NUMÉROS
POIDS
ea grammes
et sexe des cobayes
du tableau précédent auxquels correspondent ces témoins
D0S8 do sérum injecté en ce.
RÉSULTATS
240 cf
Mort en 21 minutes.
Mort en 7 minutes.
2 et 3
Mort en 4 min. 30 sec.
Mort en 12 ou 15 h. env.
240 cf
5 et 6
Mort en 6 minutes.
7 et 8
Mort en 3 minutes.
L'expérience n° 1 (du tableau V) ne doit pas entrer en ligne de compte ; il est clair que la dose de sérum chauffé était beaucoup trop faible. Les cas dans lesquels il paraît y avoir eu immunisation relative sont ceux inscrits sous les n°^ 2, 3, 6 et 7. On peut se demander, il est vrai, si le témoin des n°^ 2 et 3 (n*» 3 du tableau Y bis) n'aurait pas survécu quelques heures s'il avait reçu seulement 0,01 c. c. de sérum normal au lieu de 0,02 c. c. ; de plus, le n" 2 perd de sa signification, si on le rapproche des n°^ 3 et 4 du tableau IV (p. 28), pour autant toutefois qu'il est permis de comparer des expériences faites avec des sérums différents (il faut avoir soin, bien entendu, de ne faire porter cette comparaison que sur des sérums à pouvoir toxique analogue) ; sous cette réserve encore, les n»* 6 et 7 sont des cas presque identiques au cas n° 2, d'une part, et, d'autre part, au n" i de ce même tableau IV.
Mais quand on augmente les doses, et surtout quand on répète à de courts intervalles (un jour ou deux) les injections de sérum chauffé, on obtient une immunisation plus franche. Dans ces cas, alors, comme nous le verrons plus loin, le sérum de ces animaux a acquis la propriété antiglobulicide.
1 Action du sérum neutralisé. — Le sérum d'anguille est fortement alcalin. A l'idée des analogies qui existent entre ce liquide et les ferments, nous nous étions demandés si, en le neutralisant, on ne supprimerait pas ou tout au moins on ne diminuerait pas son activité, comme on diminue l'activité d'un
ferment, quand celle-ci ne s'exerce qu'en un milieu déterminé, acide ou alcalin. Nous avons donc neutralisé aussi exactement que possible du sérum d'anguille aa moyen d'acide clilorhydrique dilué. Voici l'un des résultats obtenus.
Expérience XIV. — Lapin gris de 1.670 gr. Injection, le 16 mai 1897, à midi 1 m., dans une veine de l'oreille, de 0,2 c. c. de sérum neutralisé, dilué dans 1,8 c. c. de chlorure de sodium, et porté à la température de 33° pendant 5 m. ; à partir de midi 8 m., accélération respiratoire. Resté en observation durant tout l'après-midi et jusqu'à minuit, il n'a pas présenté d'accidents»; bien mieux, il a mangé. Très bien portant les jours suivants ^
Le 20 mai, à 5 h. 59 min., on injecte à cet animal, dans une veine de l'oreille, 0,2 c. c. de sérum d'anguille normal, dilué dans 1,8 ce. d'eau salée à 8 p. 1.000 : immédiatement, polypnée, mouvements impulsifs, course irrésistible, mort en 6 min.
Quelques autres essais ne nous ont pas donné de meilleurs résultats.
2. Action immunisante du sérum de hérisson. — Il était naturel de rechercher si le sérum du hérisson, animal réfractaire jusqu'à un certain point au sérum d'anguille, n'est pas susceptible d'immuniser contre ce sérum. Cette recherche devait être entreprise d'autant plus que Phisalix et Bertrand (voyez p. 52) ont vu que le sérum de hérisson immunise contre le venin de vipère ; ces auteurs font remarquer qu'il importe de chauffer ce sérum à 50°-60°, chauffage qui enlève, en effet, les propriétés toxiques et conserve les propriétés immunisantes. En est-il de même avec le sérum d'anguille? Les expériences suivantes donneront une réponse à cette question.
Expérience XV. — Cobaye de 590 gr. qui a reçu dans le
1. Expérience témoin : Lapin 9 de 1.860 gr. Injection à midi 9 minutes de 0,2 ce. du môme sérum, normal, dilué dans 1,8 c. c. d'eau salée à 8 p. 1.000; mouvements impulsifs et mort en 4 minutes ou 4 minutes 30 secondes.
2. On peut se demander si l'absence d'accidents cliez cet animal n'a pas tenu à ce que le sérum a été légèrement chauffé, à une température, il est vrai très peu élevée, mais suffisante peut-être pour diminuer son activité. N'en verraiton pas une preuve dans ce fait que, dans d'autres expériences, le sérum neutralisé est resté toxique?
péritoine 8 c. c. de sérum de hérisson préalablement chauffé pendant 45 min. h 58o. 24 h. après, injection dans la veine jugulaire droite de 0,05 c. c. de sérum d'anguille, dilué dans 1 c. c. d'eau salée; mort en 2 min.
Cette dose de sérum d'anguille était trop forte de moitié.
Expérience XVl. — Cobaye de 430 gr. qui a reçu dans le péritoine 7 c. c. de sérum de hérisson chauffé 15 min. à SB». 24 h. après, injection dans la veine jugulaire droite de 0,2 c. c. de sérum d'anguille, dilué dans 1 c. c. d'eau salée à 8 p. 1.000; agitation, quelques efforts de vomissement ; 2 h. plus tard, il paraît normal. Le lendemain, il pèse 335 gr. (n'a pas mangé); ce même jour, il se remet à manger. Le surlendemain matin, on le trouve mourant, paralysé, les pattes très froides.
Un cobaye témoin, du poids de 540 gr., n'a survécu que 24 h. à la même dose. Deux autres témoins, l'un de 440 gr. et l'autre de 445 gr., sont morts, après la même injection, le premier en 40 min. et le second en 20 min.
Malheureusement, ce genre d'expériences exige de grandes quantités de sérum de hérisson. Or, cet animal ne fournit pas beaucoup de sang et, d'autre part, nous n'avions à notre disposition qu'un nombre restreint d'animaux. C'est pourquoi nous avons été amenés à essayer d'autres procédés d'immunisation. Nous avons d'abord employé le mélange des deux sérums.
Expérience XVII. — Hérisson $; le sang carotidien est reçu dans des tubes stérilisés ; le lendemain, on recueille aseptiquementle sérum qui s'est formé. Ce sérum est chauffé 15 min. à 570.590. attend le refroidissement et on le mélange à du sérum d'anguille, dans la proportion de 1 c. c. de sérum de hérisson pour 0,1 du second sérum. Les deux liquides sont laissés en contact pendant 5 à 6 min., et le mélange est injecté à deux cobayes :
Cobaye n° 1, $ de 475 gr. Injection dans la veine jugulaire droite de 0,7 c. c. de ce mélange ; l'injection dure 2 min. ; 1 minute et demie après, l'animal meurt;
Cobaye 2, ^ de 450 gr. Même injection, mais de 0,5 c. c. seulement de mélange, en 1 minute et demie; mort après 2 min.
— Dans ce second cas, le sérum d'anguille était resté en contkct 4 h. i5 min. avec le sérum de hérisson.
Ces expériences ne sont pas décisives, la quantité de sérum d'anguille contenue dans le mélange étant vraisemblablement trop forte. Il conviendrait de les répéter en employant de plus grandes quantités de sérum de hérisson pour de moindres doses du sérum toxique.
Nous avons eu recours encore à un autre procédé, l'injection dans le péritoine tous les jours ou tous les deux jours, durant
10 à 12 jours, de petites quantités (0,2 c. c. ou 0,3 c. c. au début jusqu'à 2 c. c. à la fin) de sérum de hérisson normal (non chautîé). Les injections étaient faites naturellement avec toutes les précautions habituelles d'asepsie. Dans ces essais, nous avons d'abord perdu deux cobayes qui peu à peu avaient dépéri ; leur température était tombée à 29° ou 30°. Mais d'autres ont mieux résisté aux injections préventives de sérum de hérisson, de telle sorte que nous avons pu réaliser l'expérience projetée.
Expérience XVIII. — Deux cobayes mâles, A de 480 gr. et B de 450 gr,, reçoivent dans le péritoine 0,7 c. c. de sérum de hérisson, dilué dans 1 c. c. d'eau salée, le 13 décembre 1897;
Le 15, injection de 1,2 c. c;
Le 17, injection de 1,2 c. c. ;
Le 18, injection de 2 c. c. dilués dans 1 c. c. d'eau salée; Le 22, A pèse 510 gr. et B 432 gr. ;
Le 23, A reçoit dans la veine jugulaire droite 0,44 c. c. de de sérum d'anguille, dilués dans 1 c. c. d'eau salée; il meurt en 3 min.
La dose d'ichtyotoxique paraît avoir été trop forte (d'après tout ce que nous ont appris nos expériences, une fois trop forte).
11 se peut, en effet, que l'animal soit immunisé pour la dose simplement mortelle, et non pour une dose double de celle-ci.
Le 24 décembre, B reçoit encore dans le péritoine 3 c. c. de sang de hérisson ;
Le 29, injection de 4 c. c, de sérum de^érisson;
Le 30, à 9 h. du malin, on le trouve mort'i encore un peu chaud.
Faute d'animaux, nous avons dû abandonner ces essais.
On voit que le procédé d'immunisation qui nous a donné le meilleur résultat (voyez expérience XVI) est celui qui a été préconisé par Phisalix et Bertrand, injection intra-péritonéale d'une assez grande quantité de sérum chauffé. Mais rien ne prouve que les deux autres, injection d'un mélange des deux sérums et injections de petites quantités croissantes de sérum normal de hérisson, ne fourniraient pas aussi des résultats positifs; car, dans les quelques expériences que nous avons faites suivant ces deux procédés, nous avons employé des doses trop fortes de sérum toxique. Or, l'immunisation, on le sait, n'est pas quelque chose d'absolu; tel animal, immunisé pour une dose donnée de toxine, ne résistera pas à une dose plus élevée. D'ailleurs, d'une façon générale, l'action immunisante du sérum de hérisson n'est pas très intense, d'après les expériences de Phisalix et Bertrand sur le venin de vipère [loc, cit.) et d'après celles de Calmette {loc. cit.) sur le venin de serpents (mélange de venin de Naja tripudians, de Bothrops lanceolatus et de Crotales d'origines diverses) et sur l'abrine*. S'il est permis de conclure de ces faits à l'action du même sérum sur l'ichtyotoxique, on admettra que cette action peut ne pas être très énergique non plus, et par suite, que, pour éprouver les animaux supposés immunisés, il convient de ne pas leur injecter de trop fortes doses d'ichtyotoxique.
3. Action immunisante du sérum antivenimeux. — Les sérums ayant acquis des propriétés antitoxiques ne seraient-ils pas doués du pouvoir d'immuniser contre le sérum d'anguille ? C'est assurément le sérum antivenimeux qui paraissait a priori devoir être employé avec le plus de succès dans ce but, et c'est d'ailleurs le seul que nous ayons utilisé. Nous devons à l'obligeance de M. Calmette, directeur de l'Institut Pasteur de Lille,
1. Calmette (Contribution à l'étude des venins, des toxines et des sérums antiloxiques. Annales de l'institut Pasteur, t. IX, p. 225-251, 1895) et Calmette et Deléarde (Sur les toxines non microbiennes et le mécanisme de l'immunité par les sérums antitoxiques. Ibidem, t. X, p. 615-707, 1896) ont constaté également que le sérum du Mangouste, animal naturellement réfractaire aux venms de serpents, ne possède que de faibles propriétés antitoxiques et préventives visà-vis de ces venins.
le sérum antivenimeux qui nous a servi; c'est du sérum de cheval immunisé contre un mélange de trois venins, de Cobra capel, de Bothrops lanceolatus et <ÏEchis carinata. Nous n'avons d'ailleurs fait avec ce sérum qu'un petit nombre d'expériences.
Expérience XIX. — Lapin $ de 4. HO gr. ayant reçu en injection intra-veineuse 6 c. c. de sérum an ti venimeux en 6 jours, soit 2 c. c. tous les deux jours; 6 jours après reçoit encore 5 c. c. du même sérum (il pèse alors 4.000 gr.), Une demi-heure après, injection intra-veineuse de 0,3 c. c. de sérum d'anguille dilué dans 3 c. c. d'eau salée : myosis, exophtalmie, dyspnée, salivation, paralysie , vaso-constriction auriculaire, convulsions et mort au bout de 21 min.
Expérience XX. — Cobaye de 280 gr. qui reçoit 2 c. c. de sérum antiveniraeux dans la veine jugulaire droite, et 1 h. 50 min. après, 0,013 c. c. de sérum d'anguille. Survie.
Expérience XXI. — Cobaye Ç de 225 gr. qui reçoit dans la veine jugulaire droite 3 c. c. de sérum antivenimeux. 3 heures après, injection dans la même veine de 0,01 c. c. de sérum d'anguille. Mort après 3 jours.
Ces expériences doivent être considérées comme insuffisantes pour juger la question de savoir si le sérum antivenimeux peut immuniser contre l'ichtyotoxique. Elles montrent en tout cas qu'il peut y avoir quelquefois immunisation. Wehrmann d'ailleurs, dans le laboratoire de Calmette, a prouvé la réalité de ce pouvoir préventif.
1. L'étude des effets d'un autre liquide organique, la bile, s'offrait aussi. C'est Fraser (Brit. med. Journ., 17 juillet 1897) qui a constaté le premier que la bile possède des propriétés antitoxiques vis-à-vis du venin des serpents. Un peu plus tard, Wehrmann (Recherches sur les propriétés toxiques et antitoxiques du sang et de la bile des anguilles et des vipères. Annales de l'Institut Pasteur, t. XI, p. 810-828, 1897), dans le laboratoire de Calmette, constata que la bile de bœuf neutralise in vitro non seulement le venin de vipère, mais aussi le sérum d'anguille; elle ne posséderait ni pouvoir préventif ni pouvoir curatif. Phisalix, à son tour (La cholestérine et les sels biliaires vaccins chimiques du venin de vipère. C. R. de la Soc. de BioL, M décembre 1897, p. 1057), a reconnu qu'un mélange de bile de vipère et de venin est inoll'ensif et, d'autre part, que cette môme bile a des propriétés vaccinantes vis-à-vis du venin, puis, comme suffit à l'indiquer le titre de sa note, il s'est attaché à déterminer quelles sont dans la bile les substances douées de ces propriétés.
Pour nous, nous n'avons étudié que l'influence de la bile sur raction globulicide du sérum d'anguille (voyez p. 41).
64 ACTION P11YS10L0(WQUE DES ICHTYOïOXlNES
On trouvera plus loin les résultats de nos recherches concernant l'influence du sérum anlivenimeux sur l'action globulicide du sérum d'anguille.
4. Action du plasma hépatique de propeptone [atuipiasmasme] — Au cours des recherches que nous avons faites dans ces dernières années sur l'action de la propeptone sur la coagulabilité du sangs nous avons eu maintes fois l'occasion de remarquer que les plasmas obtenus à la suite d'une injection de cette substance ne sont jamais colorés par de l'hémoglobine dissoute. De là, après que nous eûmes étudié l'action globulicide du sérum d'anguille, l'idée de rechercher si cette action ne serait pas empêchée par le liquide qui s'écoule des veines sus-hépatiques après passage dans le foie d'une solution de propeptone». En raison de son action supposée sur le ferment coagulateur du sang, la plasmase, et pour simplifier, nous appelons ce liquide anliplasmase . Nous dirons plus loin un mot de ces essais.
Nous avons aussi cherché si l'action toxique générale du sérum d'anguille ne serait pas supprimée ou diminuée par l'antiplasmase. Le résultat de nos expériences peut être résumé dans le tableau suivant :
Tableau VI.
es ■M S
ANIMAUX
poids en grammes et sexe
DOSE
d'antiplasmase en ce.
DOSE
de sérum d'anguille en ce.
INTERVALLE
séparant les
2 injections
RÉSULTATS
Lapin 1500 9
— 1330 d" Cobaye 590
6 dans le péritoine
1 heure.
1 minute.
30 minutes.
22 heures.
6 minutes.
30 minutes.
30 minutes.
3 heures.
19 heures.
Survie.
Mort en 4 minutes.
Morlen 2 h. environ.
Mort en qq. heures.
Mort en 2 minutes.
Id.
Mort en 4 minutes.
Id.
Mort en 3 minutes.
Mort en 1 minute.
1. Voyez p. 20 l'indication de quelques travaux de Gley et Paclion et de Gley sur celte question; voyez aussi L. Camus et E. Gley, C. H. de la Soc. de BioL, 1896 et 1898.
2. C. Delezenne : Formation d'une substance anticoagulante par circulation artificielle de peplone à travers le foie. Arch. de l'IiysioL, 5« série, t. VIII, p. 655-668, 1896.
Quelques-uns de ces résultats (voyez n"' 1, 3 et 4) montrent, ce semble, que Tantiplasmase, injectée dans le sang 1 ou 2 h. environ avant le sérum d'anguille, protège les lapins ou les cobayes contre une dose mortelle de ce liquide. Si ce dernier est injecté quelques minutes ou plusieurs heures (10 à 20) après l antiplasmase, l'action préventive de cette substance ne paraît pas pouvoir se produire. Il convient de remarquer, il est vrai, que très souvent, dans nos expériences, les doses de sérum ont été trop élevées ; c'est ce qui est certainement arrivé pour les n°* 7, 8, 10 et môme 9 ; la dose injectée au n° 3 était également beaucoup trop forte et il est très vraisemblable que cet animal eût survécu, s'il avait reçu simplement la dose mortelle ou une dose seulement un peu supérieure.
Si on mélange le sérum et l'antiplasmase et qu'on injecte une quantité déterminée de ce mélange, on n'obtient aucune atténuation des elîets toxiques du sérum ; l'antiplasmase n'exerce donc aucune action neutralisante in vitro.
Il nous semble que ces essais mériteraient d'être repris. Leur intérêt d'ailleurs n'augmente- t-il pas si on les rapproche des expériences de E. Freund et S. Grosz sur l'action neutralisante et préventive des albumoses ou de l'histone sur les toxines diphtérique et tétanique et de celles de Bosc et Delezenne sur l'action immunisante d'une injection intra-veineuse de propeptone ou d'extrait de sangsue contre les effets des cultures virulentes de streptocoques ou de coli-bacilles*?
S. Action de la leucine et de la tyrosine. — Nous avons déjà indiqué (voyez p. 40) pour quelles raisons nous avions recherché si la leucine et la tyrosine n'empêchent pas l'action globulicide du sérum d'anguille. De môme, nous avons voulu voir si, au moyen de ces substances, on ne réussirait pas à immuniser
1. E. Freund et S. Gros/. : Uebcr die Beziehungen von Albumosen zur oa<?m-vPn Immunistrung. Centralbl. f. inn. Med., t. XVII S 497 0 n ai fsQfi • cation à la Soc des n^édlcins de Vienne li'aS 1896 aussi unTavaU
antérieur des mêmes auteurs {Centralbl. f. inn Med t XVT ^ i w- „ oô concernant l'action in vitro de la nucléo-histonret'do 1^., 'if la toxine et l'antitoxine diphtériques - Boir ^L, 1 a<-^de nucléin.que sur du sang rendu incoagulable pTre^trai? de s ne.' rf'; ^-"^ ' ™Putrescibilité par quelques substan^ces .Jco:X^L%'tTULf. 'iS't:^, ?e"S-
contre l'action toxique du sérum. Les résultats que nous avons obtenus sont ou bien négatifs ou bien trop peu précis pour qu'il soit possible d'en tirer une conclusion sûre; tels qu'ils sont cependant, nous les présentons dans le tableau VII.
Tableau vu.
ANIMAUX
Poids en gr.
et sexo
Lapins :
Cobayes :
408 cS 410 9 280 cf 270 9 262 cf
DOSE
de leucine, L ou de lyrosine, ï en gr.
0,001 T c. c. d'une solution saturée à chaud d'un mélange L et T.
dans le péritoine.
DOSE
de sérum d'anguille en ce.
dans le péritoine.
INTERVALLE
séparant les deux injections
10 minutes, 0 (»)
50 minutes.
1 heure. 23 heures.
2 jours.
RESULTATS
Mort en 5 minutes.
Mort en 18 heures env Mort en 4 minutes.
Mort en 2 min. 30 sec Mort en quelques h.
Mort en 16 minutes.
Mort en 5 minutes.
Mort en 13 h. 10 min Mort en 30 minutes.
Mort en 5 h. 30 min.
Survie (*).
Survie (*).
On sait que la leucine et la tyrosine sont très peu solubles dans l'eau, mais plus solubles dans l'eau bouillante (1 pour 150). Or, l'injection de quelques centimètres cubes d'eau à 95° dans
bre 1896. — La question d'ailleurs peut être considérée comme ayant été déjà posée par les recherches de Wooldridge {Proc. of the Ro^al Soc, 1887, p. 312 ; Archiv f. Anat. und PhysioL, physiol. Abth., 1888, S. 174, 527) et de Wright (Brt/. med. Journ., 1891, t. II, p. 641) sur l'action du fibrinogène des tissus (on sait que ce que Wooldridge a appelé ainsi peut être identifié à la nucléo-histone) sur le charbon. — A la vérité, F. G. Novy (The immunizing povs^er of nucleohiston and histon. The Journ. of exper. Med., t. I, p. 693-716, 1896) a fait une critique expérimentale très soignée des expériences de Freund et Grosz, aussi bien que des recherches plus anciennes de Wooldridge et de Wright.
1. Dans ce cas. la tyrosine avait été triturée avec le sérum d'anguille et c'est ce mélange qui fut injecté.
2. La substance avait été triturée dans 5 c. c. de sérum de chien.
3. Dans ce cas, on injecte le mélange de tyrosine et de sérum d'anguille, les deux substances étant restées en contact pendant 15 min. à la température du
laboratoire (15"). a -, •
4. Deux témoins de même poids, ayant semblablemcntreçu dans le péritoine la même dose du même sérum, ont é alement survécu.
une veine paraît être sans danger*. Beaucoup de nos injections ont été faites de cette manière; nous aurons soin de mentionner les cas où il aura été procédé autrement.
Il est apparemment difficile de rien conclure de ces expériences. Passons en effet rapidement en revue leurs résultats. Le lapin n° 2 n'a certainement pas été préservé parce que la dose de 0,3 ce, pour cet animal qui pesait 2.300 gr., est une dose rarement mortelle d'emblée, en quelques minutes. Les deux autres animaux, que l'on pourrait considérer comme ayant été quelque peu immunisés, sont les n"^ 5 (lapin) et 8 (cobaye), mais il faut compter, dans ce genre d'expériences, avec les résistances individuelles, cause d'erreur qu'il n'est permis d'éliminer que par un grand nombre d'observations ; de plus, nous devons remarquer que le cobaye (n° 8), immédiatement après l'injection, a présenté de graves accidents (convulsions, dyspnée, polypnée, puis ralentissement progressif de la respiration) e que ces accidents n'ont pas cessé jusqu'à la mort.
De ce que les injections de tyrosine nous ont paru n'exercer aucune action préventive contre le sérum d'anguille, il ne s'ensuit pas qu'elles ne puissent immuniser contre les effets d'autres toxines. C'est ainsi que Phisalix^ a vu qu'une injection souscutanée de tyrosine, à la dose de S à 20 milligr., en suspension dans l'eau (l'auteur fait un mélange à 1 p. 100), préserve le cobaye contre une dose de venin de vipère mortelle en 5 à 6 h. pour les témoins \
2° Immunisation contre l'action globulicide.
Quand on injecte à un lapin immunisé contre le sérum d'anguille une dose mortelle de ce sérum, non seulement l'animal
1. Athanasiu et Carvallo : La résistance des animaux horaéothermes auv injections très chaudes intra-veineuses. C. R. de la Soc. de Biol., 17 juin 1897 p. 590; L action des hautes températures sur le cœur in vivo. Arch. de Phvsiol ' S' série, t. IX, p. 788-801, 1897. ^'lysioi.,
2. C. Phisaltx : La tyrosine, vaccin chimique du venin de vipère C R dP In Soc. de Biol., 5 février 1898, p. 153. ^ ' °*
3. Nous avons cependant, de notre côté, éprouvé sans succès le Douvoir immunisant <ie la tyrosine contre un venin de serpent qui nous a été très obi i^
survit, mais on s'aperçoit que ses globules rouges ne sont plus détruits.
La découverte de ce dernier fait' nous a conduits à entreprendre l'étude du problème de l'immunité par ce côté très particulier, la résistance d'un élément anatomique à une action toxique bien déterminée. Nous avons pensé qu'il y avait là un moyen sûr et précis, en môme temps certes que très simple et commode à mettre en œuvre, de saisir quelques-unes au moins des conditions et peut-être même des causes de l'immunité. Le phénomène dont il s'agit de déterminer la nature et, si possible, les causes, est en effet d'une constatation des plus faciles ; observé à volonté sur l'animal vivant, il peut être reproduit de la façon la plus aisée in vitro et ainsi étudié avec une grande précision ; l'action toxique enjeu, l'action globulicide, ne porte que sur un seul élément anatomique, le globule rouge ; il en va conséquemment de même pour l'action antitoxique. Par là le problème de l'immunité se trouve soumis à l'analyse dans des conditions de simplicité rarement réalisées.
geamment envoyé par M. Calmette (voyez plus haut, p. 62). Dans la séance de la Société de Biologie où Phisaiix a présenté les résultats de ses expériences sur les effets vaccinants de la tyrosine, nous avons été amenés à dire quelques mots de nos propres et infructueux essais dans la même voie. Notre collègue a remarqué, avec raison certainement, que tous les venins ne sont pas identiques, que toutes ses expériences avaient été faites avec le venin de vipère exclusivement, tandis que les nôtres l'avaient été avec un mélange de trois venins. Nous ne prétendons donc pas infirmer, à l'aide des quelques expériences que nous avons faites, les observations de Phisaiix.
Nous n'avons pas poursuivi nos essais, la question dont il s'agit s'écartant de notre étude spéciale. Récemment, Calmette (Sur le mécanisme de l'immunisation contre les venins. Annales de l'Institut Pasteur, t. XII, p. 343-348, 1898) a fait observer que, dans les expériences sur les propriétés vaccinantes de la bile, de la cholestérine, etc., il importe d'éprouver les animaux « avec des doses de venin siirement mortelles en 2-3 heures, car si on n'injecte que des doses mortelles en 5-6 henres, comme le fait M. Phisaiix, on trouve environ quatre cobayes, sur dix de môme poids, qui survivent après avoir été plus ou moins malades, et .sans injection préventive de bile ». Ajoutons pourtant que Calmette reconnaît lui-même quelque propriété préventive à la bile, à la cholestérine, etc., vis-à-vis du venin; mais" il ne s'agirait point là, d'après lui, d'une action spécifique; d'autres corps, le bouillon normal frais, par exemple, divers sérums, se comportent de même. « On a tout simplement alfaire ici à des efl'ets de stimulation cellulaire, mais ces effets sont très passagers et peuvent ôtr« produits par des substances très différentes » (Calmette, loc. cit., p. 347).
1. L. Camus et E. Gley : De l'action destructive d'un sérum sangum sur les globules rouges d'une autre espèce animale. Immunisation contre cette action. C. R. de VAcàd. des Se, t. CXXVI, p. 428, 31 janvier 189S.
ACTION PHYSIOLOGIQUE DES ICHTYOTOXiNES 69
Il est juste de rappeler ici que déjà la pathologie générale a été engagée dans celte voie par les belles expériences de Ehrlich relatives à l'action in vitro d'une toxine végétale, la ricine, sur la coagulabilité du sang' et à l'action contraire du sérum des animaux immunisés contre la ricine \ Ehrlich a montré qu'une quantité donnée d'une solution de ricine qui amène la coagulation rapide (agglutination) de quelques centimètres cubes de sang citraté, ne produit plus son effet quand on l'a mélangée avec une quantité proportionnelle de sérum de chien immunisé contre la ricine {Antiricin sérum). Il était ainsi établi pour la première fois qu'une toxine et une antitoxine peuvent agir directement l'une sur l'autre. De ces expériences, l'auteur conclut que ces deux substances se neutralisent chimiquement.
Les recherches que nous avons à exposer maintenant sont tout à fait du même genre; elles fourrisseni, comme celles d'Ehrlich, la preuve directe, au moyen d'une expérience facile in vitro ^ de la présence d'une antitoxine dans le sang d'animaux immunisés, et, d'autre part, comme on le verra plus loin, elles permettent de déterminer le mécanisme de l'immunisation. Très pende temps après noire première publication sur cette question, parut un intéressant travail de H. Kossel, qui avait de son côté conçu et réalisé d'une manière indépendante la même expérience ' ; comme nous, il a vu que le sérum d'anguille ne détruit plus les hématies du sang de lapin quand il a été additionné in vitro d'une quantité suffisante de sérum d'un animal immunisé contre l'ichlyotoxique ; dans ses expériences, il fait varier les quantités de sérum antitoxique, la dose de sérum d'anguille restant la même ; nous avons fait, au contraire, varier les doses de ce dernier, en employant toujours la même quantité de sérum
1. C'est Kobert qui a montré que. la ricine produit dans le sang in vitro, même dans le sang circulant, une coarjulalion spéciale [agglutination des globules] (voyez H. SiiLLsiAriK : Ueber Ricin. Arbeilen des pharmak. InsULuLs zu Dorvat l. III, S. 59-151, 1889). ^ '
2. P. Eduuch : Zur Kenntniss der Antitoxinwirkung. Fortschritfe der Medicin IS janvier 1897. Les travaux de Ehrlich sur l'immunisation contre la ricine eï contre l'abrine sont plus anciens (Exper. Untcrs. iiber Immunilât, I. Ueber Abrin. Deutsche med. Wochensc/ir., 1891, S. 976-1218).
,^-J^-.^^^^^^ '• 2"'" Kenntniss der Antitoxinwirkung. Bcrl. klin. Wochenschr., 14 février 1898. '
immunisant; dans les deux cas, la constatation a été la même, à savoir qu'il y a proportion simple entre les doses de toxine et d'antitoxine nécessaires pour que la neutralisation de l'une par l'autre ait lieu. « Es ist mir aiso gelungen, dit H. Kossel, in ahnlicher Weise wie Ehrlich, fur ein zweites Gift zu zeigen, dass Antitoxin und Toxin sich im Reagensglase binden konnen. »' C'est la même démonstration que nous avons donnée.
D'autre part, à peu près en même temps encore, J. W. W. Stephens et W. Myers » ont montré que le venin de cobra exerce une action dissolvante sur les hématies et que cette action est empêchée par des quantités fixes de sérum antivenimeux ; ainsi, l'efFet de 0,1 milligr. de venin est supprimé par 0,1 c. c. de sérum ; et ces auteurs, à leur tour, concluent de leurs expériences que la mesure de la neutralisation du venin in vitro par le sérum antivenimeux est, d'une façon générale, la mesure de la neutralisation in vivo (chez le cobaye) et que cette neutralisation est un phénomène d'ordre chimique et non cellulaire °.
Voilà donc en un court laps de temps une série d'observations concordantes, réalisées indépendamment les unes des autres, dont la signification paraît bien être la môme.
1. Étude du phénomène et de ses conditions. — Voyons maintenant dans ses détails le phénomène que nous voulons étudier.
Expérience XXII. — Deux lapins albinos de la même portée, âgés de 2 à 3 mois, et pesant, l'un (A $) 4.430 gr., l'autre (B r^) 1.360 gr., reçoivent dans une veine de l'oreille 0,05 c. c. de sérum d'anguille, dilué dans 0,5 c. c. d'eau salée à 8 7oo- On remarque après l'injection du myosis et un peu d'abattement.
Trois jours après, même injection. Pas de myosis.
Six jours après, même injection.
1. J. w. w. Stephens and W. Myers : Test-tube reactions belween Cobra poison and its antitoxin. Brit. med. Journ., 5 mars 1898. — Calmette [Le venin des serpents. Physiol. de Venvenimalion, Paris, 1896) dit très brièvement que pendant l'envenimation, sur beaucoup d'animaux, il a remarqué que « les hématies se gonflaient un peu et que l'hémoglobine se dissolvait rapidement » (p. 23).
2. Dans notre note à l'Académie des Sciences du 31 janvier 1898, nous avions annoncé que nous avions en voie d'exécution des expériences sur l'action hémolytique des venins de Serpents. Après la publication de l'intéressant travail de Stephens et Myers, nous n'avons pas continué ces recherches.
Huit jours après, injection de 0,075 c. c. A pèse à ce moment 1.550 gr. etB 1.519. Ils ne paraissent donc pas avoir souflert. — On continue les injections : Dix jours après, injection de 0,1 c. c. Treize jours après, injection de 0,1 c. c.
Le quatorzième jour, A pèse 1.450 gr. et B 1.270 gr. Ce dernier a, depuis 24 heures, un peu de diarrhée, ce qui peut expliquer en partie sa perte de poids. On pratique sur ces deux animaux une saignée carotidienne ; B est sacrifié par hémorragie.
Pour éprouver la résistance de A, on lui fait une injection intra-veineuse de 0,4 c. c. de sérum d'anguille, c'est-à-dire d'une dose mortelle à coup sûr (dose double de la dose mortelle). On ne constate aucun symptôme d'empoisonnement. Le lendemain, un peu d'abattement peut-être; sauf cela, apparence normale. Il est donc bien immunisé.
Or, du sang artériel de ces deux animaux, mis à centrifuger, a fourni un sérum clair, non coloré en rouge, contrairemei t à ce qui se passe chez les animaux qui reçoivent pour la première fois du sérum d'anguille. De plus, in vitro, on peut aisément constater, à l'aide de la méthode de Hamburger, que les globules de ces animaux immunisés résistent à l'action destructive du sérum d'anguille. Enfin leur sérum sanguin ou leur plasma protège les globules du sang d'un autre animal, non immunisé, contre l'action globulicide du sérum d'anguille. Ces faits constituent trois preuves concordantes de l'état réfractaire acquis par les animaux dont il s'agit.
n nous paraît inutile de rapporter ici toutes les expériences, semblables à celles-ci , que nous avons faites. H sera préférable sans doute de représenter quelques-unes de ces expériences par des courbes analogues à celles que l'on a déjà vues dans ce travail.
Voici d'abord deux graphiques qui montrent que les globules rouges du lapin immunisé ne laissent plus diffuser leur hémoglobine sous l'intluence du sérum d'anguille, mais ont acquis une résistance spécifique, identique à celle des globules du hérisson, c'est-à-dire d'un animal pourvu de l'immunité naturelle.
Courbe n° 9. — Lapin de 1.510 gr. Courue n" 9'''». — Lapin de 1.620 gr. immunisé. immunisé.
SolutionNaClp.lOO
Sérum d'anguille
D'autre part, les courbes suivantes montrent que le sérum d'un animal immunisé empêche in vitt^o l'action dissolvante du sérum d'anguille sur les globules rouges (voyez courbes 10 et H).
Courbe n" 10. — Lapin cf, 4 kgr.
Solution NaCl p. 100
Sérum d'anguille
Sérum de lapin immunisé. . .
Bien entendu, la contre-épreuve, c'est-à-dire l'expérience consistant à ajouter à l'ichtyotoxique, au lieu de sérum d'immu-
nisé une égale quantité de sérum d'un animal normal, ne donne qu'un résultat négatif : le sérum d'anguille conserve,
Courbe n° 11. — Lapin albinos $, 4 kgr.
Solution NaCl p. 100
Sérumd'anguille. I/IOOO 1/2000 1/4000 1/80C0 l/lOOOO 0 l/lOOO 1/2000 1/4000 1/8000 1/10000 Sérum de lapin
immunisé ... 0 0 0 0 0 0 l/lOO l/lOO l/lOO 1/100 1/100
dans cette condition, fout son pouvoir globulicide, comme on peut le voir sur la courbe n° 42.
Courbe n" 12. — Lapin albinos 9 , 4 kgr.
Solution NaCl p. 100
Sérum anguille 0
Sérum lapin immunisé 0
Sérum lapin normal (exp. témoin). 0
Quand la quantité injectée de sérum d'anguille a été trop faible (doses insuffisamment répétées), la réaction de l'organisme qui conduit à l'élat réfractaire n'a pas lieu ; ni les globules
des animaux ne deviennent résistants, ni leur sérum ne devient antiglobulicide.
Le sérum des animaux immunisés présente ce caractère remarquable de pouvoir être chauffé à 58° pendant 13 min. et plus, sans perdre la propriété spécifique qu'il a acquise. Il se comporte donc vis-à-vis de la chaleur d'une manière absolument différente du sérum d'anguille ; ce dernier, on se le rappelle (voyez p. 42), chauffé à 58° pendant un quart d'heure, cesse d'être globulicide! 11 y a là un caractère différentiel que nous utiliserons plus loin. La courbe nM3 montre nettement ces deux faits.
Courbe n<» 13. — Lapin albinos 9, 4 kgr.
Solution NaCl p. 100
Sérum d'anguille, o Sérum d'anguille
chauffé 0
Sérum chauffé de
lapin immunisé. G
2. Conséquences du phénomène. — Les deux principaux résultats de ces expériences sont très clairs. En premier lieu, le sang des animaux immunisés a acquis une résistance extraordinaire au sérum d'anguille. Le sang d'un animal très sensible à Faction de ce sérum, le lapin, par exemple, devient à cet égard comparable à celui d'un animal naturellement réfraclaire, comme le hérisson. La question est maintenant de savoir si cette résistance naturelle des globules rouges du hérisson et la résistance acquise des globules de ces lapins tiennent à une propriété des globules eux-mêmes ou à quelque substance du plasma sanguin
qui agirait comme antagoniste du sérum d'anguille. C'est ce que nous examinerons plus loin.
Le second re'sultat sur lequel nous insistons, c'est que le sérum des animaux immunisés empêche l'action globulicide du sérum d'anguille. Par le fait de l'immunisation, le sérum sanguin a donc acquis une propriété nouvelle.
Ici se posent quelques questions intéressantes. On peut se demander comment le sérum des animaux immunisés acquiert la propriété antitoxique et, d'autre part, en quoi consiste cette dernière, si elle est d'ordre chimique ou physiologique. L'importance est grande de ces questions, au point de vue de la doctrine de l'immunité.
3. Formation de la substance antiglobulicide dans V organisme ; conditions de cette formation. — Comment le sérum devient-il antiglobulicide? Il nous a semblé qu'il y a au moins deux manières d'aborder ce problème. On peut d'abord se demander si, en immunisant des animaux contre une substance globulicide, quelle qu'elle soit, on ne les rendrait pas ipso facto réfractaires à l'action globulicide du sérum d'anguille. 11 y avait là une généralisation qui, si elle eût été vérifiée par l'expérience, n'eût pas manqué d'être intéressante. C'est dans cette idée que nous avons essayé d'immuniser des lapins contre l'ichtyoloxique au moyen de sérum de chien. Ces essais nous ont donné des résultats négatifs. II est, pour cette raison, sans intérêt, croyonsnous, de relater les protocoles de ces expériences et de présenter les courbes qu'elles nous ont fournies. Semblablement, les globules de ces animaux n'avaient point acquis de résistance au sérum d'anguille et leur sérum sanguin ne manifestait aucune propriété antitoxique vis-à-vis de celui de l'anguille.
Nous nous sommes alors demandé si le fait seul de la mise en liberté de l'hémoglobine dans le sang ne suffirait pas à rendre les globules plus résistants. Nous avons cherché dans ce but quel serait l'efiet d'injections, répétées à divers intervalles, de solutions d'hémoglobine; nous avons employé du sang de lapin laqué. Ces expériences ont été négatives comme les précédentes. Toutefois, nous avons remarqué que les globules d'un animal
(lapin) qui avait reçu plusieurs injections de sang laqué (20 c. c. en 4 jours), avaient acquis une légère résistance au sérum d'anguille; ils ne laissaient plus diffuser leur hémoglobine dans la solution à i /6.000
De tout ce qui précède faut-il conclure que, pour que l'organisme puisse être mis en état de produire une antitoxine donnée, il est nécessaire qu'il ait préalablement reçu la toxine correspondante ? Cette conclusion est infirmée par notre seconde série d'expériences.
On pouvait, en effet, penser que, en préservant des animaux contre l'action toxique générale du sérum d'anguille, on rendrait leurs globules réfractaires à l'action dissolvante si intense de ce liquide. Mais on a vu (p. 56-67) que ces essais d'immunisation n'avaient pas été très heureux. De même, au point de vue spécial auquel nous sommes maintenant placés, aucun des liquides que nous employions dans ce but n'a manifesté de propriété antiglobulicide, ni le sérum d'anguille chauffé, ni le sérum de hérisson, chauffé ou non, ni le sérum antivenimeux, ni l'antiplasmase, ni les solutions de leucine ou de tyrosine. — Seul, le sérum d'animaux ayant reçu du sérum d'anguille chauffé nous a donné des résultats positifs. Pour que le sang des animaux que l'on veut immuniser par ce procédé devienne antitoxique, il est nécessaire que l'on injecte à ces animaux pendant assez longtemps d'assez grandes quantités de sérum chauffé. Le sérum d'un animal (lapin ou cobaye) qui n'a reçu que 1 ou 2 c. c. de sérum chauffé ne manifeste pas de propriété antiglobulicide. Voici au contraire un lapin (a^de i.529 gr.)qui a reçu en 9 jours 4,9 c. c. de sérum chauffé ; une saignée carotidienne, faite à cet animal deux jours après la dernière injection, a fourni un sérum nettement anlitoxique ; on peut en juger par la courbe n° 14, p. 77. On voit par cette expérience qu'une dilution de ce sérum à 1 /400, que celui-ci ait été ou non chauffé (le chauffage, comme nous l'avons déjà dit, ne déiruit pas l'antitoxine), neutralise l'action d'une dilution de sérum d'anguille à 1/2.000, mais ne peut détruire l'effet d'une dilution à 1/1 .000. Ce dernier résultat est intéressant à rapprocher du fait que l'on constate sur les
courbes n<" 11 et 12, où l'on voit le sérum de lapin immunisé à 1/100 neutraliser encore la dilution à 1/1.000 de sérum d'anguille ; il faut donc admettre que, dans les cas où l'immunité se produit sous l'influence du sérum d'anguille chauffé (non toxique, par conséquent), il y a dans l'organisme formation moindre d'antitoxine que dans le cas où l'immunité se produit sous l'influence de la toxine elle-même; en d'autres termes, il y a réaction moindre de l'organisme.
Courbe n» 14. — Lapin albinos 9, 1.960 gr.
Solution NaCl 0,66 p. 100 : f f t t t Sérum d'anguille . . . . i/iooo 1/2000 1/4000 1/8000 l/ioooo
Solution NaCl 0,66 p. 100 : f 0 0 0 0 Sérum d'anguille . . . . i/iooo 1/2000 1/4000 i/sooo i/ioooo Sérum de lapin immunisé l/lOO l/lOO l/lOO i/lOO l/lOO
Solution NaCl 0,66 p. 100 : f 0 0 0 0
Sérum d'anguille. . . . 1/1000 1/2000 1/4000 1/8000 i/ioooo Sérum chauffé 15' à 58»
de lapin immunisé . . l/loo 1/100 i/loo i/iOO 1/100
Diffusion constatée après 7 h.
et après 24 h.
Constatations faites après 1 h.
et après 24 h.
Idem.
Ces observations ne présentent-elles pas une grande portée théorique? Il convient de se rappeler que le sérum d'anguille chauffé a perdu tout pouvoir globulicide. Or, il n'en reste pas moins pour cela susceptible de donner lieu à la formation d'une substance spécifiquement antitoxique qui passe dans le plasme sanguin*. 11 n'est donc pas, ce semble, nécessaire qu'il y ait à un moment donné une toxine dans l'organisme pour que celui-ci puisse produire l'antitoxine correspondante. Nous apportons ici une preuve très simple, facile à donner in vitro, de ce fait.
1. On pourrait, il est vrai, nous objecter que le sérum d'anguille chauffé contient encore de très petites quantités de substance toxique. Il est facile de répondre qu'il est impossible d'y déceler trace de substance globulicide, puisque dans ce sérum tel quel, si l'on y fait tomber une goutte de sang, les globules restent intacts. A la vérité, de ce que ce sérum ne détruit plus les globules, il ne suit pas nécessairement qu'il ne puisse altérer d'autres éléments cellulaires de l'organisme, plus sensibles que les hématies. Aussi bien, le sérum chauffé, comme nous l'avons montré, est encore susceptible, dans quelques cas, et à dose extrêmement forte, de déterminer des accidents nerveux passagers. En conc!ura-t-on qu'il contient encore un peu de toxine spécifique pouvant donner lieu à la réaction organique qui aboutit à la formation d'antitoxine (substance anliglobulicide) ?
Remarquons encore que, dans ce cas, c'est-à-dire sans qu'il y ait eu intervenlion préalable d'une toxine, il peut y avoir réalisation de l'état d'immunité active (immunité active d'Ehrlich). Bien entendu, il faudrait se garder de généraliser cette proposition. Toujours est-il cependant que, dans le cas particulier, sa vérité apparaît certaine».
Il est facile de démontrer en effet que le sérum d'anguille chauffé n'a pas par lui-même la propriété antiglobulicide ; celle-ci ne peut lui venir du sérum normal, où ne préexiste pas d'antitoxine à côté de la toxine; s'il en était autrement, le chauffage qui, nous le savons, abolit la propriété globulicide, sans altérer la propriété antiglobulicide, ferait du même coup apparaître cette dernière. Or, de nombreuses expériences, dans lesquelles nous avons mélangé du sérum chauffé à du sérum normal et vu que ce dernier conserve toute son activité, ne nous permettent pas de tenir cette interprétation pour exacte.
Nous pouvons même généraliser ce fait. Car nous avons reconnu que les autres sérums globuUcides, le sérum de chien, par exemple, ou celui de hérisson, qui, chauffés à S8« pendant 15 minutes, ont perdu tout pouvoir globulicide, n'ont nullement acquis pour cela de propriété antiglobulicide. Ainsi le sérum de chien chauffé n'empêche point l'action dissolvante du sérum normal de chien sur les globules du cobaye. Le sérum de hérisson, dont les globules rouges sont, comme nous l'avons vu, extrêmement résistants à l'action du sérum d'anguille, ne contient pourtant pas trace de substance antiglobulicide. Quoiqu'il
1. On avait bien montré déjà que des substances non spécifiques peuvent conférer l'immunité, mais l'immunité passive, contre certaines infections ou intoxications (voyez particulièrement un travail déjà cité de Calmette et Deléarde, dans les Annales de l'Institut Pasteur, t. X, p. 675-707, 1896) ; et cette question a pris plus d'importance depuis les découvertes de Phisalix (Soc. de BioL, 1897 et 1898) sur les propriétés vaccinantes de substances chimiquement définies, comme la cholestérine, la tyrosine, etc. Dans d'autres expériences, Phisalix (La propriété préventive du sérum antivenimeux résulte d'une réaction de l'organisme : c'est donc en réalité une propriété vaccinante. C. R. de la Soc. de DioL, 3 mars 1898, p. 253) a montré qu'avec des doses très faibles de sérum antivenimeux on peut vacciner des animaux contre le venin de vipère et que le sérum de ces animaux devient à son tour susceptible de vacciner d'autres animaux, sans être toutefois antitoxique ; il y a donc dans ce cas production par l'organisme d'une substance vaccinante, mais sous l'inlluence d'une substance vaccinante elle-même.
s'agisse là d'une observation ne'gative, en raison de son importance, nous en donnerons un spécimen dans la courbe n° 15.
Courbe n" 15. — Cobaye^ 9 700 gr.
Solution NaCl à 0,66 p. 100 : t t t t !
Sérum de hérisson l/ioo 1/200 1/400 1/600 1/800
Sérum de hérisson chauffé à SS" 15 minutes . . i/30 i/30 1/30 1/30 1/30
Solution NaCl à 0,66 p. 100 : t t 0 O t t » (')
Sérum de chien i/lOO 1/200 1/400 1/100 1/200 1/400
Sérum de hérisson chauffé i/50 1/50 1/50 1/30 1/30 1/30
Solution NaCl à 0,66 p. 100 : fttt |||||
Sérum d'anguille 1/100 1/200 1/400 1/6OO l/loo 1/200 1/400 1/6OO 1/8OO
Sérum de hérisson chauffé . 1/50 i/50 1/50 1/50 1/30 1/30 1/30 1/30 1/3)
De toutes ces données, il résulte que la substance antitoxique, formée dans l'organisme sous l'influence soit de la toxine ellemême, soit exceptionnellement d'autres corps qui donnent lieu à la même réaction que cette toxine, est spécifique; elle n'a pas, en effet, le pouvoir de neutraliser d'autres toxines dont l'action physiologique paraît cependant identique.
Dans le même ordre d'idées, d'autres problèmes seraient à résoudre, concernant le mode de formation de l'antitoxine dont nous nous occupons. Oii se forme cette substance ? Aux dépens de quels corps se produit-elle ? Ce sont là des questions sur lesquelles nous n'avons pas porté nos investigations.
4. Nature de Faction antiglobidicide. — L'autre question que nous avons essayé de résoudre est celle-ci : en quoi consiste l'action antitoxique, est-elle d'ordre chimique ou physiologique ' ?
Dans nos expériences, comme dans celles de Ehrlich sur l'influence de la ricine et de l'antiricine sur l'agglutination du sang, le problème est ramené à ses termes les'plus simples : une
1. Nous nous sommes assurés que, dans les mômes conditions, les globules du lapm réagissent de la même façon.
2 Le sérum normal de chien, à cette dilution (entre 1/400 et 1/600), ne manifeste en général plus de pouvoir globulicide.
3^ Cette question a été pour nous l'objet d'une note préliminaire (L. Camus et E. Gley : Sur e niécamsme de l'immunisation contre l'action globulicide du sérum d'anguille. C. R. de L'Acad. des Se, t. CXXVIl, p. 330, 8 août 1898)
quantité très petite (dans notre cas, une quantité infinitésimale) de matière suffisant à modifier le globule rouge de telle sorte que cet élément laisse diffuser sa substance colorante, une quantité non moins faible et proportionnelle d'une autre matière suffit à empêcher la première de produire cette altération de l'élément anatomique. On peut penser que, dans les deux cas, c'est le globule lui-même qui réagit; et, dans le second cas, quand il se trouve en contact avec l'antitoxine, sa perméabilité ne peut plus être accrue par la toxine ; c'est sa résistance, au contraire, qui a augmenté. De fait, dans quelques expériences, le sérum antiglobulicide nous a paru augmenter légèrement la résistance normale des globules rouges du lapin.
Ou bien on peut penser que l'antitoxine se combine avec la toxine, de manière à neutraliser cette dernière ; ce serait là un véritable phénomène de neutralisation chimique. C'est, on le sait, l'interprétation que Ehrlich a donnée de ses expériences sur l'antagonisme de la ricine et de l'antiricine. C'est l'interprétation la plus simple. La façon même d'ailleurs dont se passe le phénomène est en sa faveur; l'antitoxine agit sur la toxine suivant la loi chimique des proportions simples ; c'est donc que les deux corps se combinent. Aussi bien, les doses d'antitoxine qui, in vivo^ neutralisent des doses mortelles de toxine, sont avec ces dernières dans le même rapport simple.
Nos expériences nous permeltent-elles d'admettre de préférence l'une ou l'autre de ces théories ?
Rappelons d'abord que les globules rouges du hérisson possèdent une résistance considérable à l'action destructive du sérum d'anguille ; cependant le sérum de cet animal ne contient pas d'antitoxine. En eff"et, nous avons vu que, si la substance globulicide perd tout son pouvoir, quand on chauff'e le sérum àSS'' pendant 15 m., au contraire, la substance antitoxique qui se trouve dans le sérum des animaux immunisés n'est nullement altérée par ce chauffage. Chauffons donc du sérum normal de hérisson, animal naturellement réfractaire à l'action du sérum d'anguille; ce sérum chauffé ne devient en aucune façon susceptible de s'opposer à l'effet de l'ichtyotoxique sur les globules
rouges du lapin ou du cobaye (voyez la courbe n" 45). Ce n'est donc pas grâce à la présence dans leur sang d'une antitoxine pouvant neutraliser chimiquement la toxine introduite que les hérissons sont pourvus d'une immunité naturelle contre le sérum d'anguille, mais leurs globules possèdent une résistance spécifique'. — Rappelons encore ici que le sérum d'anguille chauffé, comme nous l'avons vu, ne manifeste non plus aucune propriété antiglobulicide. Ce ne peut donc être qu'en vertu de leurs propriétés physiologiques que les globules rouges de cet animal résistent à l'action si énergique de la substance globulicide qui circule dans son propre sang».
Ne serait-il pas très intéressant de rapprocher ces faits de la série de ceux qui ont montré que le sang d'animaux pourvus de l'immunité naturelle contre telle ou telle infection microbienne ne possède pas de propriétés bactéricides?
Il y a là, par conséquent, un mode d'immunité parfaitement déGni, que l'on pourrait appeler cytologiqiie (immunité histogène de Behring). Il concerne, qu'on le remarque, l'immunité naturelle. La question se pose donc irrésistiblement de savoir s'il en est de même pour l'immunité acquise. Voici comment nous avons essayé de résoudre le problème.
Un animal (lapin, par exemple) étant immunisé contre le sérum d'anguille, on lui fait une saignée (soit par la carotide, soit par la fémorale) ; le sang est reçu dans de l'oxalate neutre
1. Il serait curieux de voir si l'on ne pourrait pas faire produire à l'organisme de ces animaux des substances anlitoxiques (la substance antiglobulicide, dans le cas qui nous occupe). C'est ce que nous avions commencé à chercher sur deux hérissons ; malheureusement, ces animaux sont morts au cours de la période d'immunisation. — Calmette et Deiéarde (travail cité) se sont déjà posé cette intéressante question et l'ont résolue affirmativement, en constatant que le sérum de poule immunisée contre l'abrine (la poule est un animal naturellement peu sensible à l'abrine) a acquis la propriété d'immuniser le lapin contre celte toxine végétale.
2. Calmette cl Deiéarde [loc. cit.) soutiennent de môme « qu'il n'existe, dans le sang des reptiles, aucune substance antitoxique capable de justifier l'immunité relative qu'ils possèdent à l'égard du venin, ou que, si celle substance existe, elle se trouve juxtaposée à une substance toxique dont il ne nous a pas été possible de la séparer » (p. 680). On sait que Phisalix et Bertrand (Sur l'emploi du sang de vipère et de couleuvre comme substance anlivenimeuse. C. /{. de la Soc. de BioL, 23 novembre 1895, p. 751) ont émis l'idée absolument contraire.
(le potasse, pour empêcher la coagulation (c'est-à-dire à la dose de 2 p. 1.000), puis on le soumet à Faction de la force centrifuge; après 16 heures, on décante le plasma. On opérera, d'une part, avec ce plasma. D'autre part, la bouillie globulaire est soigneusement lavée deux fois de suite avec une solution hyperisotonique de chlorure de sodium et finalement on la dilue avec un volume de cette même solution égal au volume du plasma. Il est indispensable que toutes ces opérations soient réalisées ciseptiquement.
Comment se comportent ces globules et ce plasma vis-à-vis du sérum d'anguille? Il faut distinguer deux cas, suivant que l'animal a été immunisé avec le sérum normal d'anguille ou avec ce sérum chauffé.
Dans ce dernier cas, les globules ne résistent pas plus à l'action destructive du sérum d'anguille que les globules d'un animal témoin (le sang de cet animal non immunisé ayant été traité exactement de la même façon). Au contraire, le plasma contient la substance antiglobulicide que nous avons accoutumé de trouver dans le sérum des animaux immunisés. Ici, par conséquent, les globules de l'animal immunisé n'ont acquis aucune propriété spécifique de la part de l'antitoxine qui circule cependant avec eux dans le sang, de la part de la substance spécifique qui les baigne. Si donc ils résistent à l'action de la toxine, quand ils y sont soumis, ce ne peut être que parce que l'antitoxine empêche cette action de s'exercer. Le phénomène ne parait guère explicable autrement que par l'action des deux substances l'une sur l'autre, par la neutralisation chi mique de la toxine par l'antitoxine (théorie d'Ehrlich). A admettre une action de l'antitoxine sur l'élément anatomique et non sur la toxine, on serait obligé de supposer que les propriétés des globules rouges (perméabilité diminuée, résistance accrue), tenant à la constitution physico-chimique de ces éléments, ne se trouvent modifiées qu'autant et tant qu'ils sont en contact avec l'antitoxine ; dès que celle-ci a été éliminée du milieu, ils redeviendraient semblables à des globules ordinaires. Mais contre cette explication, purement hypothétique d'ailleurs,
on peut invoquer les expériences qui établissent qu'il y a proportionnalité simple entre les quantités d'antitoxine et de toxine qui se neutralisent, c'est-à-dire en définitive que le phénomène se développe comme un phénomène chimique. C'est ce qui est arrivé aussi bien dans les expériences de Ehrlich avec la ricine et l'anliricine et dans celles de Stephens et Myers avec le venin de serpents et le sérum antivenimeux que dans les nôtres et celles de H. Kossel avec le sérum d'anguille et le sérum antiglobulicide.
On est donc amené à penser qu'il y a là un second mode d'immunité tout à fait différent du premier, immunité d'ordre chimique, tenant à l'action chimique réciproque de deux substances, et que l'on peut appeler humorale (immunité par une substance contenue dans les humeurs), par opposition à l'immunité cytologique. Or, il s'agit ici d'une immunité acquise. Celle-ci, dans le cas tout au moins du sérum d'anguille, pourrait dépendre conséquemment d'un tout autre mécanisme que l'immunité naturelle.
Hâtons-nous cependant de faire une réserve, qui tient à la distinction que nous avons indiquée plus haut, entre l'immunisation par le sérum d'anguille normal et l'immunisation par ce même sérum chauffé. C'est ce dernier cas que nous venons de considérer. Mais dans le premier cas les choses sont plus complexes. Il se forme bien toujours et l'on trouve bien toujours dans le sérum sanguin et dans le plasma une substance antitoxique, mais les propriétés essentielles des globules rouges se modifient aussi ; la résistance de ces éléments augmente et tend à devenir comparable à celle des globules d un animal naturellement réfractaire, comme le hérisson. C'est ce qu'il est facile de reconnaître au moyen d'une expérience identique à celle que nous exposions tout à l'heure. Sur un animal (lapin) immunisé par de petites doses répétées de sérum d'anguille, on fait une saignée, on sépare par la cenlrilugation les globules du plasma on lave les globules, comme il a été dit, pour les débarrasser de toute trace d'antitoxine, et on éprouve leur résistance vis à VIS de l'ichtyotoxique. On constate que cette résistance est
augmentée'. On constate, d'autre part, que le plasma contient une substance antiglobulicide. Dans nos expériences, la résistance des globules a été quelquefois assez peu augmentée pour que nous ayons pu nous demander si cette légère modification ne tiendrait pas à la présence d'une très petite quantité d'antitoxine, persistant malgré le lavage des globules. Pour être assuré qu'il n'en est rien, il faut voir la résistance des globules augmenter à mesure que l'immunisation devient plus profonde. — Le processus d'immunisation aboutit dans ce cas à une modification dans la constitution des éléments anatomiques qui sont en jeu, telle que cette constitution devient analogue à celle que présentent les mêmes cellules chez les animaux pourvus de l'immunité naturelle. Les deux sortes d'immunité, immunité active d'Ehrlich l'une et l'autre, coexistent par conséquent ici, l'immunité humorale et l'immunité cytologique.
De ces données sortent par voie déductive des conséquences assez importantes. Pour certaines infections ou intoxications deux modes d'immunité paraissent possibles, l'un qui consiste en la formation dans l'organisme d'une antitoxine et l'autre, dans lequel s'ajoutent à ce phénomène des modifications cellulaires profondes. N'est-on pas enclin à penser que cette dernière réaction doit constituer une immunité plus sûre à la fois et plus durable? Ne sait-on pas, en effet, que souvent, dans beaucoup d'infections, l'immunité existe encore, alors qu'il n'y a plus d'antitoxine dans le sang? Ace point de vue, il serait intéressant de rechercher si, au fur et à mesure que se développe l'immunité cytologique, l'immunité humorale ne s'affaiblit
1. Ce fait a été brièvement, mais très clairement, signalé par H. Kossel {loc. d/.). Voici, en effet, ce qu'il dit à ce sujet : « Ich priifte die vom anliloxischen Sérum sorglaltig befreiten rothen Blutkôrperchen meiner immunisirten Kanincben auf ihr Verhallen gegeniiber dem Aalgifl und konnie festslellen, dass sic widcrstandfahiger gegen die auilosende Wirkung des Giftes geworden waren und zvvar enlsprechend dem Grade der Immunilât der Thiere. » — Mais dans cette expérience comme dans celle que nous donnons ici même, il conviendrait sans doute, pour apprécier à sa valeur l'augmentation de résistance signalée des hématies, de tenir compte de ce fait que, sous l'influence de 1 mjcction de toxine, les globules les moins résistants ont été nécessairement dclruils; il faudrait par suite distinguer entre l'augmentation apparente de résistance globulaire, tenant à ce phénomène, et l'augmentation réellement due au processus immunisant.
ACTION PHYSIOLOGIQUE DES ICHl YOTOXINES 85
pas, si l'antitoxine n'est pas formée en moindre quantité ou même ne disparaît pas. Le second mode serait ainsi un procédo d'abord mis en l'œuvre par l'organisme comme plus facile et plus rapide, mais auquel peut faire suite le premier.
Comment comprendre, il est vrai, la substitution de l'un à l'autre ou môme la simple coexistence des deux modes? Le cas dont il s'agit ici, immunisation contre le sérum d'anguille, oflre encore cet avantage de fournir peut-être aussi sur ce point difficile une explication plausible. La toxine détruisant des globules rouges en plus ou moins grand nombre, les globules nouveaux, formés quand le plasma dans lequel ils sont baignés a subi des modifications assez profondes, ne doivent-ils pas subir à leur tour l'influence de ce plasma et acquérir des propriétés qui diffèrent de celles des globules dont la genèse se fait au contact d'un plasma normal? Ainsi naîtraient et se développeraient des éléments anatomiques pourvus d'une propriété nouvelle. Dans cette hypothèse, on rendrait compte plus aisément de la persistance de l'immunité acquise vis-à-vis de diverses infections et même de la transmission héréditaire de cette immunité.
in. — Conclusions.
Ces expériences sur l'immunisation contre le sérum d'anguille nous ont permis d'établir sur des preuves très simples, in vitro, quelques données qui ne laissent pas de paraître intéressantes : le fait de la réaction directe d'une antitoxine sur une toxine ; l'atténuation d'une toxine par le chauffage et la non-atténuation de l'antitoxine ; la formation d'une antitoxine par une réaction de l'organisme produite sans intervention de la toxine correspondante; le moyen, par l'étude d'une réaction cellulaire simple, de constater l'apparilion de l'antitoxine et de suivre les variations de l'activité de cette substance; la détermination de la nature des deux sortes d'immunité, la naturelle, qui tient à une propriété de cellule, et l'acquise, qui dépend des propriétés d'une antitoxine et de la neutralisation chimique de la toxine
par cette antitoxine ; la détermination, dans l'immunilé acquise elle-même, à côté de ce mécanisme chimique, d'un mécanisme perfectionné, qui n'est autre chose qu'une immunisation d'ordre cytologique, comme est l'immunité naturelle.
