B = ACTION ANLTSPAPHYLOCOUCTQUE DU GLYCOCOLLATE DE CUIVRE IX VITRO

D'après les données précédentes et à température fixe, il y a lieu Ge s'attendre à constater deux péricdes dans l'activité antiseptique. Aux basses concentrations, irrégularité das la décroissance des germes pour une croissance régulière dans 1a concentration en principe actif, puis finalement cependant, l'irrésularité en question disparait, A partir d'un certain moment, la décroissance des germes (NQ, plus petit que N) obéit à la logarithmique, c'est-à-dire que le rapport No/N tend finalement vers une valeur fixe qui pourrait théoriquement tout au moins servir de mesure à l'efficacité de SRE Sen Cie dans les conditions expérimentales observées.

Enfin, si surmentent la concentration ‘en principe aotif celle-ci devient trop élovée, pour permettre le jeu des métabolismes qui permettraient la vie de la bactérie, ia phase dite “bactéricide' apparait, le repiquage de celle-ci sur un milieu nutritif qui lui. convient ne donne plus lieu à un développement quelconque de cuiture.

Dans les descriptions qui vont suivre nous avons opp953é le slycocollate de cuivre au stapnylocoque doré et nous avons examiné Ce qui se passe en feisant varier la nature des milieux de culture, |

1) Techniques utilisées.

Nous rapprochons à dessein tes trois descriptions pour mieux les céractériser et les différencier.

lère tecnnique : Détermination ds 1'aCCLVAEE bactéricide en eau peptonée.

Le temps d'action de l'antiseptique est variable.

Le milieu utilisé est liquide, Le germe à étudier provenant d'une culture de 24 h, est mis en suspension dans. l'eau peptonée que l'on additionne ABePLiAUement d'une quantité connue âs désinfectant ARE RXe ie cuivre).

On prépare ainsi une série de tubes dans dosdtaie la concentration en désinfectant varie d'un tube à l'autre tandis que le nombre de bactéries ensemencées au départ 6st sensiblement fixe. Le contact des sermes avec ie Aésinfectant est effectué à +570C,

ê O1 CR

puis dans chacun des tubes après une durée variable, on fait un prélèvement de 0,5 ce à l'aide duquel on effectue une numération sur gélose des germes survivants capables encore de se multiplier sur ce milieu.

Les numérations sont faites en prélevant 0,5 cc de la culture qu'on inocule et disperse dans 10 ce de géiose nutritive stérile.

Cet essai permet de déterminer l'influence de la concentration en antiseptique et de la durée de contact pour une même ‘concentration en bactéries du milieu, L'effet vactéricide est considéré comme réalisé quand la numération finale ne fait apparaître aucune colonie sur géiose nutritive stérile,

Cette technique est la seule qui nous permette l'estimation de la vitesse de désinfection en phase logarithmique. La dilution réalisée, D=20, suffit pour que toutes les bactéries capables de se multiplier fournissent des colonies de dimension assez nette pour être observables quoique plus ou moîins petites pour les concentration en sglycocollate de cuivre utilisées dans les essais et dans le déiai indiqué.

Déteriination de l'activité bactériostatique

2ène technique :

| en milieu sgélose,

Le milieu est solide, la durée d'action du désinfectant est fixe,

Tandis que dans la technique précédente on étudiait vu nilieu liquide la marche: de la désinfection, on utilise ici la même eau peptonée mais solidifiée par la gélose, Ainsi on est amené à suivre le développement microbien pendant une durée fixe de culture que l'on a choisie érale à 536 H pour cnaque essai.

Pour cela une suspension microbilenne en eau stérile, suspension de Concentration on germes convenable est introduite à raison de 0,5cc dans une voite de Pétri stérile où l'on coule ensuite 10cc d'eau peptonée gélosée additionnée Ge glycocollate de cuivre en quantité connue, On mélange avec soîn, La teneur en cuivre varie d'une boite à l'autre, Après soli@ification du milieu, et incubation à +57°C de 56 K,, on effectue ia numération des colonies a parues, Cette numération est répétée par la suite après une deuxième incubation prolongée 4 jours surtout sur les boites qui renferment une forte concentration en cuivre pouvant ralentir le développement des germes et provoquer l'apparition de colonies tardives. On remarquera que dans cette technique la dilution résultant du mélange avec Ea «élose est égale à D = 20 puisque 0,5 ce de culture sont dispersés dans 19cc de célose,

: La durée de multiplication de ciaque cerme est fixe (56 h. à +57°C). Chaque perme resté sur place donne une colonie dont le diametre augmente à mesure que la durée d'étuve ausmente.

Le nombre de coloniés observées est donc sensiblement ésal au nombre de germes ensemencés lorsque la densité microbienne superficielle reste faivle du fait. d'une quantité inocuiée judicieusement choisie,

Sème technique : Détermination de l'activité nactéricide après 48 heures iacubation.

Le milieu est liquide, la durée d'incubation désinfectante est fixe.

On ensemence 9,5 ce de suspension bactérienne de concentration convenable dans 10 cm2 du milieu nutritif (liquide) caoisi.

Chaque tube est additionné d'une quantité connue de désinfectant à l'étude, dont la concentration est ainsi ose daïis chacun d'eux,

Après 48 heures d'incubation à +579C, on note les tutres qui se sont troublés, et ceux qui sont restés limpides, Parmi ces derniers, des repiquages sont faits en transportant un cn© de ieur contenu dans des boites de Pétri additionnées d'eau peptonée a sée (10 cm5). Après solidification et étuvare de #6 heures à +%7°C certains tubes apparemment clairs donnent cependant des colonies facilement observables, tandis que d'autres restent absolument limpides et ne donnent aucune colonie et peuvent être classés comme stériles.

Remarque 1:

Dans les trois techniques, pour les numérations sur milieu solide on emploie l'eau péptonée gélosée ou la gélose nutritive nabituelle,

Remarque IT

11 faut éviter des confusions dans les termes : ce que l'on entend par durée de désinfection ou durée de contact désinfec- . tant, c'est le tenps pendant lequel les germes en suspension se trouvent en présence à +27°C, avec la substance antiseptique à la concentration indiquée dans le milieu indiqué. 11 faut distinguer cette durée de celle donnée à la culture consécutive au repiquage sur milieu solide, pour procéder aux numérations des germes survivants. Celle-ci a été de 56 heures au minimum à +57°C, dans tous les essais indiqués, puis ‘le plus souvent, Île repiquace a été à nouveau Srloctué au bout de quatre jours 4" incubation,

En résumé : On peut schématiser ainsi les trois techniques employées :

Technique I : Recherche de l'activité bactéricide. Milieu liquide, contact désinfectant à +27°C de durée

variables recherche des concentrations (en désinfectant) bactéricides par numération sur milieu solide. :

Technique II : Recherche de l'activité bactériostatique.

“ilieu solide, contact désinfectant à +57°C de durée fixe (56 neures) recherche des concentrations inhibitrices (ou antisénétiques) par numération directe sur le milieu solide.

Technique III : Recherche de l'activité bactéricide.

Milieu liquide, contact désinfectant à +57°C de durée fixe (48 heures). Rechterche des concentrations bactéricides sur milieu golids.

La technique III est surtout utilisée quand on recnercne l'effet bactéricide en naute concentration en antiseptique.

Puisque c'est par des numérations microniennes que nous evons été amenée à montrer la réaëité et l'importance de la désinfection par le glycocollate de cuivre, nous nous sommes piacés dans des conditions 4e concentrations en cermoes telles qu'eiles pouvaient fournir une précision suffisante, c'est-à-dire de 1099 à 2000 colonies par piaque témoin.

En résumé dans chaque essai, étant entendu que sont précisés : |

1) ia nature du milieu de culture additionné du désinfectant qu'on met en oeuvre

2) la concentration de colui-ct dans lo milieu

3) le germe ensemencé, inoculat provenant d'une culture jeune de 24 neures sur relose additionné à une concentration cannaue au départ dans un essai témoin,

Le stapnylocoque utilisé dans toutes les séries d'essais pratiqués dans ce travail provenait d'un pus et c'est la même souctle identifiés par l'ensemble de ses caractères morpnologiques et tiochimiques qui nous a toujours servi dans les essais décrits.

à Pour chaque essai, le germe était repiqué de facon à partir d'une culture vigoureuse, âgée de 24 à 56 heures.

4) La technique opératoire choisie pour la mise en évidence de l'effet désinfectant (type I, IT, III) technique comportant en par- Rose une durée de contact à +57°C, déterminée, entre rerme et milieu, |

On constate 1e taux de désinfection résultant des condi=. tions opératoires réalisées, |

Notre ambition se bornait à rendre évidente la réalité ie cet effet désinfectant du glycocollate de cuivre et non à eo une grandeur mathématique, telle que la valeur moyenne de la quan tité log N°/N pendant l'unité de temps, pendant la phase logariti-

cn en

mique. Le degré de précision des mesures n'autorisant guère une telle entreprise. Dans les Sciences biolosiques, les crandeurs

. variables étudiées dépendant de tant de facteurs en général que les formules alrébriques s'appliquent rarement dans un intervalle suffisamment large pour être pratiquement utiles,

2) Activité vectériostatique et bactéricide a) Activité pactéricide en eau peptonée salée

Dans lès essais antorieurement décrits, nous avons 5té amsnée à examiner le degré de fidélité des métaodes ûe numerations sur milieu solide qui devaient servir de base à notre travail, c'est-à-dire :

- le star tiité dans les chiffres obtenus par répétitior de js môme nunération.

- J'influsence possioile sur ces chiffres de la concentration dans le milieu de l'antiseotique employé,

- Lors de Ces exarens, nous avors été amenée à des résulitats qui traïtaient âe Jà partiellement le probleme Here 10 dans cette troisième partie, Celle-ci ne fait donc que développer lies premières constatations pour obtenir es vues si fletiiont étendues sur l'activité désinfectante du slycocollate da cuivre sur le staphylocoque doré, D'abord, dans l'eau peptonés, puis ensuite en différents milieux plus ou moins charrég en sunstances

nutritives pour la oactérie,

Dans la description sui va suivre, c'est la toecnanique I que nous avons suivie pour connaître les chutes de concentration en sermes provoquées par une concentration fixe en antisaptique dans le milieu choisi.

Une saspension îe staphylocoque a été préparée dans Honn, peptonée à 2 °/, à partir d'une culture de 24 h,. sur gélose et la turbidité de celle-ci était amenée à corresponâre à celle d'un tube âe 0,20 gr d'albumine par litre dans la gamme de Kinesbury. Les numérations ont été faites ra ip dans les mêmes conditions c'està dire chaque prise d'essai (0,5 cms de culture) soumisé à l'action du glycocollate de cuivre, dispersée dans 10 cm> de rélose encore liquide (soit une dilution D = 20) a été coulée en boîtes @e Pétri. Après 56 neures d'étuve, à +2700, une première numération a été effectuée que l'on répète après un four ou Geux d'étuve pour voir si des colonies nouvelles n'étaient pas apparues, Dans tous nos essais, c'est toujours lie même souche bactérienne ot la même peptons qui furent mises en oeuvre,

ler £ssai : Trois essais (Bi, B2, B5) ont été réalisés avec la sus-

pension précédente contenant du slYcocollate de cuivre en quantité RE que la concentration en cuivre atteirne 50 milligrs. par

RE

litre (soit O cm5,2 de solution mère de glycocollate de cuivre de : dilution D = 1 dans 10 cmS de suspension dans l'eau peptonée). On a en effet :

Dilution X = = = 51 Concentration C = ne = en soit approximativement 50 miillisr/litre.

Résultats ovtenus : Par l'action du glycocollate de cuivre à +579C sur lies suspensions précédentes avec les durées d'action indiquées :

Contact de 1 neure ou de 2 h. à +57°C. Après ce contact des prélève.

ments ont été effectués dans chaque suspension afin d'y Génombrer les bactéries restées vivantes.

TABTEAU XV

Activité bactéricide du cuivre avec une concentration en cuivre de 59 millger/litre.

DUREE D'ACTION NOMBRE DE COLONTES OBSERVEES à +97°C. | B1 B2 BS O (témoin:départ) 1078 1096 1088.

1 heure | 1e 1 0 2 heures | re) ) 0 À La destruction des bactéries a été totale en deux heures à +27°C,

2ème Essai

Trois autres essais (Al, A2, AS) réalisent une concentration finale en cuivre de 17,5 miilgr/iitre dans la suspension peptonée.