LE PROTEUS ET LA MÉTHODE DE GRAM

Tous les bactériologistes ne sont pas d'accord sur la manière dont se comporte ce microbe quand on le traite par la méthode de Gram. Les uns, et ce sont les plus nombreux et les plus anciens, le considèrent comme prenant le Gram ; les autres affirment qu’il se décolore toujours après l’action de la solution 1odo-iodurée.

Bien des auteurs ont dû être frappés de cette divergence d’opinions, mais cependant il en est peu qui aient tenté de faire cesser l’indécision qui persistait sur ce point important: C’est Léon Feltz (1) qui le premier, en 1900, aborda sérieusement ce sujet ; ses essais portèrent sur quatre Proteus d'origines diverses qu'il étudia très complètement à différents points de vue.

A l'égard des affinités colorantes, après avoir répété maintes fois ses expériences dans des conditions variées, 1l en arriva aux conclusions suivantes : « Le Proteus vulgaris prend toujours le Gram, mais il faut pour cela opérer sur des cultures jeunes, ense-

4. Léon Fer, Le Proteus vulgaris Hauser ; thèse de Pharmacie, Paris, 1900.

DANGATES

mencées sur des milieux où il pousse bien ; ces conditions sont très importantes pour arriver à de bons résultats. » Il fit également remarquer qu'il est indispensable de toujours employer une solution de violet de gentiane faite, au moment du besoin, avec de l'eau anilinée récente et que, si l'on veut utiliser le violet phéniqué il est de même nécessaire qu'il soit fraichement préparé.

Etant donné le soin que Feltz avait apporté à ses recherches il semble que ses résultats auraient dû résoudre définitivement la question qui nous occupe; pourtant il n'en est rien et, parmi les nombreux auteurs qui ont étudié Le Proteus après lui, bien peu ont confirmé ses conclusions si catégoriques.

Je ne passerai pas en revue tous les travaux qui, depuis 1900, ont eu ce microbe pour objet et je me contenterai d’en eiter trois, relativement récents. [ls sont d'ailleurs particulièrement suggestifs parce qu'ils ont été publiés presque en même temps, qu'ils ont porté sur des races isolées dans des lieux fort éloignés les uns des autres et qu'ils classent tous les trois le Profeus parmi les espèces ne prenant pas le Gram.

Dans le premier de ces mémoires, en juillet 1911, C. À. Herter et C. Ten Broeck (1), de New-York, indiquèrent, en effet, que les deux Proteus qu'ils ont examinés se décoloraient après l'action de l’iode. Dans le second, paru trois mois plus tard, E. Glaser et J. Hacla (2), de Vienne, dirent avoir étudié 16 Proteus d'origines très diverses et qui étaient tous Gram-négatifs. Enfin, en novembre de la même année, Ch. Cantù (3) publia les résultats de recherches entreprises à l'Institut Pasteur sur plus de 180 Proteus isolés par lui, dans les conditions les plus variées, et qui tous se décoloraient après traitement par la solution iodée.

Si ces divers auteurs avaient précisé la technique de leurs essais de coloration, peut-être aurais-je trouvé l'explication du désaccord qui existe entre leurs affirmations et celles de Feltz ; mais comme aucun d'eux n'a donné les détails nécessaires, j'ai tenu à me faire une opinion personnelle en utilisant les 61 Proteus que j'avais à ma disposition. Pour chacun de ces échantillons

1. C. A. Henrer et CarL Ten Brogcx, « À biochemical study of Proteus vulgaris Hauser ». Journal of biological Chemistry, L. IX, juillet 49144, p. 494.

2. E.Guaser et Joser HacLa, « Beiträge zur Kenntnis der Proteusbakterien… ». Zeitschr. f. Immunitätsforschung, Original, t. XI, 14. okt. 4944, pp. 310-355.

3. CH. Canru, « Le Bacillus proteus, sa distribution dans la nature ». Annales de l'Institut Pasteur, t. XXV, nov. 4914, p. 852.

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d'origines si diverses, j'ai fait plusieurs séries d'essais en employant des cultures en eau peptonée où sur gélose ordinaire. L'eau peptonée était une solution à 20 pour 1,000 de Peptone pancréatique Defresne : la gélose était préparée avee un mélange à parties égales de bouillon de viande non peptoné et de peptone Martin.

Les préparations étaient faites avec des cultures ayant sept, vingt-quatre, où quarante-huit heures de séjour à 37° et établies en six exemplaires pour chaque série, Après dessication spontanée, deux d'entre elles étaient fixées par la chaleur à la manière ordinaire ; deux autres étaient fixées par immersion dans une solution aqueuse saturée de sublimé, contenant 5 pour 1.000 d'acide acétique, lavées à l'alcool et séchées à 37 ; enfin les deux dernières étaient arrosées avec un mélange à parties égales d'alcool absolu et d’éther que je laissais s'évaporer sans faire intervenir la chaleur. Ces préparations diversement fixées étaient traitées, les unes suivant l’ancienne technique — violet de gentiane aniliné fraichement préparé, solution 10do-iodurée à 1 pour 300 d'iode, alcool absolu — les autres par la méthode généralement employée aujourd'hui — violet de gentiane phéniqué, solution iodo-iodurée au 1/300, décoloration par le mélange de Nicolle : Alcool absolu 5 volumes, acétone, 1 volume. Toutes étaient alors immergées quelques instants dans la fuchsine de Ziehl diluée au 1/10 pour recolorer les éléments microbiens devenus incolores.

De plus, je n’ai jamais employé de liqueur iodo-iodurée vieille de plus de quinze jours et j'ai toujours pris soin de faire une décoloration aussi ménagée que possible. Chaque fois que j'ai utilisé l'alcool-acétone j'ai suivi scrupuleusement les indications données par MM. Nicolle et Remlinger dans leur Précis de Technique Microbiologique. Je me suis donc placé dans des conditions très variées, mais malgré cela, parmi les nombreuses races de Proteus que j'ai examinées, Je n'en ai pas trouvé une seule qui ait pris le Gram.

Cependant je n’ai pas voulu me contenter de ce résultat et j'ai fait encore quelques essais en utilisant des milieux qui me semblaient capables d’influencer quelque peu les affinités colorantes des Proteus cultivés sur eux. J'ai été guidé dans leur choix par les travaux de M. Guerbet, Mayer et Schaeffer (1) d’après lesquels Les

1. M. Guerger,- Mayer et ScHAgrrER, « Sur les réactions micro-chimiques des corps gras et la réaction de Gram », C. AR. de la Soc. de Biologie, 1910, t. LXVIII, p. 353.

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microbes gardant la couleur après traitement par l’iode devraient cette propriété à la présence dans leur protoplasma d'acides gras non saturés. Ces milieux étaient les suivants : |

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B : Eau 100, Peptone pancréatique, extrait de viande, oléate de soude aa 1 gr.

C : Eau 100, Peptone pancréatique, extrait de viande, oléate de soude aa { gr., glucose 2 gr.

Pour ces expériences spéciales je n'ai pas employé tous mes Proeus; j'ai pris simplement le n° 15 (diarrhée infantile), Le n° 44 (viande en putréfaction) et le n° 42 (collection de l’Institut Pasteur). J'ai fait des préparations avec des cultures ayant 24 et 48 heures de séjour à 37, je les ai fixées par la chaleur, l’alcool-éther ou le sublimé acétique et je les ai traitées par l'ancienne technique.

Le tableau ci-dessous rend compte de ce que J'ai observé ; le signe, + y indique une préparation qui présentait d'assez nombreux éléments colorés en violet ou à peine décolorés et très granuleux ; le signe + une préparation dans laquelle presque tous les microbes étaient décolorés, mais où l’on trouvait encore quelques éléments légèrement granuleux ; enfin le signe — équivaut à la décoloration totale.