatine.

A) Un groupe à mycélium compact blanchâtre, avec lequel la liquéfaction est rapide et intense. /Trichophyton gypseum, Achorion Schœnleini, Microsporum canis/.

B) Un groupe à mycélium lâche, gazonnant et de couleur foncée, avec

lequel la liquéfaction s'opère lentement et dificilement. /Aspergillus fumigatus, Rhizopus equinus, Rhizomucor parasiticus/

4° Les champignons ont été cultivés sur un milieu apte à leur assurer un optimum de développement (3 p. 100 de glucose avec À p. 100 de peptone). Puis, les liquides de culture sont filtrés et examinés en vue de leurs pouvoirs protéolytiques. À ce moment, je me suis préoccupé d'appliquer une technique rigoureuse pour éviter l'intervention des microbes de l'air. Les opérations de filtration et de répartition des liquides sont faites aseptiquement à l’aide d’un appareil construit à cet effet.

Les résultats sont identiques à ceux qui ont été obtenus lorsque les champignons étaient directement en rapport avec la substance à transformer. Ils permettent de dresser le tableau suivant où les sécrétions protéolytiques sont indiquées pour chaque champignon :

Présure | Caséase | Trypsine | Gélatinase Aspergillus fumigatus......... E + +3 ie Rhizopus equinus............. +- + |t. faible! tr. faible Rhizomucor parasiticus ....... + + — tr. faible Trichophyton gypseum........ + + +- + Achorion Schœænleini......... - +- + + Microsporum canis............ + + + tr. active [— EE —

Ces résultats ne renseignent pas il est vrai, sur la quantité ou l’activité respectives des diastases produites ; mais, ils permettent certaines déductions comparatives, et donnent lieu à la constatation de quelques

- faits saillants ; ce qu’il importe surtout de connaître.

Ainsi : le Rhizopus equinus est un faible producteur de trypsine et de gélatinase ; le Rhizomucor parasiticus ne produit pour ainsi dire pas de trypsine et produit de la gélatinase en très faibles proportions ; le Miscrosporum canis se fait remarquer par la sécrétion d’une gélatinase très active.

5° L'action des filtrats de culture sur la caséine, ainsi que les transformations qu’elle subit de la part du Streptothrix de Vallée en végétation sur le lait, conduisent à envisager l’action de la caséase sur la. caséine, comme un phénomène diastasique complexe, comprenant :

a] Une action physique qui solubilise la caséine ;

b/ Une action chimique transformant, très probablement par hydro-

on ie

lysation, la caséine solubilisée en caséone, substance à réaction de peptone. La solubilisation et la peptonisation de la caséine seraient ainsi, l’œuvre de diastases distinctes ; l’une décoagulante ou liquéfiante ; l’autre peptonisante. Leurs actions seraient plutôt successives que simultanées.

On trouve ici une certaine analogie avec ce qui se passe dans la saccharification de l’amidon par les diastases suivant la théorie de Duclaux. Au cours de cette opération, on admet deux actions : la première due à l’amylase proprement dite, diastase simplement liquéfiante ; la seconde due à la dextrinase ou diastase saccharifiante. Dans ce parallélisme, la présure même, trouve son homologue dans l’amylo-coagulase de Wolf et Fernbach.

6° La puissance gélatinolytique de Microsporum canis est particulièrement remarquable, puisque, toutes conditions égales, il suffit d’une seule goutte du filtrat de culture pour liquéfier intégralement, en 2 h.1/2, une masse gélatineuse de 10 c.c. ; tandis que 8 c.c. du même filtrat chauffé 20 minutes au B. M. sont incapables de liquéfier une masse égale de gélatine.

Dans ces conditions d’activité, l’ingérence des microbes n’est plus à redouter, et il devient superflu de filtrer les liquides de culture. Mais pour que les résultats soient toujours comparables, cette opération n’a jamais été négligée. Enfin, grâce à cette activité, j'ai pu faire la mesure du pouvoir gélatinolytique à l’aide de tubes de Mette où l’albumine est remplacée par de la gélatine.

La gélatinase modifie rapidement certaines propriétés physiques de la gélatine, au sein de laquelle elle est introduite, car cette gélatine perd la propriété de se reprendre en gelée par le refroidissement. Plus on s'éloigne de l’instant où s’est effectuée la liquéfaction, et plus la prise en masse est difficile et nécessite de basses températures.

7 L'étude précédente, sans autoriser des affirmations définitives, permet de penser que les trois diastases : caséase, trypsine et gélatinase possèdent chacune leur individualité propre. Il n’y a pas unité d’action, constance et régularité, comme s’il s'agissait d’une seule diastase (protéase), qui pourrait exercer indifféremment et constamment une action digestive sur la caséine, l’albumine et la gélatine.

Les trois diastases ne sont pas toujours étroitement associées ; par suite, elles ne peuvent être identiques, et admettre leur identité serait s'exposer parfois à commettre de graves erreurs ; car de l’existence de l’une d’entre elles on ne saurait conclure à la présence de l’une des deux autres et à plus forte raison des deux autres à la fois.

8° En dehors de ces diastases protéolytiques, les six espèces de champignons parasites désignés, abandonnent dans leurs liquides de culture un ferment soluble agissant comme l’émulsine.

% Ces mêmes espèces confèrent à leurs liquides de culture la particularité de donner une réaction oxydasique en présence de traces infinitésimales de manganèse. Cette réaction s'explique par la présence dans les liquides de culture de principes ammoniacaux volatils, indéterminés, qui comme les alcalis, possèdent la propriété d’activer le pouvoir oxydant du manganèse. Le complexe ainsi formé devient capable comme les oxydases de bleuir la teinture de gaïac et de donner des réactions colorées avec quelques polyphénols.