PRÉPARATION
L’antigène méthylique est un extrait des lipoïdes
phosphorés du bacille de Koch que Boquet et Nègre
préparent de la manière suivante :
Premier temps. — Des bacilles tuberculeux humains et bovins provenant de cultures sur bouillon glycériné, âgées de 6 semaines, sont sérilisés à 120° pendant 30 minutes puis filtrés sur papier et mélangés en parties égales. ;
Les corps bacillaires sont ensuite lavés sur le filtre à l’eau distillée puis desséchés à l’étuve à 37° ou dans le vide. |
Les microbes secs sont alors traités par l’acétone à raison d’un ec. d’’acétone par centigramme de bacilles.
Ce premier temps a pour but de se débarrasser des graisses et des cires bacillaires qui sont solubles dans
l’acétone et qui, comme nous le verrons, présentent une
action défavorable sur l’évolution de la tuberculose éxpérimentale. Il importe done que celte extraction par l’acétone soit suffisamment prolongée et le temps de contact lé plus favorable paraît être de 5 jours. :
Deuxième temps. — Les microbes sont ensuite desséchés à nouveau puis émulsionnés dans un volume d’al/-
cool méthylique à 99° égal au volume d’acétone em-
ployé.
On porte le mélange à 37° eton le laisse pendant 10 jours en ayant soin d’agiter 3 ou 4 fois par jour.
Le liquide Séparé par filtration du dépôt microbien constitue l'extrait des lipoïdes phosphores. |
On s’est ainsi débarrassé des protéines insolubles dans alcool méthylique, protéines qui sont hypersensibilisantes. =
Il faut faire remarquer pourtant que les phosphatides ne sont pas obtenus à l’état de pureté absolue, mais qu’ils sont encore associés à des protéines avec lesquelles ils forment des complexes solubles dans l’alcool.
Troisième temps... — Pour obtenir une émulsion injectable, on additionne l'extrait méthylique, d’abord goutte à goutte, puis plus rapidement sans cesser d’agiler le mélange d’une quantité égale d’eau distillée,
L’émulsion laiteuse ainsi obtenue est portée au bain: marie à 48-5o° et distillée dans le vide jusqu’à évaporation complète de l’alcool,
ÉÉDEE UE
: Un centimètre-ube de celte émulsion injectable cotrespond à un cenligramme de corps microbiens desséchés el à cinq centigrammes de corps microbiens frais, lavés. |
