C. — Colorations. Conservation des préparations
La constatation dans une selle, lors de l’examen direet, de protozoaires à l'état de vie végélative, en grand nombre, peut conduire le chercheur à préciser ou vérifier son diagnostic. Celui ci se faisant grâce aux détails de structure des parasites, il faut mellre ceux-ci en évidence par des colorations appropriées.
Nous basant sur les résultats que nous avons obtenus, nous recommandons les procédés suivants :
Pour les amihes : Coloration à l’hématéine-éosine. — On étale sur une lame, en couche très mince, le produit riche en amibes; on fixe avant desséchement (alcool éther, Bouin, ete...) :
1° Coloration à l'hématéine pendant cinq à dix minutes;
2° Rincer à l’eau el vérifier au microscope si les noyaux sont suffisamment colorés;
3° Différencialion dans l'alcool chlorhydrique ;
4° Lavage à l’eau jusqu’au virage au bleu noir; 5° Coloration à l'éosine pendant une minute environ; 6° Lavage à l’eau, puis à l'alcool à 90 degrés; "
7° Déshydration, montage au baume.
L'amibe se présente sous la forme d’une masse plus où moins arrondie, rougeâtre, à l'intérieur de laquelle on voit des corpuscules ronds (globules rouges), d’un rouge plus foncé, et un noyau sous la forme d'un cerele violet foncé, centré d'un point,
Ce procédé est rapide et suffit au diagnostic.
Coloration à l’hématoxyline ferrique de Heidenhain. — Étalement et fixation comme précédemment. Ensuite :
1° Mordançage dans l’alun de fer pendant trente minutes à douze heures;
2° Lavage rapide à l’eau distillée ;
3° Coloration dans la solution d'hématoxyline pendant trente minutes à vingt-quatre heures;
4° Lavage rapide à l’eau distillée ;
5° Différenciation dans l’alun de fer à 1 p. 100;
6° Lavage soigneux à l’eau distillée;
1° Déshydration el montage au baume.
Mais c'est un procédé long, exigeant une certaine habitude et un cerlain doigté pour donner de bons résultats.
Pour les Lamblias. — La coloration à l'hématoxyline ferrique à l’étuve à 37 degrés donne les meilleurs résultats.
L'identification de certains kystes de protozoaires nécessite aussi parfois l'emploi de colorations qui mettent en relief les détails de leur structure.
Les procédés que je recommande sont les suivants :
1° Coloration au lugol fort :
Kerr ET PT, 2 grammes.
PERL oran ne { grammes.
Eau distillée...... 200 cc.
Il suffit de diluer le culot de centrifugation obtenu par les méthodes d’enrichissement avec 2 gouttes de cette solution. On pourra avec avantage employer du lugol légèrement chaulfé. C'est la méthode rapide à utiliser pour le diagnostic.
2 Coloration par l'hématoxyline ferrique de Heidenhain. — Voici la technique que nous suivons (42) :
Robin 3
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Nous égoultons convenablement le culot de centrifugation, nous Céshydratons celui-ci par l'alcool à 95 degrés, en ayant soin d’homogénéiser le culot dans l'alcool; nous centrifugeons à faible vitesse «t nous rejetons l'alcool; puis nous diluons le culot avec 5 ou 6 gouttes de celloïdine faible; nous homogénéisons et, inclinant le tube, nous en laissons couler ie contenu sur une lame porte-objet légèremeat inclinée pour assurer un bon étalement.
La lame est ensuite plongée dans l'alcool à 80 degrés, la celloïdine est solidifiée. Nous faisons alors la coloration par l'hématoxy:ine à l'étuve à 37 degrés :
1° Mordançage dans l’alun de fer à 3 p. 100 à 37 degrés, dix miputes;
2° Lavage rapide à l’eau distillée;
3 Coloration dans la solution d'hématoxyline à 37 degrés, quinze minuls;
4° Lavage rapide à l’eau distillée ;
5° Différenciation dans l’alun de fer à 1 p. 100;
5° Déshydration et montage au baume.
On obtient par ce procédé de très belles préparations. Nous ne savons si l'inclusion à la celloïdine faible a été employée pour l'étude des kystes de protozoaires ; nous l'avons vu pratiquer en histologie et il nous à paru intéressant de l'essayer en coprologie. Les beaux résultats que nous avons obtenus nous ont encouragé et nous avons jugé utile de faire paraître ici cette technique que nous avons déjà publiée (42).
D'ailleurs, l'inclusion à la celloïdine permet de conserver les préparations de kystes de protozoaires indéfiniment; elle remplace avantageusement les préparations lutées. Pour Les œufs d'helminthes, nous n'avons pu l'appliquer, car il se produit des déformations parasitaires trop importantes : c’est ainsi que les œufs de Trichocéphale perdent leurs deux bouchons muqueux.
La conservation des préparations peut se faire, comme nous le disons plus haut, par inclusion dans la celloïdine faible pour les kystes de protozoaires. On peut aussi luter les préparations ; pour cela, on doit diluer le culot avec de l’eau physiologique
