TES D DIN 3 CONCENTRATION

en acide naphtyle acétique

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Fie. 18. — Action de l'acide « naphtyle acétique sur la croissance des tissus de Parthenocissus tricuspidata.

La courbe [, en trait plein, correspond au développement de fragments de tige n’ayant jamais subi l’action de l’hétéroauxine, on remarque que l’acide naphtyle acétique exalte considérablement la prolifération de ces tissus qui ne se développent pas en son absence.

La courbe IL, en tirets, correspond à des Lissus ayant été cultivés pendant quelque temps sur un milieu renfermant de l’hétéroauxine à des concentrations variant de 10-7 à 5.10 -7 et ayant subi une première modification de leurs propriétés. Ces tissus sont comme les précédents incapables de se développer sans hétéroauxine, mais ils présentent une sensibilité accrue à l'égard de l'acide naphtyle acétique.

La courbe IT, en points et tirets, correspond à des tissus qui sont la suite d’une culture prolongée en présence d’hétéroauxine, ont subi le phénomène d’accoutumance, Is sont capables de s’accroître très activement sans hétéroauxine, et sont en outre insensibles à l’action excito-formatrice de cette substance.

longues files cellulaires réunies en faisceaux irréguliers ct isolés les uns des autres (pl. X, fig. A). Nous avons ainsi isolé une souche actuellement âgée de quatre àns ayant

subi 25 repiquages.

1. Caractères phy 1ologiques. — Étant donné que, pour obtenir des cultures à partir de fragments suffisamment volumineux pour être repiqués, il faut faire agir des doses d'hétéroauxine relativement élevées (1077 à 5.10-:), on pouvait se demander si les tissus

PIX

J. Vincewr, phot.

Fi. À. — Détail de la surface d’une culture de Parthenocissus tricuspidata. Elle est toute couverte d’une multitude de formations composées de longues files de cellules réunies en faisceaux irréguliers.

J. Vixcexr, phot.

Fic. B. — Culture de Parthenocissus tricuspidata ayant manifesté le phénomène d’accoutumance à l’hétéroauxine. Elle est formée de nodules qui évoluent indépendamment et tendent à se réparer les uns

des autres.

f De 1 < ANNALES DES Épipnyries. Page 58.

ainsi obtenus étaient bien des tissus normaux ou s'ils s'étaient déjà modifiés sous l’action de ce produit. Dans le but de vérifier cette hypothèse, nous avons comparé la sensibilité de ces tissus avec celle de tissus n’ayant jamais subi l’action de l’hétéroauxine.

Pour cela, nous avons mis en culture des fragments de tige sur un milieu renfermant de l'acide naphtyle acétique à la concentration de 105 et, deux mois plus tard, nous avons repiqué les cals ainsi obtenus sur une série de milieux qui renfermaient cette substance à des doses allant de 1079 à 10-5 ainsi que sur d’autres n’en contenant pas. Nous ayons ainsi constaté qu’en l'absence d’hétéroauxine, l'accroissement était très faible ; en deux mois, l’augmentation de poids d’un fragment initial de 150 milligrammes n’était en effet que de 280 milligrammes. Cette croissance paraissait provoquée par l’hétéroauxine résiduelle du fragment ensemencé, car, au second passage sur des milieux sans acide naphtyle acétique, l'augmentation n’était plus que de 85 milligrammes en deux mois. Vers 5.10, l’action excitoformatrice de la substance active commençait à se manifester. Elle atteignait un maximum vers 1077 et devenait ensuite toxique (fig. 18).

Nous avons ensemencé parallèlement de jeunes fragments de tige pesant en moyenne 150 milligrammes sur une série de milieux contenant de l'acide naphtyle acétique à des concentrations croissantes de 10? à 105,et sur d’autres n’en renfermant pas. Cette expérience nous a tout d’obord permis de vérifier que, sans hétéroauxine, l’augmentation de poids des explantats est négligeable. Elle nous a montré, en outre, que, comme ceux de la Vigne, les tissus de Vigne-vierge qui ont subi une première fois l’action de fortes doses d’hétéroauxine présentent ensuite une sensibilité accrue à l'égard de cette, substance. En effet, l'acide naphtyle acétique ne manifeste son action sur les tissus normaux de la tige qu’à une concentration supérieure à 5.1078, dose dix fois plus forte que celle à laquelle commencent à réagir les tissus repiqués. Enfin, nous avons observé que la concentration optimale pour des fragments de tige était de 5.105, dose cinquante fois plus forte que celle qui provoque le meilleur développement des tissus repiqués et très toxique pour ces derniers. Les tissus normaux de Vignevierge sont beaucoup moins sensibles à l’acide naphtyle acétique que les tissus cultivés en présence de.ce produit, puisque son action n’est appréciable qu’à partir de 5.108, soit, pour des doses dix fois plus fortes que celles qui activent déjà le développement ce des derniers. Enfin, nous avons observé les plus forts développements à des concentrations très élevées 5.106, qui causent de graves troubles aux tissus précédents.

Il semble donc que les tissus de Vigne-vierge qui ont subi l’action de doses moyennes d’acide naphtyle acétique soient sensibilisés à l’égard de cette substance, comme c’est le cas pour les tissus de Vigne dont nous avons parlé précédemment. Toutefois, à la suite de cette transformation, ils n’acquièrent pas, comme ces derniers, le pouvoir de proliférer de façon durable sans hétéroauxine, car, lorsqu'on les repique à nouveau sur des milieux privés de cette substance, ils cessent de se développer. Remarquons, enfin, que l'accroissement des cultures de fragments de tige en présence d'acide naphtyle acétique à la concentration optimum est beaucoup plus important que celui des tissus de la souche repiquée, puisque ces fragments augmentent de près de À grammes en deux mois alors que les cultures normales s’accroissent à peine de 2 grammes durant la même période. Peut-être cette différence est-elle due au fait qu’étant moins sensibles aux effets toxiques de l’hétéroauxine, elles peuvent utiliser des quantités plus fortes

de ce produit.

2. Structure anatomique. — Nous avons montré dans le chapitre précédent que les cals produits par des fragments de tige de Parthenocissus sont formés d’un parenchyme

indifférencié. Les tissus repiqués au contraire se différencient, mais très légèrement. ls sont tout d’abord formés d’un parenchyme homogène, puis à la périphérie des vieilles cultures dans les régions qui ne prolifèrent que faiblement, il apparaît des fragments de zone génératrice qui ont la même orientation inverse que dans les tissus de Vigne, c'est-à-dire qu'ils produisent des vaisseaux vers la périphérie et du liber vers l’intérieur de la colonie (fig. 19). Parfois, ces zones génératrices se cyclisent et forment de petits nodules cribrovasculaires typiques. Beaucoup de ces cellules élaborent des tannins et certaines forment des raphides d’oxalate de calcium analogues à celles que l’on rencontre dans le parenchyme libérien de la tige.

b. Tissus accoutumés. — 1. Caractères physiologiques. — Dans le but de vérifier que les tissus de Vigne-vierge sont incapables de proliférer in vitro en l'absence d’hétéro-

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Fic. 19. — Coupe d’une culture de tissus de Parthenocissus tricuspidata ayant subi le phénomène de sensibilisation à l’hétéroauxine. Elle est composée d’un parenchyme où l’on rencontre des zones génératrices libéroligneuses fragmentaires ayant tendance à se cycliser pour former des nodules cribrovasculaires. É

auxine, nous les avons repiqués, à plusieurs reprises, sur des milieux dépourvus de substances de ce type. Au premier passage, l'augmentation est d'environ 200 milligrammes en deux mois, au second elle s’est abaissée à 80 milligrammes et en replaçant à Roxane au bout de deux mois, ces tissus sur un milieu neuf, nous avons constaté qu'ils demeuraient vivants sans s’accroître. Toutefois, l’une des cultures s’est mise à proliférer pour former un cal possédant un aspect très différent des tissus normaux. Alors que ceux-ci forment des masses régulières peu lobées et légèrement chlorophylliennes lorsqu'on les expose à la lumière, ce dernier était uniquement coloré en rose et semblait composé d’une série de nodules agglomérés et se séparant les uns des autres par simple pression (pl. X, fig. B). Nous avons repiqué ce cal sur des milieux ne renfermant pas d’hétéroauxine; nous avons pu ainsi isoler une souche qui prolifère très intensément et conserve ces caractères morphologiques spéciaux.

Nous avons étudié l'action de l'acide naphtyle acétique sur les tissus qui avaient subi cette modification en les repiquant sur des milieux renfermant différentes doses d’hétéroauxine, ainsi que sur des témoins qui n’en contiennent pas (fig. 18), nous avons constaté qu’ils avaient perdu toute sensibilité vis-à-vis des propriétés excitoformatrices de ce

produit. Ils étaient devenus capables de se développer en l'absence d’hétéroauxine aussi activement que sur des milieux qui en contenaient des doses favorisant la croissance des tissus normaux. Ils avaient donc subi le phénomène d’accoutumance.

2. Structure anatomique. — Les tissus de la souche accoutumée à l’hétéroauxine sont reconnaissables non seulement à leur aspect extérieur, mais également à leur structure anatomique spéciale. Ils sont formés d’un parenchyme à grandes cellules au sein duquel apparaissent un grand nombre d’ilots de petits éléments en voie de prolifération intense (fig. 20). Ces flots semblent provenir du recloisonnement des grandes cellules du parenchyme qui se multiplient activement pour former des nodules parenchymateux,

ayant peu de cohésion entre eux, ce qui explique la fragilité de ces tissus. Ils renfer-

Fic. 20. — Coupe d’une culture de tissus de Parthenocissus tricuspidata ayant manifesté le phénomène d’accoutumance à l’hétéroauxine. Elle renferme des régions méristématiques N qui prolifèrent intensément pour former des nodules de parenchyme sans cohésion entre eux (N).

ment en outre un certain nombre de formations cribrovasculaires cyclisées analogues à celles que l’on rencontre dans les tissus normaux.

En résumé, les tissus de Vigne-vierge qui sont normalement incapables de proliférer in vitro sans hétéroauxine, se développent vigoureusement au contraire, en présence de ce produit, et comme ceux de la Vigne, peuvent subir successivement deux transformations profondes de leur pouvoir de croissance. Leurs cellules commencent par manifester une exaltation de leur sensibilité vis-à-vis des hétéroauxines, puis dans certains cas, elles deviennent capables de se multiplier très intensément en l’absence de ce produit, mais perdent leur sensibilité vis-à-vis de son action excitoformatrice ; elles subissent donc un phénomène d’accoutumance à l'hétéroauxine.

3. Parrmenocissus quixqueroLiA (L) Prancu. — Nous serons beaucoup plus bref dans la description des cultures de tissus de Parthenocissus quinquefolia, car leurs caractères sont analogues à ceux des colonies de Parthenocissus tricuspidata, et, de ce fait, ne nous ont pas paru nécessiter de recherches étendues. En repiquant les cals qui se forment en présence d'acide naphtyle acétique à des concentrations variant de 10-7 à 5.10-7 sur les fragments de tige de P. quinquefolia, ou les curieux nodules qui se

F D ANNALES DES Épipayries. 3

développent sur les racines, nous sommes parvenus aisément à isoler une souche de tissus qui se développent toutefois moins rapidement que ceux de P. tricuspidata. Ces cultures sont légèrement chlorophylliennes si on les expose à la fumière et, en outre; elles sont souvent colorées en rose par de l’anthocyane, alors que celles de P. tricuspidata n’élaborent habituellement pas de pigment anthocyanique. Ces colonies ne perdent jamais complètement la faculté de former des racines; toutefois, après plusieurs années de cultures, celles-c1 deviennent rares et n’apparaissent guère que sur une faible proportion des cultures. Ces cultures, comme celles de P. tricuspidata, sont formées d’un parenchyme peu différencié, où l’on distingue çà et là quelques nodules cribrovasculaires. La souche que nous avons isolée est actuellement âgée de quatre ans

(juin 1948) eta subi 25 repiquages.

4. Crssus vc1sA (Torr. et Gr.) Desm. —— La croissance des tissus de Cissus 2ncisa est en tous points comparable à celle des cultures de Parthenocissus quinquefola, si bien qu'il est parfois difficile de distinguer les colonies de ces deux espèces. Pour cette plante, nous avons fait des isolements à partir de fragments de tige et de racine charnue ; les repiquages des néoformations apparues sur ces deux types d'organes nous “ont fourni des cultures absolument identiques. Nous en entretenons une souche âgée actuellement de quarante-deux mois, (juin 1945) elle a subi 20 repiquages.

5. Cissus iscozor Waenr. —— Les cultures de Cissus discolor se développent très lentement en comparaison des colonies tissulaires des autres Ampélidées et n’atteignent jamais de grandes dimensions. Leur poids moyen ne dépasse pas 500 milligrammes. Ces cultures sont toujours assez fortement colorées en rouge brun par des anthocyanes ou des tannins. Leur croissance très irrégulière au cours des huit premiers mois qui suivent l'isolement s’est alors brusquement améliorée. Nous avons constaté que ces tissus étaient devenus capables de prohférer sans hétéroauxine aussi rapidement que lorsqu'on leur fournissait cette substance. Ils avaient donc subi le phénomène d’accoutumance. Des coupes anatomiques nous ont permis de constater que ces colonies sont toujours beaucoup plus différenciées que tous les tissus que nous venons d'examiner. Le Cissus discolor est la seule plante de cette famille dont les tissus produisent 4n witro une grande quantité de nodules cribrovasculaires; ceci contraste étrangement avec la structure des tiges des plantes entières qui sont, au contraire, très peu lignifiées et beaucoup moins différenciées que celles des autres espèces que nous avons étudiées. La souche que nous avons isolée âgée de trois ans a subi 18 repiquages.

6. Rusus rruricosus L, — «. Caractères physiologiques. — Les néoformations qui apparaissent sur des fragments de tige de Rubus fruticosus peuvent être repiquées avec la plus grande facilité. Ces tissus, comme ceux de Parthenocissus, sont indifférenciés et constitués en majeure partie par des cellules parenchymateuses capables de se multiplier. Leur croissance n’est pas, comme celle des tissus de Vigne, localisée en des régions privilégiées, mais toujours plus ou moins diffuse. Les fragments de cal primitif placés à la surface de milieux contenant de l’acide naphtyle acétique à des concentrations variant de 10-7à 3, 1077 s’accroissent rapidement pour former des masses parenchymateuses jaunâtres peu mamelonnées (pl. XI, fig. A). Ces cultures secrètent une substance formant un précipité blanchâtre qui s’accumule dans la gélose à leur contact.

Nous n'avons pas étudié de façon précise l’action de l’hétéroauxine sur la croissance des tissus normaux de cette plante, mais seulement sur ceux de souches ayant déjà été

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J. Vincent, phot.

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âgée de deux mo

Fic. À. — Culture de tissus de Ronce

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(5° repiqua