CONCLUSIONS DE CETTE ÉTUDE EXPÉRIMENTALE

De cet ensemble d'expériences, très faciles à réaliser avec un peu de minutie, il ressort diverses conclusions intéressantes pour l’étude des Infusoires astomes en général. Je n’aifait ces études que sur l’Anoplophrya alluri, dont je possédais un abondant matériel, et j’ai fait quelques expériences comparables sur Protophrya ovicola et sur Orchitophrya stellarum. Ces recherches qui, de prime abord, paraissent étrangères au sujet parce qu’elles constituent un point de vue nouveau dans l'étude des Infusoires endoparasites, m'ont permis de connaître au simple examen d’une préparation si les parasites avaient été fixés dans de bonnes conditions, si l’opérateur avait laissé dessécher son frottis avant la fixation ou si, au contraire, il avait plongé ses Infusoires dans une solution hypotonique avant de les fixer. C’est grâce à ces recherches, au cours desquelles je me suis habitué à voir vivre les parasites que j’étudie dans ce mémoire que j’ai trouvé l’adaptation au milieu marin

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d'Orchitophrya, que je me suis rendu un compte exact de l'anatomie normale de Cepedella, que j’ai débrouillé l'anatomie et l’évolution de Protophrya ovicola et fixé sa place dans la systématique. Ces résultats me paraissent montrer suffisamment l'intérêt de ces recherches. C’est dans l’unique espoir de rendre service que je me suis décidé à les livrer à la publicité.

ANATOMIE NORMALE D’ANOPLOPHRYA ALLURI

MORPHOLOGIE. — Anoplophrya alluri rappelle par sa forme générale Anoplophrya striata Dujardin bien que, chez cette dernière on observe plus fréquemment un renflement antérieur. Anoplophrya alluri a une forme plus régulière. Tantôt (fig. 46), elle a l’aspect d’un ovale régulier, l’extrémité antérieure étant à peine plus aiguë que la postérieure ; tantôt, au contraire, les bords latéraux de l’Infusoire sont rectilignes et parallèles et l’une des extrémités est plus arrondie (fig. 38).

TAILLE. — De même que la forme, la taille du parasite est très variable et en relation avec la division transversale. Les plus grands individus mesurent 80 u sur 45u; les plus petits 60 x sur 30 p.

EcToPLAsME. — L'étude détaillée de l’ectoplasme (fig. 35, 36, 37, 39, 40, 43) peut servir de type de description pour les autres Anoplophrya. Comme je l’ai indiqué déjà, l’ectoplasme est nettement défini. Au-dessous de lui, on observe une zone claire dans laquelle plongent les racines ciliaires. Elle est limitée. intérieurement par la superficie de l’endoplasma granuleux. Extérieurement elle est définie par l’épaississement cuticulaire au niveau duquel on observe les corpuscules basilaires des cils (fig. 35 et 36), très nettement observables sur des coupes de l’Infusoire fixé au sublimé acétique ou au Bouin et coloré à l’hématoxyline de Heidenhain. Extérieurement on voit à la base de chaque cil, une petite tigelle, très mince qui occupe la région centrale de l’élément vibratile.

Cizs. — Les cils sont étroitement tassés sur les stries d’insertion ciliaire. Lorsque l’Infusoire est placé sur sa sole, les stries

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sont longitudinales. Elles suivent l’incurvation du corps du parasite quand celui-ci se tord en lame d’hélice comme je l’ai indiqué plus haut. Les stries d'insertion ciliaire sont à une distance de 1 environ et les cils sont disposés sur elles à un intervalle de 0 y 5. Le puissant appareil ciliaire constitué par tous ces éléments vibratiles, longs (7 u) et grêles permet à l’Infusoire les mouvements rapides déjà étudiés.

La vibration des cils s'effectue chez Anoplophrya alluri comme l’a observé Savizze KENT chez Opalina ranarum (1880). FAURÉ-FRÉMIET l’a notée récemment (1907) chez Anoplophrya striata Dujardin en établissant encore cette comparaison si souvent faite, entre l’appareil ciliaire des Infusoires endoparasites et l’appareil ciliaire des cellules épithéliales : « L’ensemble des cils au lieu de vibrer synchroniquement est « parcouru par des ondes métachroniques comme la surface « ciliée d’un épithélium ». Ainsi que je le faisais remarquer au Congrès de Reims (1907), cette vibration métachronique s’observe surtout très bien lorsque le parasite commence à s’altérer. J’ai moi-même étudié, en même temps que FAURÉ- FRÉMIET et d’une manière absolument indépendante cet intéressant point de la physiologie de ces Infusoires. Je l’ai réétudié chez À. striata et l’ai suivi chez Anoplophrya alluri Cépèdé depuis le moment où les Anoplophrya sont extraites de leur milieu parasitaire normal jusqu’à leur mort.

Ce phénomène peut s’étudier d’une manière très simple et très sûre lorsque l’Infusoire commence à souffrir de son séjour in vivo. À ce moment, en effet, on voit se ralentir progressivement les vibrations. Les ondes vibratoires se forment comme de véritables vagues à la partie postérieure de l’animal. Elles s’avancent lentement avant que les précédentes aient disparu à la partie antérieure du corps.

L’Infusoire apparaît recouvert d’une série de bourrelets vibratiles mobiles qui cheminent vers la partie antérieure avec une vitesse d'autant plus faible que l’animal est dans de plus mauvaises conditions vitales.

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On peut aussi étudier la reptation de l’Anoplophrya entre lame et lamelle. Ce frottement ralentit les mouvements vibratiles de l’Infusoire ; ainsi, encore, on analyse facilement le mouvement de l’appareil ciliaire. |

EXDOPLASME. — L’endoplasme d’A. alluri contient une partie liquide compacte au sein de laquelle on observe des grains très fins de taille variée. Cette fine granulation rend opaque la région ectoplasmique inférieure claire déjà signalée. Par l’étude des matériaux fixés, la partie liquide de l’endoplasme est coagulée sous la forme de fines fibrilles anastomosées. Sur ces fibrilles (fig. 39, 40, et 44), se voient les petits grains qu’on observe in vivo, mais ceux-ci prennent la laque ferrique alors que le reste de l’endoplasme se colore par l’éosine ou l’orange.

VACUOLES CONTRACTILES. — Les vacuoles, en nombre variable, différant selon la taille de l’Infusoire et augmentant avec elle, sont disposées en deux séries régulières de part et d’autre du macronucléus et débouchent sur la face dorsale, convexe, du parasite (fig. 39 et 40). Leur forme varie avec le moment de la pulsation. Certaines apparaissent en coupe avec une forme très renflée et aplatie dans le sens transversal, ce qui leur donne un aspect globuleux, surbaissé (fig. 39) ; d’autres, au contraire, sont piriformes allongées (fig. 40). Elles se terminent par un court canal qui s’ouvre par un pore très petit et disposé entre deux cils. À son niveau (fig. 39 et 40), les cils s’écartent.

Le pore a des formes diverses selon le moment de la pulsation. RAY-LANKESTER (1870) a très bien observé ce fait déjà chez A. naïdos. Il en a donné d’excellents dessins dans sa planche (fig. 6).

J’ai étudié la pulsation in vivo et j’ai pu en préciser les détails.

L'étude de la pulsation des vacuoles contractiles est très délicate. Ce phénomène s'effectue seulement lorsque l’Infusoire astome est maintenu dans” des conditions biologiques normales ou assez voisines de la normale. En effet, dès que

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l'animal est altéré, les vacuoles deviennent immobiles;le plus souvent elles arrêtent leur pulsation alors qu’elles sont en diastole. Dans ce cas, elles sont nettement visibles. Parfois au contraire, elles s’arrêtent en systole. Alors les vacuoles sont réduites à leur plus simple expression. Il est même impossible de les soupçonner si on n’est pas prévenu de leur existence par l’observation préalable de ces éléments sur d’autres individus de la même espèce.

J'ai abordé l’étude de la physiologie des vacuoles par deux procédés qui se complètent mutuellement : voici comment j'ai opéré dans le cas des parasites des Annélides. Le Ver est tronçonné. Le contenu intestinal s'échappe. Les parasites sont ainsi mis en liberté dans le liquide qui sort du Ver. Ils sont donc conservés dans des conditions à peu près normales. Je fais deux parts du produit de la dissection. L’une est étudiée in vivo ; l’autre est additionnée d’un peu de carmin.

19 Examen in vivo. — L'étude in vivo se fait à l’immersion. On peut ainsi l’observer dans tous ses détails. Pendant la systole (fig. 41), les globules liquides qui se trouvent au voisinage immédiat de la vacuole pulsatile grossissent par une dialyse des liquides endoplasmiques. Puis, au fur et à mesure de la diastole, ils laissent filtrer leur contenu à travers la paroi

de la vacuole et tandis que celle-ci grossit (fig. 42), ils diminuent progressivement de volume.

Au moment de la diastole, le pore de la vacuole est extrêmement petit (fig. 42) ; au moment de la systole, il se dilate sous la pression du liquide vacuolaire qui en sourd et revient peu à peu à sa première forme en passant par un stade en forme d'étoile (fig. 41).

Le temps nécessaire à une pulsation de la vacuole n’est pas constant. Il est fonction de l’état physiologique du parasite.

DURÉE DE LA PULSATION. — Chez Anoplophrya alluri, les vacuoles pulsent avec très grande lenteur ; j’ai noté 52 secondes, 74 secondes, 80 secondes entre deux systoles successives ; je crois qu’il est difficile de donner une moyenne exacte pou-

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vant être considérée comme durée normale de la pulsation. Il résulte de mes observations que ce phénomène physiologique est sous la dépendance des conditions du milieu et par conséquent de l’état de l’Infusoire. Plus rapides dans des conditions normales, les pulsations se ralentissent au fur et à mesure que le parasite se rapproche de la mort. Selon la tonicité du milieu, l’animal meurt avec ses vacuoles en diastole ou en systole. Le plus souvent la mort se produit après quelques pulsations très rares et a lieu lorsque les vacuoles sont dilatées.

20 Observations après coloration. — Une addition de carmin neutre rend le phénomène plus facilement étudiable à un faible grossissement. Ce colorant ne trouble pas d’une manière trop sensible la physiologie de l’Infusoire et permet donc de considérer le phénomène observé comme normal. D’ailleurs, j'ai toujours contrôlé mes observations sur matériel coloré in vivo par une étude des mêmes phénomènes sans coloration préalable. Cette addition de carmin facilite à l’œil le travail d'observation. Elle jette les bases de l’étude in vivo sans coloration et sert ainsi de guide précieux. Je ne l’ai jamais négligée.

Les vacuoles pulsatiles se dilatent et se contractent indépendamment les unes des autres. Cette indépendance, observée in vivo, se vérifie très facilement par la coloration carminée. Après quelques minutes de coloration, l’Infusoire a pris une teinte rosée très pâle. Certaines vacuoles sont teintées en rose vif, alors que les autres ne sont pas encore colorées. Cela tient à ce que les premières ont déjà pulsé, les autres sont restées au repos.

MACRONUCLÉUS. — La forme la plus générale du macronucléus est celle d’un ruban régulier (fig. 45). Toutefois, on observe très souvent un aspect serpentiforme de cet élément (fig. 38) ou encore une série de renflements disposés irrégulièrement sur son parcours où encore, et plus souvent, une série d’expansions latérales, plus ou moins accentuées (fig. 46) qui font le passage à la forme rhizomorphe qu’on observe dans l’intéressant Rhizocaryum concavum Caullery et Mesnil,

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Ordinairement, le macronucléus occupe la majeure partie de la longueur du corps. Parfois, au contraire, il est plus ou moins recroquevillé, jusqu’à n’occuper qu’une petite portion de la région axiale du corps (fig. 38). Ces aspects ne paraissent pas dus à des malformations ou à des accidents de préparation car tous les autres éléments sont absolument normaux.

Quelle que soit sa forme, le macronucléus à toujours la

F1G. VI. Trois Anoplophrya alluri Cépède, dont la premiere (A) est en division, montrant leur macronucléus irrégulier, plus ou moins contourné. Le cytoplasme est schématiquement indiqué par un pointillé. N, macronucléus ; #, micronucléus ; v. c., vacuoles contractiles.

même structure. Celle-ci s’étudie avec beaucoup de netteté sur des coupes de l’Infusoire (fig. 44).

Le macronucleus est limité par une membrane nucléaire très mince qui s’applique étroitement sur le contenu macronucléaire pendant la vie de l’organisme. Aussi, elle est impossible à observer in vivo (fig. 45). Mais dès qu’on fait agir les agents fixateurs (carmin acétique de Schneider, sublimé, acide osmique, etc.),elle se détache de son contenu qui se contracte de manière à n’occuper qu’une partie plus ou moins restreinte de l’espace qu’elle limite (fig. 38, 44, et 46). Elle apparaît alors comme une fine membrane très nettement individualisée et prenant assez fortement les colorants nucléaires (fig. 46). Sur

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des coupes sériées de l’Infusoire, on voit se dessiner par place quelques grains chromatiques. disposés sans ordre à la partie interne (fig. 48). A l’extérieur, les trabécules endoplasmiques viennent prendre appui sur elle.

Le contenu macronucléaire est représenté par une masse fondamentale, homogène, rappelant celle observée par les auteurs chez les autres Astomes ou chez les Ciliés libres et étudiée avec précision récemment par AWERINZEW chez Bütschliella opheliae (1).

Dans cette masse (fig. 45), on observe in vivo des corps chromatiques de taille variée et de forme plus ou moins globuleuse. Ils ont alors un aspect réfringent ; et sont disséminés sans ordre dans le contenu homogène (fig. 45). Après fixation et coloration (fig. 44 et 46), ils prennent fortement les colorants et on les voit apparaître comme des grains plus foncés au sein de la masse fondamentale faiblement colorée.

MICRONUCLÉUS. — Au cours de mes observations, il m’a toujours été facile de mettre en évidence le micronucléus d’À. alluri Cépède, malgré sa petitesse et sa place très peu favorable pour un bon examen. En effet, le micronucléus est situé dans la région superficielle de l’endoplasme et très déjeté de côté (fig. 34, 35, 36,37, 38, 43, 45et 46). En cet endroit, la forme convexe de l’Infusoire fait voir dans la coupe optique toute une série de stries d'insertion ciliaire qui se projettent sur lui et en masquent la place. Avec une certaine habitude, on arrive néanmoins à le déceler. Mais il est beaucoup plus difficile à voir que chez toutes les autres espèces que j’ai étudiées.

Sa forme est celle d’un fuseau régulier, plus ou moins renflé. Son renflement varie avec son évolution en vue de la division transversale de l’Infusoire.

Au début de la division (fig. 35), sa chromatine, jusque-là répandue uniformément à son intérieur, s’ordonnance et peu à peu se tasse selon deux chromosomes placés bout à bout

(1) Pendant l’impression de ce mémoire a paru une étude de CoZlinia branchiarum Stein par Cozzin (1909) où la structure du macronucleus a été observée avec beaucoup de précision,

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comme s'ils formaient un très court spirème. Puis, ces chromosomes se dédoublent et se voient côte à côte (fig. 36) rappelant ce qu'AWERINZEW a noté d’une manière précise chez Bütschliella ophelie.

‘ DIVISION TRANSVERSALE. — Ces transformations micronucléaires sont le prélude de la division transversale. A ce stade, on voit déjà apparaître sur l’ectoplasme (fig. 34 et fig. vrr4) un sillon qui va s’approfondir graduellement au cours du phé-

A, P. ee D.

Fi. VII] (4. B. C. D.). Différents stades de ladivision transversale®d’4. aZuri.\Contours du corps, du macronucléus et du micronucléus à la chambre claire. x 500.

n, micronucléus ; — N, macronucléus ; — V, vacuoles pulsatiles ; — s, sillon

transversal ; n', n°, micronuclei des individus fils; N', N°, macronuclei des indi-

vidus fils. Le cytoplasma est teinté uniformément ; les cils ne sont pas représentés.

nomène de division (fig. VILZ à vIL?). Bientôt le micronucléus s’étrangle en bissac alors que sa chromatine se scinde encore de manière à ne constituer qu’une série de grains chromatiques ordonnancés sur les restes fusoriaux (fig. 43) et rappelant la figure 9 d'AWERINZEW ou ce que POYARKOFF et moi avons observé chez Cepedella hepatica (1909). Finalement les deux extrémités renflées du bissac fusorial s’écartent beaucoup en même temps qu’ils s’allongent (fig. 37). Leur chromatine se tasse et le filament d’union qui est représenté par la paroi micronucléaire et par les restes des filaments fusoriaux continue à les relier quelque temps. Finalement, ce filament

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devenu très mince se rompt vers son milieu et les deux micronuclei-fils sont isolés (fig. vrC), chacun d’eux emportant avec lui une partie du filament d’union ce qui lui donne l’aspect d’une larme (fig. 45 et vrit). |

Pendant ce temps, le sillon s’est approfondi progressivement. Un étranglement est survenu dans le macronucléus dont la chromatine ne s’est pas orientée comme chez Cepedella ou Bütschliella.

Pendant que les micronucléi continuent à s’écarter de façon à reprendre finalement leur place normale vers le milieu de la longueur du corps de chacun des deux Infusoires encore unis, le sillon se creuse de façon à ne plus laisser subsister qu’une bande d’union de plus en plus étroite (fig. vi et vrr?). Pendant tout ce temps, l’Infusoire en division continue à se mouvoir. Finalement, les deux individus ont une vie autonome et dans leur course prennent des positions d’inclinaisons diverses l’un par rapport à l’autre par des rotations variables autour de l’axe longitudinal (fig. vrC et vrr 2). Au terme de la division, la région médiane qui unit encore les deux Infusoires se rompt et chacun d’eux reconstitue un nouvel individu.