II. Tissus d'arbres

Ainsi que nous l'avons signalé, les premières tentatives de culture de tissus de diffé- , rents arbres réalisées par Gauraerer avaient été assez peu encourageantes et l’on pouvait

se demander si les milieux mis au point pour la culture des organes charnus de plantes herbacées pourraient assurer la survie indéfinie des tissus de végétaux ayant une structure et un mode de végétation très différents, les arbres par exemple.

Nous y sommes parvenus avec trois espèces l’Aubépine, le Poirier et le Lilas.

1. Crarazcus monocyna Jaco. — Il est assez difficile de repiquer les cals qui se forment sur des fragments de tige d’Aubépine cultivés in vitro. Les parties sectionnées

par le scalpel brunissent rapidement à l'air et prolifèrent ensuite très difhcilement. [1 faut donc réduire les blessures au minimum au cours de cette opération.

ACCROISSEMENTS en mg

CONCENTRATION

de l'acide naphtyle acétique

Où rs 7 10 10 10 $ 10

Fic. 22. — Action de l'acide naphtyle acétique sur la croissance des tissus de Crataegus monogyna

cultivés in vitro.

Remarquer que les tissus ne s’accroissent à peu près pas en absence d’hétéroauxine ; ce produit commence à manifester son action à partir de la concentration de 108, La courbe s’élève ensuite régulièrement jusqu’à la concentration de 10-° sans que l’on observe d'effet toxique.

La croissance des explantats n’est jamais diffuse mais limitée à certains points privi- FLE \ Q 9 x légiés où se forme un nouveau cal qui s'accroît peu à peu, pour donner une masse de * + LA A Qu L LA 3, 4 parenchyme très irrégulièrement mamelonnée, qui s’étale peu à peu en croûte mince à la surface de la gélose.

a. Caractères physiologiques. — Comme pour les tissus de Vigne et de Vigne-vierge, la concentration en hétéroauxine exerce une action considérable sur la croissance. Va de repique les cals obtenus par la prolifération de tronçons de tige sur une série de milieux renfermant des doses d'acide naphtyle acétique allant de 1079 à 10-5, et sur des PS n'en renfermant pas, on constate qu'en l'absence de substances de croissance (fig. 22),

le développement des explantats est pratiquement nul. Ceux-ci ne commencent à s’acerottre d’une manière sensible que lorsque la concentration du milieu atteint 5.108. Dans ces conditions, leur développement est très irrégulier. Certains augmentent de 700 milligrammes en deux mois tandis que d’autres ne s’accroissent que de 230 milligrammes pendant la même période. À partir d’une teneur comprise entre 3 et 5.107, la croissance est beaucoup plus régulière. Toutes les cultures se développent de façon analogue ; enfin, pour des teneurs variant de 10-5à 10-5, le développement est considé-, rable et l'accroissement moyen de chaque culture en deux mois dépasse 1 gramme. C’est donc entre 10-56 et 10-5 que l’on observe la prolifération la plus active des tissus d’Aubépine. Toutefois, étant donné que ces doses sont déjà nettement toxiques pour

Que

CT) D PSUERIE ee A PEN

Fig. 23. — Nodule cribrovasculaire produit par une culture de tissus de Crataegus monogyna. V. : Vaisseaux; T. : Cellules à tannin ; ZG. : Zone génératrice.

H est constitué par une zone génératrice circulaire produisant du parenchyme vasculaire vers l’intérieur et du liber vers l’extérieur. |

la plupart des espèces que nous avons cultivées et produisent une désorganisation des tissus, nous avons repiqué ceux d’Aubépine sur des milieux contenant une teneur en acide naphtyle acétique un peu plus faible, de l’ordre de 5.10-7. Au cours des premiers passages, le développement a été assez irrégulier. Un certain nombre de cultures sont mortes et d’autres sont demeurées vivantes, mais n’ont pas proliféré. Nous avons cherché à améliorer la croissance en incorporant au milieu nutritif différentes substances vitaminiques comme de l'acide d-pantothénique, de la Biotine et de l’Inositol. Nous avons constaté, par l'aspect des cultures, que le développement était renforcé lorsque le milieu renfermait de l'acide d-pantothénique à la dose de 105, de la Biotine à la dose de 10-8 et de l’Inositol à la dose de 1074. L'augmentation du poids moyen des cultures après deux mois était de 30 à 45 p. 100 supérieure lorsque les explantats étaient cultivés en présence de ces facteurs de croissance. Toutefois, aucun d’eux n’est

indispensable à la croissance des tissus d’Aubépine, car ceux-ci paraissent capables de proliférer de façon indéfinie en leur absence. La souche que nous avons isolée est actuellement âgée de 42 mois et a subi 22 repiquages. Nous avons enfin comparé la sensibilité à l’hétéroauxine des tissus des cals formés par des fragments de tige et de ceux provenant d’une souche ayant été cultivée pendant deux ans sur des milieux renfermant de l'acide naphtyle acétique à des concentrations variant de 5.10-7 à 106. Cette comparaison ne nous a permis de mettre en évidence aucune différence de sensibilité. Ainsi, les tissus d’Aubépine dans les conditions où nous les avons étudiés, ne paraissent pas subir les phénomènes de sensibilisation et d’accoutumance que nous avons observés avec la plupart des tissus de lianes.

b. Structure anatomique. — Les cultures de tissus d’Aubépine possèdent une structure anatomique qui rappelle beaucoup celle des cultures de Ronce. Comme ces dernières, elles sont constituées par un parenchyme très peu différencié contenant quelques rares nodules cribrovasculaires se formant dans les parties les plus âgées ; mais, cette transformation est toujours très limitée. De plus, la partie vasculaire du nodule qui est très étendue, n’est pas entièrement lignifiée, mais est formée d’un parenchyme renfermant de nombreux vaisseaux. La plupart de ces’ cellules élaborent de grandes quantités de tannins qui précipitent par le fixateur, forment des amas bleu foncé après - coloration des préparations par le bleu de méthylène (fig. 23).

2. Pyrus communis L. var. «Conférence ». Les tissus de Poirier ont un mode de développement analogue à ceux d’Aubépine. Comme ces derniers, ils ne se développent bien qu’en présence d’hétéroauxine à des concentrations assez élevées de l'ordre de 105. Ils paraissent toutefois plus sensibles que ceux d’Aubépine à l’action toxique de l’acide naphtyle acétique, car, dès que la concentration atteint 106, les tissus perdent toute consistance. Ils deviennent mous et translucides et se désorganisent entièrement par suite de la transformation de leurs cellules en éléments géants. Ces cultures produisent assez souvent des racines qui s’enfoncent dans le milieu (pl. XI, fig. B). Ce phénomène est assez surprenant car les nombreux essais de bouturage de cette plante ont constamment donné des résultats négatifs. Enfin, la structure anatomique de ces tissus les rapproche également de ceux des cultures d’Aubépine. Comme ces dernières, les tissus de Poirier en culture sont constitués par un parenchyme très peu différencié renfermant une grande quantité de tannins. Ces tannins s'accumulent dans le milieu de culture qu'ils colorent en brun foncé au contact de l’explantat. Contrairement à ce qu’a observé Jacquior (33) avec des tissus de Chêne

et de Châtaignier, cette accumulation de tannins ne paraît pas gêner le développement des tissus, :

3. SYNRIGA vuzGARIS L. var. « Madame Florent Stepman». Les cals volumineux de parenchyme homogène que produisent les segments de tige de Lilas ensemencés sur des milieux renfermant de l’hétéroauxine, sont très faciles à repiquer. Lorsqu'on place un fragment de ces cals sur un milieu renfermant de l'acide naphtyle acétique à la concentration de 3.107, il continue à proliférer avec vigueur en s’arrondissant pour donner une masse légèrement mamelonnée qui, en deux mois, recouvre toute la surface de la gélose. La croissance est régulière et homogène dès le premier repiquage.

a. Caractères physiologiques. — Nous avons étudié l’action de l’héteroauxine sur ces issus et pour cela, nous en avons repiqué des fragments sur des milieux ne contenant

pas de produit et sur d’autres renfermant de l'acide naphtyle acétique à des concentrations variant de 1079 à 1075, Nous avons pu constater à l’aide de pesées que, en l’absence d’hétéroauxine, ces tissus cessent de se développer. Gette substance ne commence à faire sentir son action qu’à la dose de 10-7 et c’est à 5-10 que son activité devient maximum. Ces expériences nous montrent que les tissus de Lilas sont peu sensibles aux effets exaitoformateurs de l'acide naphtyle acétique, puisqu'ils ne commencent à réagir qu’à des concentrations déjà fortes. Ils sont également peu sensibles à l’action toxique de ce

Fis. 24. — Vaisseaux aberrants produits par une culture de tissus de Syringa vulgaris.

produit qui n’inhibe la croissance qu’à la dose très élevée de 10-5. La souche que nous avons isolée est actuellement âgée de 25 mois et a subi 12 repiquages (juin 1948).

b. Structure anatomique. — Les tissus de Lilas cultivés in vitro ont une structure très homogène. L'examen de préparations anatomiques montre qu'ils sont formés par un parenchyme presque entièrement indifférencié formé de cellules très régulières. II se forme parfois quelques vaisseaux aberrants dans les parties internes de la colonie qui prolifèrent le moins activement (fig. 24). Mais ces formations apparaissent très tardivement après plusieurs mois de culture et sont toujours très limitées, si bien que ces cultures sont constituées presque uniquement de parenchyme à l’état pur.

En résumé, les trois tissus d'arbres que nous avons étudiés, Aubépine, Poirier, Lilas, se développent normalement #n tro sur des milieux de composition analogue à ceux qui assurent la croissance des tissus de plantes herbacées et paraissent capables de survie

indéfinie. $