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soit en solution alcaline, soit en solution acide, offre une bande d'absorption à la limite du violet et de l'ultraviolet; elle est relativement très transparente pour les rayons plus réfrangibles,

B. Globine, — J'ai décrit précédemment (26 b) le mode de préparation et le spectre d'absorption de la globine extraite de l'oxyhémoglobine de cheval recristallisée deux fois.

La bande d'absorption de la globine dans la région avoisinant Cd 17 coïncide presque exactement avec la bande que présente l’oxyhémoglobine dans la méme région.

Je Uens à faire remarquer que la très pelite quantité d'hématine que renferme toujours la globine la mieux purifiée est insuffisante pour produire une bande à la frontière du violet et de l’ultra-violet, sous l'épaisseur qui fait apparaître d’une facon parfaitement nette la bande sur Cd 17.

Interprétation du spectre d'absorption de l’oxyhémoglobine. —— Les constatations que nous venons de faire nous permettent d'interpréter aisément le spectre de Foxyhémoglobine. Elles nous autorisent à conclure que la constitution de l'oxyhémoglobine se trouve exprimée par son spectre d'absorption violet et ultra-violet, puisque ce spectre présente deux bandes, dont l’une est signalétique de l'hématine et l'autre de la globine.

Cette conclusion me paraît absolument évidente et certaine, bien que la bande de lhématine (soit en solution alcoolique acide, soit en solution aqueuse alcaline) se trouve être un peu plus réfrangible que la bande correspondante de l'oxvhémoglobine. Il est regrettable que, d'une part, Fhématine soit insoluble dans l'eau pure ou acidifiée, et que, d'autre part, l'oxyhémoglobine soit insoluble dans Falcoo! et décomposée par les alealis: ce qui rend impossible la comparaison des spectres de ces deux corps dans des conditions de dissolution identiques.

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$ 2. — Absorption des ravons ultra-violets par l'oxyhémocyanine.

27. Constitution de l’hémocyanine. — Obtention de loxyhémocyanine d’escargot cristallisée. = L. Frédérieq ! à désigné sous le nom d'oxyhémocyanine la substance bleue qui joue le rôle de pigment respiratoire chez un grand nombre d'invertébrés. I a admis que lhémocyanine présente avec l'hémoglobine non seulement une similitude de fonction, mais aussi une analogie de constitution: le cuivre tenant dans la molécule d'hémocvanine la place qu'occupe le fer dans la molécule d'hémoglobine.

Ces faits n'ont eu longtemps qu'une base expérimentale assez fragile ; ils avaient même élé mis en doute par Kruckenberg et surtout par F. Henn ?, quand je m'occupar de la question en 1899 %. Voici en quels termes Frédérieq ! a apprécié la portée de mon travail: « La théorie de l'hémocvyanine cuprique, si intéressante au point de vue de la physiologie générale, demandait une revision. C'est ce travail qu'a entrepris Ch. Dhéré....….. L'hémocvanine se trouve ainsi réinlégrée dans la catégorie des protéides imétalhfères ». Je crois avoir démontré nettement, en effet, dans la note à laquelle fait allusion Frédéricq et dans une note complémentaire ?,

! L. Frénérico : Sur l'hémocyanine, substance nouvelle du sang de Poulpe: — CR: Acad. .d: Sciences, LXXX VII, 996, 1878.

FO Ham: Æludes sur le sang des crustacés décapodes. — Thèse, Paris, 1892,

® Duéré: Le cuivre hématique des invertébrés et la capacité respiraloire de l'hémocyanine. — €. R. Soc. de Biol., LII, 458, 1900.

! L. Frénérico: Revue annuelle de physiologie. — in Rev. gén. des sciences, XII, 801, 1901.

® Duéré: Quelques nouveaux documents concernant le cuivre hématique, ele. — €. R. Soc. de Biol., LV, 1161, 1903. Une partie des faits communiqués dans celle note (les délerminalions de la capacilé res-

piraloire) ont élé acquis dès 1900,

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que Ja teneur en cuivre du sang de divers mollusques et crustacés va à peu près de pair avec leur capacité respiratoire,

Mes recherches, ainsi que celles de la plupart des auteurs qui se sont occupés de la question, justifient certainement La place à laquelle Frédéricq range l'hémocvanine : ce pigment doit êlre compté parmi les protéides. Remarquons, Toutefois, que, Fon n'a pas réussi Jusqu'à présent à démontrer l'existence dans la molécule d'hémocyanine d'un groupement prosthétique analogue à lhématine de Fhémoglobine, Frédéricq avait admis que le traitement de lhémocvanine par les acides chlorhydrique où nitrique permet d'isoler lhémaline cuprique à l'état de sels: mais Henze ! à prouvé analvüquement qu'une telle conclusion est illégitime, Couvreur et Rongier ? ont prétendu que par laction de là chaleur où de l'alcool sur Fhémocvanine on sépare une partie imsoluble comparable à une hématine : c'est Rte comme je Fai fait remarquer *, une interprétation abusive de faits déjà connus. Néanmoins, je suis porté à admettre l'existence de cette hémaline cuprique en me fondant sur l'observation du spectre d'absorption ultra-violet de Foxyhémocyanine. En exaninant labsorplion des rayons ultra-violets par le sang à hémocyanine de lFescargot, J'ai découvert, en effet, que ce sang montre un spectre à deux bandes d'absorption, (voir fig. 50, p. 116), Fune de ces bandes coïncidant avec celle des substances albuminoïdes (sur Cd 17), l'autre, moins réfrangible, ne répondant à aucune bande connue. Je me suis demandé si cette dernière bande n'appartiendrait pas à l'oxyhémocvanine. Pour répondre à cette question, il fallait d'abord trouver le moven de préparer à l'état de pureté loxyhémocva-

‘ M. Henze: Zur Kenntniss des Hämocyanins. — Zeitschr. f. physiol. Chem., XNXIII 370, 1901.

2? E. Couvreur er Roncier: Sur les dérivés de l'hémocyanine. - C, R. Soc. de Biol, LIV, 1476, 1902,

3 Daéré: Remarques sur la note de M. Couvreur. — €. R. Soc. de Biol., LV, 1338, 1903.

nine d'escargot. Je suis parvenu à obtenir de loxyhémocyanine cristallisée et pure au moyen de la technique suivante !.

Du sang d'escargots (Helix pomatia) en hibernation fut dialysé, dans un sac de collodion, en présence d'eau distillée qu'on renouvelait matin et soir, Le récipient était constamment entouré de neige et placé dans la glacière. A la fin du septième jour de dialvse, le sang était encore parfaite-

Fig. 49 — Cristaux d'oxyhémocyanine d'escargot.

ment limpide. Dans le cours du huitième jour, 11 devint très trouble et abandonna bientôt un abondant précipité : en meie temps, la coloration azurée de la liqueur palit. Le seizieme jour, on arrêla la dialvse: il v avait au fond du sac un précipité dont le volume pouvait correspondre à 1/6 environ

! Dnéré: Sur la préparation el sur quelques propriétés de l'o-

æxyhémocyanine d'escargot cristallisée. — €. R. Acad. des Sciences, CXLVI, 784, 1908: el: Sur quelques propriétés de l’oxyhémocyanine cristallisée. — C. R. Soc. de Biol., LXIV, 788, 1908.

du volume du sang traité: ce dépôt présentait, dans ses 23 inférieurs où il était fortement tassé, une coloration d'un bleu sombre. La liqueur superposée était sensiblement incolore et resta telle après agitation à l'air. En examinant le dépôt au microscope (gr. — 110 et 390), on s’aperçut qu'il élu constitué de cristaux sans mélange de substance amorphe. Ces cristaux se présentent sous forme d'étoiles à 6 pointes ordinairement régulières ; ils n'offrent pas de double réfraction appréciable quand on les examine à la lumière polarisée, même avec interposition d'une lame de gypse. La figure 49 représente la photographie de quelques-uns de ces cristaux colorés par la fuchsine !. [Les eristaux ont été introduits dans de l'alcool fort, additionné d'une trace d'acide acélique, mélange dans lequel on peut les conserver sans altération de forme. Après évaporation de l'alcool, on à coloré à froid au moyen d'une solution de fuchsine, lavé, desséché et monté dans le baume.

Pour purifier cette oxyhémocyanine, les cristaux furent séparés des eaux mères par centrifugation, parfaitement essorés, puis lavés à l'eau distillée dans laquelle ils sont pra- Uüquement insolubles à la température ordinaire, et dissous dans de l'eau addilionnée d'une trace d'acide acétique. [L'oxvhémocvanine eristallisée se dissout rapidement et abondaniment dans l'eau contenant des quatités infimes d’éleetrolytes: acide acétique, soude, acétate de soude, chlorure de sodium, etc. On obtient aisément des solutions concentrées de couleur bleu très foncé] En dialysant à la glacière la liqueur Hmpide introduite dans un sac de collodion, on détermina la précipi-

tation de loxyhémocyanine.

! Il s'agit sans doute de cristaux squelettes provenant d'octaèdres dont l'accroissement s'est fait principalement suivant la direction des trois axes rectangulaires. Si on place dans un champ électrique du sang d'escargot longuement dialysé, mais encore limpide, on détermine le dépôt d'oxvhémocyanine en cristaux octaèdriques dans la région anodique,

(C£. ma communication à l'Acad. des sciences.)

Ce dépôt est uniquement formé de cristaux : sphérules (conglomérats cristallins), st la cristallisation se fait rapidement: oclaèdres, si la cristallisation se fait lentement.

L'hémocvanine pure donne nettement les réactions : xan-

thoprotéique, de Millon, d'Adamkiewiez, de Piotrowskr et Molisch.

J'ai constaté la présence du cuivre au moyen de lépreuve suivante: Un denn-gramme à peu près de cristaux secs laissa à la caleination un pelit résidu noir, soluble dans quelques gouttes d'acide nitrique, en donnant une liqueur bleue. Cette liqueur fut évaporée dans le vide au-dessus de fragments de potasse ; 11 resta des cristaux bleus dont la solubion se colora forlement en rouge-brun par addition de ferrocyanure de potassium.