TABLEAU XI

Influence sur la numération

de ia nature des peptones ler Essai :!

Glycocollate Peptone Peptone Peptone Peptone

cuivrique(D=1) n°1 n°2 | n°3 F ea O Témoin 745 1" 768 780 ét 0,2 cm 750 756 770 656 DA se 456 756 RU .

Fa ss = 13e 640 472 Een de ARE 840 | 108 PQ 295 588 728 75 re . 252 620 41 2 ( 416 a a. Me |

On constate que :

a) les 4 témoins sans cuivre donnent des chiffres assez voisins pour les 4 marques de peptones utilisées.

b) Cependant, l'action anticénétique du cuivre est beaucoup moins nette en présence de la peptone n°5 qu'en présence .des trois autres. C'est l'inverse pour la peptone n°4. |

c) Enfin, dans les 4 séries, on constate à certaines concentrations üun maximum de l'activité antigénétique du cuivre.

2ème Essai -

On part de la même souche de staphylocoques dorés ra jeunie par un repiquage récent, qu'on ensemence sur gélose mais cotte célose renferme une peptone (A) et une autre (8) de marque différente dans une série parallèle, Après : 24 heures d'étuve =à +70C, on prépare deux suspensions bactériennes À et B, à partir des colonies apparues, Un même volume de chaque suspension dans l'eau phnysiologique est alors mélangé avec chacune des géloses À et B, auxquelles on ajoute des quantités progressives de glycocollate cuivrique., On emploie toujours 0,5 cmo de suspension d'écale turbidité pour 10cm de gélose à couler sur les plaques. On obtient donc 4 séries de plaques sur lesquelles à leur tour on effectue des numérations.

Corme plus haut schématiquement les résultats de celles-ci peuvent être présentés dans le tableau suivant :

TABLEAU XIT

Influence de la nature des peptones

sur les numérations

2ème Essai :

Glycocollate Suspension et plaques Suspension et plaques cuivrique : provenant de la provenant de la D = 1 Peptone A Peptone B Numération |Numération Numération | Numération sur sur sur sur Gélose A Gélose B Gélose A Gélose B O Témoin #2-000 1.900 1,699 1,609 0,5 cm® 2,000 1,400 PROD 97 OA 1.200 1.100 14/0004. 79 06:21 2,000 : 1,300 : 800 Et ares | 1.200 1.100. 540 29 Es LR QE 15700725 1,009 400 . Al

RSC. 1,500 1.409 100 20

Insistons sur le fait que dans ce deuxième essai, seule le nature de la peptone a changé, tous les autres facteurs : pélose, pé, durée du passage à l'étuve à +27°C, importance de l'imoculat, restaient identiques, pour aboutir aux quatre numérations représentéos sur cnaque lisne horizontale du tabieau et nous constatons que:

a) quand la bactérie utilisée a vésété une première fois sur une peptone À salle résiste mieux ensuite d'aprés les aumérations, l'action du Glycocollate de cuivre que la même bactérie ayant véété sur la peptons B,

Ge

Cola reste vrai, que la numération consécutive en présence du cuivre ait été faite sur milieu contenant 13 peptone À ou la peptons B, Tout se passe comme si la bactérie avait emorunté & À, un facteur favorisant pour elle la résistance vis-à-vis du cuivre eë si elle conservait ce facteub par la suite au moîns pendant quelque L temps. ; |

Cette première oonstatation nous amènera donc à recüercher si quelques facteurs de croissance présentent une influence sur l'activité du conplexe cuivrique.

b}) Dans nos milieux une concentration en cuivre atteisnant 229 millgr/litre a toujours amené une rerression nette du développement du staphylocoque dans une durée de trente-six neures, à le température de +57°C.

c) Gowns conséquence, pratique de ces essais, nous avons été amenés à supprimer non seulement la viande des milieux destinés aux nunérations mais encore à employer une seule maroue de peptone dans tous les essais, peptone dont nous avons mis de côté un stock suffigant pour ia totalité de nos essais à exécuter par la suite. Grâce à cos milieux, on a purréussir à obtsnir dans des numérations répétées la stabilité relative dass résultats. |

| Outre l'eau peptonée, nous avons utilisé comme milieu le sérum de boeuf liquide et vériflé stérile, le sérum de bosuf coasulé par la chaleur et vérifié stérile,

4) Numérations des colonies sur boites dé Pétri (de 10 em @e diamètre). Elles étaient exécutées de facon à ce qu'elles ne soient ni trop riches ni trop pauvres, afin d'obtenir des chiffres suffisamnent sirnificetifs après apparition des colonies, La lecture se faisait grace à un montase comportant une lentille concave de 15 cm ie diamètre et 20 centimètres de distance focale, avec un éclafrare latéral, Ce dispositif facilicait les numéretions, et permettait

dtobserver toutes les colonies même très petites.

Chaque colonie comptée sur la boîte était marqués à l'en- Crée, Le compte se faisant par croupe ds cent, les centaines sont sdditionnées et les colonies restantes dénombrées en plus.

AB “rreurs commises dans les numérations :

Pour estimer les écarts possibles dans les cuiffres fournis dans une numération, nous avons exécuté l'essai suivant :

Une suspension nomogène de Stapnylocoque doré a été préparée fe facon à lui donner une turbidité égale à celle d'un tube de O pr,20 d'aïlbumine dans la same de Kingsoury s C'est la dilution initiale, Par dilution successive (toujours dans i'eau stérile) nous réalisons une dilution finale D = 10 .000 fois plus grande que la suspension RALELATS,

Nous avons éensemaencé C,5 ce de cette suspension finale dans 19 boites de Pétri identiques dans lesque lies a été coulée ensuite une gélose nutritive liquéfiée et ramenée à la température de 45° avant sa coulée. Cnaque boite recoit aïinsi 10 ce de cette sélose. La dispersion est le mélanse des liquides sont soisneusenent exécutés, et les boîtes refroidies jusqu'à +57°C sont mises immédiatement à l'étuve où elles restent pendant 56 heures. äu bout ds ce temps, on dénombre les colonies apparues sur chacune d'elles, et comne chaque boîte est très chargée, la numération se fait sur 1/4 äe disque, Elle peut être contrôlée dans chaque boite par la lscture sur le 1/4 opposé,

Les nombres es colonies alnsi lues ont été les suivants:

Reoo Ma LD St de 1700 LE ET É00 AS 41600 TÉDOEE ed 600: Mie 5 226800 n2+ eT600 02 270 1600

Ces nombres sont obtenus à quelques colonies prèa et l'on Sir oue itécart maximum entre deux numérations ne dépasse pas PRO (bien entendu lorsque les suspensions de bactéries ont 6t6 correctement faites),

Dans les sssais qui seront décrits plus tard, nous nous sommes attachée à faire en sorte que chaque boite parts environ 1 millier de colonies sur les plagues témoins servant au contrôles des essais.

On notera que dans l'essai ci-dessus décrit, les 10 voites de Pétri contenaient des milieux de composition identique, 6n particulier, elles provenaient de la même eau peptonée, et d'autre part, elles ne contenaient pas de cuivre surajouté.

La gamme de Kingsbury qui a fourni les étalons de turbiâits pour ies suspensions bactériennes à réaliser, à été publiée en 1926 par Kingsbury, et la description en a été reproduite en 1944 par Meac-Lacandans la Gescription de son Thymol-lsst.

Elle est formée d'une série de tubes calibrés de turiidité croissante, ütilisée aux États-Unis pour le dosare de l'albumine par l'acide sulfo-salycilique, et sert à fixer les unités de ac Lagan du Thymol-Test, de cet auteur. Ces tubes contiennent un précipité très fin et très stable de formazine en suspension LEFE

de la gélatine. Elle correspond néphélométriquement en aloumine/litre à des concentrations échelonnées de :

025028 040% 060) 00 0,20 0,10 grammeflitre.

Chaque tube doit être scellé à la cire et paraffiné. La gamme placée dans un endroit frais est de très bonne conservation et de lecture très nette et stable, c'est pourquoi nous l'avons utilisée dans nos essais. LEE

Reuarques à propos des numérations de germes sur milieu solide,

Par les essais qui vont suivre, nous allons voir que des numérations effectuées sur des suspensions de germes ne contenant pas plus de 20 millgr par litre de cuivre seront suffisamment exactes comme approximation st leur dilution âans la gélose n'est pas inférieure à D = 20, soit 0,5 cm de suspension pour 9,5 cmS de gélose destinée à obtenir la plaque de numérations, et ceci que la ee soit faîte dans l'eau peptonée ou dans l'eau du robinet stérile,

Expérience

Numérations de germes, (Stapnylocoque doré )}, dispersés dans l'eau peptonée.

< On part d'une dilution convenable de ces germes préparée à partir d'une colonie sur gélose, Une première dilution, de turbidité convenable, subit des dilutions successives toujours dans l'eau peptonée. En même temps; par ‘addition de solution mère de glycocollate de cuivre, (solution stérile), en quantités mesurées, on donne à ces suspensions bactériennes les deux concentrations suivantes exprimées en cuivre :

1) 100 millcr/litre 2) 20 miligr/litre

F On rappolle ici pour cela, que la solution mère de cuivre Gilycocollate de cuivre, D = 1, est elle-même à 1a concentration de 20 millgr dans 8 cc. On cherche en définitive à réaliser des suspensions dans l'eau peptonée contenant aussi environ 1000 germes par 1/2 cm$ et les concentrations en cuivre indiquées (100 millgr/ litre et 20 millzr/litre), Ce sont ces deux suspensions sur lesquelles on a fait les numérations dans les conditions suivantes-

en eau peptonée pélosée, | Dilution (D = 20

Res On ensemence 9,5 ce de suspension au Cuivre, dans 9,5cc de rélose peptonée, On prépare trois tubes semblables; deux d'entre eux serviront à préparer chacun une boite de Pétri. Avec le troi-

siome on préparera une dilution gélosée D = 100. Pour cela, 2 cc de dilution rélosée D = 29 sont reçus dans un tube contenant dé jà