INTRODUCTION ET HISTORIQUE

Le dosage des orthophosphates inorganiques est un dosage, auquel le clinicien doit avoir recours pour compléter l'étude de son malade dans un grand nombre de maladies, en particulier dans les affections osseuses et rénales. Il ne faut pas croire cependant qu'un dosage actuellement très courant possède une technique des plus simples. Bien au contraire, pour de multiples raisons que nous allons étudier, nombreuses sont les précautions que doivent prendre les cliniciens et les Biochimistes pour que cette déter- Be mination soit faite avec toute l’exactitude nécessaire.

Le plus grand nombre des méthodes de dosage des orthophosphates se basent sur la formation d’un dérivé de l'acide Phosphomolybdique.

La quantité de ce dérivé est détermirée suivant le cas par une méthode pondérale, volumétrique, stéréométrique, néphélométrique ou colorimétrique. En ‘IChimie générale on pèse le phosphomolybdate d’ammonium et en Biochimie le sulfophosphomolybdate de Baryum (Posternak). Dans la méthode Sôrensen- Machebœuf, on détermine par acidimétrie la quantité

du phosphomolybdate de sodium. On mesure le volume du complexe de Copaux. Mais la faible quantité des orthophosphates minéraux présents dans les milieux biologiques interdit l’utilisation d’une de ces méthodes dont la sensibilité n’est pas suffisante. Aussi «st-on obligé d’avoir recours aux méthodes néphélométriques ou colorimétriques qui sont sensibles au millième de milligramme.

Les méthodes néphélométriques reposent sur l’appréciation du trouble que fait apparaître dans le milieu la formation de Phosphomolybdate de Strychnine découvert par Pouget et Chouchak. La densité de ce trouble augmente sensiblement d’une façon directement proportionnelle à la quantité d’orthophosphates présents dans le milieu. Cette méthode a été utilisée par PORTE (3) en 1914 modifiée par BORDE (4) en 1922 et, enfin, en 1931, par S. G. CLARKE (5).

C’est aussi la formation du Phosphomolybdate de Strychnine qu’utilise la méthode d'EmBpex. Dans cette méthode on centrifuge le milieu troublé par la formation du phosphomolybdate de strychnine. On le sépare ainsi de la liqueur où il s’est formé, il est ensuite retransformé en acide phosphomiolybdique, réduit «et on finit par doser le bleu Phosphomolybdique ainsi obtenu.

Ce bleu Phosphomolybdique a été utilisé pour la première fois en 1887 par F. Osmonp (6) qui dosait les orthophosphates colorimétriquement après réduction du phosphomolybdate d’ammonium par le chlorure Stanneux. Taylor et Miller repr'rent cette méthode en 1914 en remplaçant le chlorure stanneux par

la Phenyl. Hydrazine. En 1920 G. DEN

GES (8) en France et BELL et Doisy (9) en Amérique découvrirent qu’il était inutile d'isoler le phosphate —

Let TO sous une forme insoluble, le bleu complexe pouvant se former en présence d’un excès d’ion molybdique. Le réducteur employé par Denigès est le chlorure stanneux extemporanément préparé. Bell et Doisy emploient l'hydroquinone. Bricés (10) en 1922 renforce l’action réductrice de l’hydroquinone par du sulfite de soude et il détermine les meilleures conditions . d’acidité convenant à la formation du bleu. = BENEDICK et THEts (11) en 1924 appliquent la méthode de Bell Doisy, Briggs en faisant former le bleu à chaud. | La méthode n’était pas encore arrivée à sa forme définitive. FisKE et SUBARROW (12) en 1925 remplacent l'hydroquinone par l’acide naphtol sulfonique dont ils combinent l’action réductrice avec celle d’un sulfite ou d'un bisulfite. Ainsi la coloration apparait à froid en 5 5 minutes. ;

Enfin en 1927 KUTTNER et COHEN (13) redécouvrent la méthode de Denigès (Chlorure stanneux stabilisé) qui, depuis 1930, est décrite en Améique sous le nom de Méthode de KUTTNER<LICHTENSTEIN (14).

Cet historique était nécessaire pour montrer combien sont voisines des méthodes portant des noms très différents. De plus on comprend qu'il faut éviter z de désigner par un, deux ou trois noms propres une méthode dont un si grand nombre d'auteurs peut re- vendiquer une paternité partielle. Il me semble que le nom de Méthode Céruléo-Molybdocolorimétrique de dosage des Phosphates aurait l’avantage de dési- gner d’une facon plus précise le mécanisme de la méthode, sans que soit le moins du monde lésé un seul pa des chimistes qui ont contribué à son édificatiom. Üne. méthode idéale doit posséder une technique simple et donner des résultats exacts. Ces deux qua-

D EU lités ne vont généralement pas de concert : il faut prendre de nombreuses précautions et pratiquer de délicates manœuvres pour effectuer un dosage correct. Une étude théorique de 1ä méthode va nous permettre de déterminer parmi toutes ces précautions et ces manœuvres celles qui sont nécessaires et celles qui sont suffisantes.