CHAPITRE IV
Étude du processus inflammatoire qui accompagne l'injection sous-cutanée de vibrions.
Les injections sous-cutanées de vibrions cholériques constituent une méthode excellente pour l'étude minutieuse de la réaction inflammatoire locale. En effet, on a, dans ce cas, affaire à un foyer très limité, dont il est facile à chaque instant d'apprécier l'état, et duquel on peut toujours aisément retirer une goutte d'exsudat.
Le derme des cobayes est très dense et extrêmement riche en follicules pileux ; l'aiguille de la seringue ne le traverse que difficilement ; il se laisse d'autre part mal pénétrer par la paraffine. Aussi la région choisie pour la piqüre n'est-elle pas indifférente.
La peau de la région dorsale est la plus coriace, particulièrement au voisinage de la queue: il est extrèmement difficile de la débiter en coupes minces. Il faut lui préférer la peau de l'abdomen et de la face interne des cuisses. Nous choisissons en général un point également distant de la ligne abdominale médiane et de la ligne dorsale : l'animal peut ainsi se traîner sur le ventre sans risquer de souiller la surface de la région inoculée.
Il est bon, pour faciliter la lecture des coupes, de choisir des individus peu pigmentés.
Le champ opératoire est soigneusement tondu sur une large surface, puis savonné, rasé (en ayant soin de ne pas abimer l'épiderme), lavé avec une solution de bichlorure de mercure à 1/1000 et enfin passé à l'alcool à 900. I] faut, en effet, autant que possible, éviter d'introduire sous le derme des microbes étrangers qui pourraient troubler l'expérience ; on fait alors un pli à la peau, on enfonce l'aiguille, préalablement stérilisée, suivant l’axe du pli, en ayant soin de ne pas. s'arrêter dans le derme, mais de pénétrer dans le tissu cellulaire
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sous-cutané où les phénomènes inflammatoires sont plus faciles à suivre ; On pousse alors l'injection assez rapidement : il se forme une boule d'æœdème, visible à l'extérieur, et que l'on circonserit au moyen d'un trait en couleur: l’on est ainsi assuré de retrouver l'emplacement exact du foyer, lorsque la boule d'œdème aura disparu.
Cela fait, on suit pas à pas la réaction inflammatoire en retirant à divers intervalles une goutte d'exsudat. Il est facile de se procurer cette goutte en refoulant avec le doigt le liquide épanché vers l’orifice produit par l'introduction de l'aiguille. On recueille avec une pipette bien eflilée le liquide qui vient sourdre à cet orifice; on en dépose une partie sur la glâce de l'hématimêtre de Malassez; l’autre est étalée sur une lamelle et séchée rapidement à l'air; on peut ainsi apprécier chaque fois les variations de la leucocytose et de la phagocytose. :
Lorsqu il s'agit de foyers destinés à être inclus dans la parafline et coupés, on comprend dans l’excision la couche profonde constituant la paroi inférieure de la poche. Le tout est fixé dans la solution concentrée de bichlorure de mercure, lavé à grande eau, puis plongé directement dans l’acétone, sans passer par l'alcool. L'alcool, en effet, durcit et contracte le tissu conjonctif dense du derme au point de le rendre impénétrable pour la paraffine. L’acétone est renouvelée 3 ou 4 fois avant l'immersion dans le xylol.
La plaie résultant de l’excision est lavée au Van Swieten, puis suturée ; la réunion se fait, rapidement, même en l'absence de tout pansement.
La dose mortelle minima de notre vibrion de Massaouah en injection sous-cutanée est représentée par 1/8 de culture sur gélose. Pour faire cette injeetion, on émulsionne une culture entière dans un volume donné de bouillon stérilisé ; on injecte alors la fraction voulue du liquide ainsi obtenu.
Nous allons maintenant étudier le mode de réaction des cobayes dans le cas d’injections sous-cutanées avec des doses très considérables de virus, puis avec des doses mortelles minima, enfin avec des doses non mortelles : cela chez des cobayes neufs, des cobayes vaccinés, et des cobayes appartenant à l’une ou l'autre de ces catégories, mais ayant reçu une injection de teinture d'opium dans le péritoine.
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Cobaye neuf. Injection de 1/2 culture âgée de 20 heures. Mort en 10 heures et demi.
: LEUCOCYTOSE LEUCOCYTOSE DE L'EXSUDAT HEURES TEMPÉRATURES DU SANG PAR MILLIM. CUBE Avant l'injection....... 380,7.... 5,700: ;: 0 Une demi-heure après, 390,9..., 15.300.... 0 2'heures aprés. rat ,s7u1400,8 -/3:1219000 7%: 0 DL Enr NN ee ENT Le SCO RS AR TS tee Pan 40 8 — nd RE PAS EUR D LL PU 25: 500! 220 9 — rs AA ALE DE NA DOVAT 720072, 370
10 heures et demi...... Mort.
AUTOPSIE. — Au niveau du point d’inoculation, œdème gélativiforme du tissu cellulaire sous-cutané, Dans le péritoine, léger épanchement, clair, visqueux. Intestin normal. Rate congestionnée. à
Exsudat sous-cutané. — Très nombreux vibrions libres prenant bien la couleur. Leucocytes en assez grand nombre ; 6 polynucléaires pour 1 mononucléaire. Presque tous contiennent des vibrions; quelques-uns en sont bourrés. Pas d'hématies. ‘
Exsudat péritonéal. — Vibrions libres en assez grand nombre. Nombreux leucocytes ; 4 polynucléaires pour 1 mononucléaire; pas de lymphocytes. Tous les polynucléaires sont pseudo-éosinophiles ; un cinquième des leucocytes contient des vibrions. Pas d'hématies.
Cultures sur plaques de gélatine. -— L'exsudat sous-cutané et l'exsudat péritonéal ont donné’un nombre très grand de colonies ; il y a 10 colonies sur la plaque faite avec le sang du cœur.
Coupes de la peau. — Le loyer d’inoculation siège immédiatement audessous du muscle peaucier et contient une énorme quantité de vibrions libres. Ceux-ci abondent à tous les niveaux de la coupe. On les trouve tassés en foyers compacts dans la partie du derme qui avoisine immédiatement l’épiderme; celui-ci, avec sa membrane basale, est soulevé en de nombreux points par une sérosité remplie de microbes. Les foyers vibrioniens ne semblent pas dépasser le stratum granulosum; on les rencontre également dans la gaine des poils, jusqu’au fond du follicule ; ils remplissent les fentes lymphatiques et obstruent complètement la lumière de certains vaisseaux lymphatiques au niveau de la portion supérieure du derme. Les faisceaux musculaires du peaucier sont envahis, On ne voit pas de vibrions dans les vaisseaux sanguins. Il existe des îlots de nécrose à tous les niveaux du derme. |
L'infiltration leucocyÿtaire est peu abondante dans lé derme; elle est très abondante, au contraire, dans le tissu lèche sous-dermique. Les leucocytes sont rares au centre du foyer d'inoculation : on les voit accumulés sur les limites de
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ce foyer. Ce sont en immense majorité des polynucléaires. Un quart environ de ces éléments contient des vibrions entiers ou réduits en granulations. Cette phagocytose n’a lieu que dans le voisinage immédiat du foyer; au contraire, tous les vibrions disséminés dans le derme sont libres.
L'endothélium des veines de la région sous-dermique est traversé en de nombreux points par des polynucléaires en diapédèse. Pas de polynucléaires dans les lymphatiques.
La coupe nous prouve l'existence d’une réaction leucocytaire assez vive s'accompagnant d'une légère réaction phagocytaire.
Cobaye neuf. Injection de 1/2 culture âgée de 24 heures. Mort en
20 heures.
È LEUCOCYTOSE LEUCOCYTOSE DE L'EXSUDAT HEURES TEMPÉRATURES DU SANG PAR MILLIM. CUBE Avant l'injection... .... BB, 6.500 0 Une demi-heure après.. 30°,7.... TELODEE 0 2 heures après........ 40056... 120008: 0 Bale te de Se DS A TG 00e 60 8 — rs PAR DOS RE MAT SOOULERE 200 17 — bn nte et RE 22600 400
20 — LAN SET, Mort.
AUTOPSIE. — Épanchement péritonéal abondant, clair. Pas de Aépôt fibrineux sur les viscères. Estomac, cæcum distendus par les gaz.
Exsudat sous-cutané. — Vibrions libres en grande abondance. Quelques leucocytes polynucléaires ne renfermant pas de microbes.
Exsudat péritonéal. — Nombreux vibrions libres. Leucocytose peu abondante. Quelques rares polynucléaires contiennent des microbes. Pas d’hématies.
Cultures sur plaques. — Colonies très nombreuses fournies par l’exsudat sous-culané et péritonéal; 3 cultures sur la plaque faite avec le sang.
EXPÉRIENCE 3 Cobaye neuf. Injection de 1/2 cullure âgée de ?4 heures.
Le cobaye meurt vingt heures après l'injection. Les variations de la température et de la leucocytose n’ont pu être notées.
AUTOPSIE. — (ŒEdème sous-cutané rougeàtre de toute la paroi abdominale. Le péritoine contient un peu de liquide clair, tilant. L'intestin est fortement hyperhémié. Cæcum distendu par les gaz. Rate grosse.
LPS
Exsudat sous-cutané.— Vibrions innombrables. Aucune leucocytose. Pas d'hématies.
Examen du sang (pris dans le cœur qui battait encore). — Diminution extraordinaire du nombre des leucocytes, cette diminution portant à peu près exclusivement sur les polynucléaires. Lymphocytes en proportion normale.
Cultures sur plaques. — L'’exsudat donne un nombre énorme de colonies ; 27 colonies sur la plaque ensemencée avec le sang.
Cobaye neuf. Injection de 1/3 de culture vieille de 20 heures. Mort au bout de 19 heures.
f LEUCOCYTOSE LEUCOCYTOSE DE L’EXSUDAT ; HEURES TEMPÉRATURES DU SANG PAR MILLIM. CUBE Avant l’injection....... SOLIDE ARSDU RE 0 3 heures après........ DOCS JOUE 0 4 — ON EN RS UC ar HIDE +23 LORS ASS DL0 5 KE 56008 57
