TECHNIQUE

Avant de commencer l'étude des espèces, quelques mots sur la technique employée sont nécessaires.

Le sang a été recueilli au cœur au moyen de pipettes de verre finement effilées. Après avoir soulevé l'opercule, on pique le cœur, facile à viser, lorsqu'on s'est fixé des points de repère. C'est un procédé excellent qui peut être employé avantageusement pour l'examen du sang des animaux en cours d'expérience. Cette opération, conduite avec précision à l’aide d’une canule suflisamment fine, n'entraine pas la mort du Poisson et peut même être renouvelée plusieurs fois.

Le nombre des Trypanosomes est en général très faible, et comme

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on le verra dans la suite, la proportion des Poissons infestés n’est pas très élevée. Il s'agit presque toujours d'infections chroniques, où l'on ne trouve dans une forte épaisseur de sang entre lame et lamelle que de très rares parasites.

Dans ces cas, pour en constater l'existence il est avantageux de centrifuger pendant 10 minutes un mélange de sang provenant de plusieurs animaux de même espèce, dilué dans une petite quantité de solution citratée (eau 1000, chlorure de sodium 5, citrate de soude 5). En aspirant avec une pipette la portion du culot qui surmonte les globules rouges, on recueille quelques gouttes d'un liquide tenant en suspension des globules blancs déformés, et des Trypanosomes, quand il en existe.

Mais en présence d'un résultat positif, l'examen isolé de chacun des Poissons par la méthode des frottis permet seul d'établir une statistique exacte.

L'examen prolongé des parasites vivants a été fait entre lame et lamelle. Il importe d'éviter la contamination de la préparation par les bactéries. Il faut pour cela recueillir le sang purement, opérer vite et aseptiquement et le déposer entre lame et lamelle flambées. Le pourtour de la lamelle est luté ensuite par une bordure de paraffine.

L'observation des Trypanosomes est alors possible pendant longtemps, et l'on assiste parfois à des phases très curieuses de multiplication et de mutation de formes.

L'examen après coloration, qui permet seul de prendre connaissance .de la morphologie de ces Flagellés, a été effectué à l’aide de la méthode préconisée par Laveran (1900), et de la méthode de Giemsa. Les lames recouvertes d’une mince couche de sang étaient séchées rapidement et plongées pendant dix minutes, pour la fixation, dans l'alcool absolu. Le mélange de bleu-éosine était alors déposé sur lame après évaporation de l'alcool.

Une première difficulté de la coloration (dans l'emploi du bleu borrel-é6osine) réside dans la composition du bain.

Les proportions de matières colorantes ne se trouvent que par tâtonnements, en partant de solutions titrées, toujours les mêmes, et malgré cette précaution, on n'échappe pas à une cause d'insuccès due aux modifications qui se produisent dans la solution de bleu a l'oxyde d'argent en vieillissant. Un deuxième inconvénient, inhé-

rent à la méthode elle-même, provient de la formation de précipité qui est parfois très abondant, et peut donner lieu à de fausses interprétations. On s’en débarrasse, lorsqu'il n'est pas trop envahissant, par lavage de la lame sous un fort courant d'eau, ou bien, après séchage par un lavage au xylol, en traînant à la surface de la couche sanguine, une linge fin trempé dans le dissolvant, comme l'indique Laveran.

Malgré la protection efficace que fournit aux parasites la laque sanguine qui les emprisonne, ils peuvent dans certains cas souftrir de la rudesse de ces traitements.

La coloration dans une boîte de Petri ou dans une cuve ad hoc, permettant de maintenir en bas la face de la lame recouverte de sang, donne de meilleurs résultats, maïs cette méthode a l'inconvénient de nécessiter l'emploi d’une plus grande quantité de mélange qui précipite entièrement au bout de peu de temps.

J'ai souvent employé l'artifice suivant, et j'en ai obtenu de bons résultats. Il consiste à faire adhérer le précipité à des feuilles de papier absorbant fin, de papier à cigarettes par exemple. On en découpe des bandes de dimensions un peu plus faibles que celles de la lame; on dépose une de ces bandes sur la couche sanguine, et l'on verse par-dessus, à l’aide d’un compte-gouttes, le mélange colorant. Le précipité reste fixé au papier et la coloration peut être prolongée très longtemps selon le besoin. On peut aussi se contenter, après avoir versé quelques gouttes de colorant sur la lamé, de laisser flotter la feuille à la surface du liquide, la plus grande partie du précipité lui adhère. Le lavage final entraîne le papier et l'excès de colorant, on peut l'effectuer avec beaucoup de douceur.

La méthode de Giemsa, à l'aide de lasolution toute préparée de Grübler, n’exige pas tant de précautions, elle ne donne en ellet que très peu de précipité, et à part les tâätonnements pour arriver à la bonne dilution du colorant, elle est d'un emploi beaucoup plus facile. Mais il m'a semblé qu'elle ne permettait pas une coloration élective aussi délicate des Trypanosomes.

Après lavage rapide à l'eau les lames étaient traitées par le tanin à 5 pour 100 ou la solution de tanin-orange de Unna et séchées rapidement.

J'ai employé aussi la méthode de Heidenhain qui permet de suivre le flagelle dans les cas difficiles, mais donne de moins bons ré:

Eo0 te sultats que le mélange bleu-éosiné dans l'étude des parasites. Ilest facile de se rendre compte que les insuccès proviennent de la présence de cette laque sanguine qui prend la coloration et gène l'observation des éléments sous-jacents. Il faut pour réussir opérer sur des parasites obtenus par centrifugation et débarrassés de sang aussi totalement que possible.

Voici la liste des Téléostéens marins examinés indiquant d'une part les espèces parasitées, et d'autre part celles qui ont été trouvées indemnes. Le chiffre se rapporte au nombre d'individus étudiés (1). Ces Poissons provenaient des eaux de Luc-sur-Mer.

I. — L'existence de Trypanosomes a été constatée chez 10 Solea vulgaris (Quens.), 30 Platessa vulgaris (Flem.), 25 Callionymus lyra (Lin.}), 8 Cottus bubalis (Euphrasen), 8 Gobius niger (Lin.), 3 Blennius pholis (Lin.), 15 Limanda platessoides (Faber), 20 Platophrys laterna (Walb), très nombreuses Anguilla vulgaris (Turt), 3 Bothus rhombus (Lin.), 9 Pleuronectes flesus (Lin).

Il. — L'existence des Trypanosomes n'a pas été constatée chez % Nerophis lumbricoïdes, 4 Hippocampus quttulatus, 9 Syngnathus, 10 Motella tricirrata, 9 Motella mustela, nombreux Gadus luscus (centrifugation), 6 Mullus surmulettus, très nombreux Conger conger (centrif.), 20 Gunellus vulgaris, très nombreux Scomber scomber (centrif.), 6 Trachinus vipera, très nombreux Labrus (centif.), 8 Rhombus marimus, nombreuses A4 losa vulgaris (centrif.), 6 Labrax lupus, 8 Zeus faber.

DESCRIPTION DES TRYPANOSOMES Trypanosoma Soleæ (2) Laveran et Mesnil, (1901).

«Nous n'avons trouvé cet Hématozoaire qu'une fois sur quatre Soles(Solea vulgaris) pèchées dans l'Anse Saint-Martin, près du Cap de la Hague (Manche); chez la Sole infectée, les parasites étaient extrèmement rares elle renfermait en plus des Hæmogregarina Simondi.

«A Roscoff, l'existence des Trypanosomes de la Sole a été cons-

(1) J'ai eu l’occasion d'examiner le sang d’un Esturgeon (Acipenser Sturio),il ne renfermait pas d'Hématozoaires.

(2) Cette description est celle donnée par Laveran et Mesnil dans leur ouvrage Trypanosomes et Trypanosomiases, 1904. :

tatée par nous, mais dansune proportion plus faibleencore quedans l'anse Saint-Martin. Dans le sang frais, T. Soleæ présente l'aspect caractéristique des Trypanosomes. Les mouvements sont très vifs, on distingue une membrane ondulante et un flagelle à l'extrémité antérieure. Sur les préparations colorées on peut constater les particularités suivantes : le parasite mesure 40 y. de long, dont 32 environ pour le corps et 8 seulement pour le flagelle, qui comme on voit est très court. L’extrémité antérieure est souvent moins effilée que la postérieure; vers la partie moyenne du corps se trouve un noyau ovalaire contenant de grosses granulations de chromatine ; le centrosome, situé vers l'extrémité postérieure, est sphérique et notablement plus gros que chez T. Remaki. La membrane ondulante est bien développée. Le flagelle part du centrosome, borde la membrane ondulante et présente une courte partie libre en avant du corps. Le protoplasma renferme quelques granules chromatiques vers l'extrémité postérieure, et montre quelques fines stries longitudinales. »

J'ai retrouvé à Luc, chez Solea vulgaris, le Trypanosome décrit par Laveran et Mesnil (pl. VIT, fig. 3) avec la même fréquence mais avec des dimensions un peu plus fortes pour le corps 35 w, et moindres pour la partie libre du flagelle. Sur les Trypanosomes bien étalés elle ne mesurait dans la grande majorité des cas que # à 5 w. Le blépharoplaste est distant de 6 y de l'extrémité postérieure.

Trypanosoma platessæ Lebailly, 190% (pl. VIT, fig. 10).

On rencontre ce Trypanosome une fois sur six environ; cette moyenne est tirée de l'examen de 30 Plies (Platessa vulgaris Flem.). A l'état frais, il présente des mouvements assez rapides au début, puis il se ralentit et devient plus facile à observer. On remarque que ses mouvements de translation sont très faibles, il ne disparait que lentement du champ du microscope. Au contraire, sur place ilse contourne de différentes manières, tantôt en 8 de chiffre, et alors le point de croisement prend une réfringence spéciale très frappante; ou bien il s'enroule en crosse ou en spirale, et la membrane ondulante qui occupe la grande courbure est le siège d'une ondulation qui se transmet d'une extrémité à l'autre et change

parfois de sens.