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avons défini la croissance normale comme étant celle qui se produit en l'absence de substances de croissance. Nous avons vu que lorsqu'on ensemence des fragments de tige de Vigne sur des milieux qui ne renferment pas d’hétéroauxine, ils se développaient pour former des masses de parenchyme constituant ce que nous appelerons le cal normal. Lorsqu'on sépare ces néoformations du fragment sur lequel ils se sont développés pour tenter ensuite de les repiquer sur des milieux dépourvus d’hétéroauxine, on constate que leur croissance cesse. Îls demeurent vivants plusieurs mois sans se modifier. Il est donc impossible d’en isoler une souche.

b. Tissus sensibilisés. — 1. Caractères morphologiques et physiologiques. — Lorsqu’on repique des fragments de cals normaux sur des milieux contenant de l'acide naphtyle acétique, on observe par contre des phénomènes très différents; aussi avonsnous étudié de façon très précise l’action de ce produit sur la croissance de ces tissus. Pour cela, après avoir pesé des fragments de cal d’une centaine de milligrammes qui s'étaient développés sur des tiges cultivées pendant deux mois sans hétéroauxine, nous les avons placés sur des milieux renfermant différentes doses d’acide naphtyle acétique. Des solutions nutritives dépourvues d’héteroauxine nous ont permis d’obtenir des cultures témoins.

Une nouvelle pesée faite après deux mois de culture nous permettait d'apprécier la croissance, Nous avons ainsi constaté que, jusqu’à la concentration de 1077, l’héteroauxine ne paraît exercer aucune action. Les fragments demeurent vivants sans s’accroître sensiblement. Puis, à partir de 10-7, l'effet excitoformateur de l'acide naphtyle acétique commence à se manifester. [1 est maximum pour 10-f, concentration à laquelle ce produit provoque une croissance exubérante des cultures qui s’accroissent en moyenne de 2 grammes en deux mois. Des doses plus fortes deviennent rapidement toxiques; elles provoquent la formation de cellules géantes et désorganisent les tissus. C’est donc la concentration de 1076 qui paraît le mieux convenir aux repiquages de : Vigne. Or, si après deux ou trois passages à cette concentration, on replace les tissus sur une gamme de milieux analogues à la précédente, c’est-à-dire composée de solutions renfermant différentes doses d’acide naphtyle acétique ainsi que de témoins sans hétéroauxine, on observe des résultats très différents.

On constate tout d’abord que les tissus sont devenus capables de se développer sans hétéroauxine. Cette croissance est assez lente puisque l'augmentation de poids est d'environ 250 milligrammes en deux mois, c’est-à-dire dix fois plus faible que celle qu’on observe à la concentration optimum. Mais ce n’est pas une croissance résiduelle comme celle des fragments de tige, car elle se maintient indéfiniment. Nous entretenons de telles cultures depuis cinq ans sans hétéroauxine ; elles ont déjà subi 32 repiquages. On constate ensuite (fig. 16) que le maximum de la courbe s’est déplacé vers les faibles concentrations et se trouve maintenant vers 2,5.10-7. Les tissus sont devenus cinq fois plus sensibles à l’hétéroauxine, puisque ce produit exerce déjà une action inhibitrice à la concentrat on de 5.1077, Ce fait, assez surprenant, rappelle le phénomène de sensibilisation des tissus de Topinambour observé par Gaurerer. Cet auteur a en effet constaté que si l’on soumet des tissus de Topinambour pendant deux mois à des doses d’acide indole acétique supérieures à 1077, ils subissent des modifications profondes et que leur prolifération est inhibée par des doses d’hétéroauxine qui, avant ce traitement, provoquaient un développement intense. Toutefois, dans le cas de la Vigne, on a affaire à un phénomène de nature différente, car, tandis que les tissus de Topinambour ainsi modifiés cessent de se développer et ne tardent pas à mourir, ceux de Vigne, au contraire,

acquièrent la propriété de proliférer indéfiniment en l'absence de substance active. De plus, cette transformation paraît définitive et irréversible. Pour le vérifier, nous avons replacé des tissus de Vigne sensiblisés et cultivés in vitro pendant quatre ans dans un milieu dépourvu d’hétéroauxine sur une série de milieux à concentration croissante en acide naphtyle acétique. Nous avons constaté alors qu’ils n'avaient rien perdu de leur sensibilité acquise quatre'ans auparavant. Morphologiquement, les tissus sensibilisés sont absolument semblables aux tissus normaux. Les uns et les autres forment des masses compactes de parenchyme blanc ou légèrement teinté de rose, recouverts en surface d’une multitude de petits mamelons isolés (pl. VIII, fig. A). Nous

ACCROISSEMENT S en mg

après 2 mois de culture

CONCENTRATION EN ACIDE NAPHTYLE ACETIQUE

10° 10€ 107 5107 OS (er?

Fic. 16. — Action de l'acide naphtyle acétique sur le développement de diverses souches de tissus de Vigne.

La courbe I en tirets correspond à des tissus normaux n'ayant jamais subi l’action d’hétéroauxine. On remarque que l'acide naphtyle acétique exalte considérablement la prolifération de ce type de tissus. En l'absence d’hétéroauxine, la croissance est très faible et 11 serait d’ailleurs impossible de repiquer les cultures, car elles se nécroseraient en trois à quatre mois sans proliférer. La courbe IT en points correspond à des tissus ayant été cultivés pendant quelque temps sur un milieu renfermant de l’hétéroauxine et ayant subi une première modification de leurs propriétés. Cultivés sans hétéroauxine, ces tissus prolifèrent lentement, mais d’une manière durable. En outre, ‘ils présentent une sensibilité accrue à l'égard de l'acide naphtyle acétique. La courbe IIT en points et tirets correspond à des tissus qui, à la suite d’une culture prolongée en présence d’hétéroauxine, ont subi le phénomène d’accoutumance. On voit qu’ils sont capables de s’accroître très activement sans hétéroauxine et qu'ils sont, en outre, insensibles à l’action excito-formatrice de cette substance. Enfin la courbe IV en trait continu correspond à des tissus de crown-gall n’ayant jamais subi l’action de l’hétéroauxine, Ils sont aussi insensibles à l’action de ce produit et capables de proliférer activement en son absence.

allons voir maintenant que leur structure anatomique ne permet pas non plus de les distinguer.

2. Structure anatomique. — Lorsque nous avons considéré la structure des cals

produits par des fragments de tige de Vigne, nous avons constaté la présence de zones génératrices à disposition inversée, c’est-à-dire produisant du bois vers l’extérieur et du liber vers l’intérieur, on aurait pu croire que cette structure anormale était induite par la présence des tissus préexistants et qu'elle cessait de se produire dans les colonies repiquées ; en réalité, il n’en à rien été et nous avons retrouvé des structures analogues dans les tissus repiqués. Si on isole par exemple un fragment entièrement parenchymateux et si on l’examine après deux mois de culture, on constate qu’au cours de son développement la surface sectionnée a très peu proliféré, et qu’en regard de cette surface de section le fragment a produit, comme l’explantat primitif, une zone génératrice inversée capable de fournir du bois vers l'extérieur et du liber vers l’inté-

rieur (pl. VI).

c. Tissus accoutumés. — 1. Caractères morphologiques et physiologiques. — Au cours de passages sur des concentrations assez élevées en hétéroauxine, comprises entre 2.107 et 10-6, il apparaît parfois un nouveau type de tissus, que son aspect extérieur permet de déceler immédiatement ; cette apparition se présente comme il suit : sur une colonie normale opaque, légèrement chlorophyllienne ou teintée en rose par de l’anthocyane on voit se former, en un point très limité, un cal qui présente l'aspect d’une masse translucide et incolore. Cette transformation apparaît d’une manière sporadique et dans des conditions que nous n'avons pas pu préciser, comme s’il s'agissait d’une mutation; en séparant ce cal spécial et en le repiquant, on peut isoler une nouvelle souche de tissus qui conserve cet aspect anormal (pl. VIIT, fig. B) et qui prolifère très intensément. Nous avons étudié l’action de l’acide naphtyle acétique sur ces tissus modifiés en les repiquant, comme les précédents, sur des milieux à concentration variant de 10° à 105 ainsi que sur des témoins sans hétéroauxine. Nous avons alors remarqué qu'ils avaient perdu toute sensibilité vis-à-vis des actions excitoformatrices de ce produit qui, en outre, devenait toxique dès la dose de 0,1 mg. par litre (107). En l’absence d’hétéroauxine, l'accroissement moyen d’une culture de ce type est, en deux mois, d'environ 2 grammes, soit dix fois plus que celles des souches précédentes. Par contre, en présence d'acide naphtyle acétique à la concentration optimum pour les tissus normaux ou sensibilisés, la croissance de ces trois catégories de tissus est comparable. Ce phénomène nouveau semble identique à celui que Gauraerer a observé avec la Carotte et le Scorsonère et qu’il a décrit sous le nom d’accoutumance à l’hétéroauxine. Les tissus de ces plantes soumises à l’action de fortes doses d’hétéroauxine se modifient eux aussi d'une manière profonde et deviennent capables de proliférer en l'absence de substances de division avec la même intensité que des tissus normaux cultivés en présence d'acide indole acétique.

2. Structure anatomique. — Les tissus de Vigne ayant subi le phénomène d’accoutumance à l’hétéroauxine présentent une structure très particulière. Is sont formés d’un parenchyme entièrement homogène composé de grandes cellules toutes identiques et ne renferment jamais de formations cribrovasculaires (pl. IX, fig. A). Ils sont donc formés d’un parenchyme à l’état pur.

En repiquant constamment pendant plusieurs années ces tissus accoutumés en présence de faibles doses d’acide naphtyle acétique, de l’ordre de 5.10-8, nous avons constaté un phénomène assez curieux. Leurs cellules manifestaient une tendance de plus en plus grande à se séparer les unes des autres. Elles conservaient les mêmes dimensions que celles du tissu normal, mais au lieu d’être polyédriques (fig. 17), elles