CHAPITRE V
MESURES DES POTENTIELS
12. Marche des expériences. —— Les équilibres ont été mis en évidence d’abord dans des tubes THUNBERG-Borsook au moyen de 3 sortes de mesures.
4) J'ai suivi l’évolution du potentiel dans un mélange contenant la déshydrase, le colorant et un mélange équimoléculaire d’hypoxanthine ou de xanthine et d’acide urique. Les potentiels limites atteints dans ces conditions correspondent aux potentiels définis en groupant dans les équations XX ou XXII tous les termes qui restent constants lorsque l’activité en ions H* de la solution est fixée. Pour le système hypoxanthine acide urique : Ale Wa [H+]
Pur Poe (rule Pare l
LS KKRK, TK KR) + JHTPK, FAP RT fl PSE HS CRT NE F5 043%
2) J’ai ajouté à un mélange d’hypoxanthine, de diastase et de colorant qui a atteint son équilibre, une quantité déterminée d’acide urique, telle que le rapport hypoxanthine-acide urique soit encore égal à l’unité.
Dans ce cas, le potentiel devra finalement atteindre la même valeur E; que celle obtenue dans la première série de mesures.
3) Tandis que l’hypoxanthine réduit le chlorure de diméthyle dipyridile, l’acide urique devra oxyder le leuco-dérivé de ce même colorant. On évitera ainsi l’objection que l’arrêt de la réaction dans un mélange d’hypoxanthine et d’acide urique est dû à une inhibition de la diastase par l’acide urique.
On sait en effet que les diastases sont généralement inhibées par des concentrations élevées du substrat sur lequel elles agissent. Dans le cas particulier de la xanthindéhydrase, les recherches cinétiques de Dixon et THurLow (5) ont montré que la vitesse d’oxydation varie avec la concentration de la xanthine et de l’hypoxanthine comme le montre la figure (5).
Si bien que l’on peut se placer ainsi que nous l’avons fait dans toutes nos mesures dans des bonnes limites de concentration.
[Il est toujours important dans les déterminations effectuées en présence de catalyseurs diastasiques d'opérer suivant les deux sens de la réaction.
On verra que ces 3 sortes de mesures ont donné des résultats tout à fait cohérents. On pouvait également penser à mesurer le potentiel en fonction du hypoxanthine xanthine
ES FE D rs > ? A acide urique acide urique et à s'assurer que, pour un pH donné,
log [H+]. (XXIII)
rapport
LE , c SUR L ÉQUILIBRE DOXYDORÉDUCTION DES OXYPURINES 1
la relation (XII) s’applique bien. Mais da faible solubilité de l’acide urique, de la xanthine et même de l’hypoxanthine ne donne pas une marge suffisante pour
nue varier notablement le rapport des constituants de la réaction, à moins d'employer comme tampons des sels de lithium.
18. Équilibre entre l’hypoxanthine et l’acide urique. — Toutes les déterminations ont été effectuées dans un milieu tamponné. Les solutions tampons étaient constituées par un mélange de phosphate monosodique et de soude (*).
cm? de xanthine ou d’hypoxanthine.
Fig. 5. — Chaque tube contient : 5,0 cm? xanthinedéshydrase (solution dans du tampon) ; 0,5 cm® bleu de méthylène 1 %, æ cm$ hypoxan thine ou xanthine (2 mgr. pour 1 em), 0,5 — x cm$ d’eau. (D’après Dixon et THURLOW).
J'ai travaillé successivement avec du tampon 1 M; 0,1 M; 0,05 M; 0,02 M, 0,01 M.
La diastase était dissoute directement dans du tampon à une concentration de 19;
Quant aux oxypurines, leur concentration était 1-47.-10—?M. Cette valeur s’est trouvée être la plus favorable étant donné la faible solubilité de ce corps. La solubilité et la stabilité dans les différents solvants des oxypurines sont fonction du pH et des divers catalyseurs, en particulier des traces de métaux, et des phosphates.
Les chiffres sur la solubilité des dérivés puriques, trouvés dans la littérature, sont d’ailleurs très différents entre eux et ceux des ampholytes puriques le sont encore davantage.
{(*) L'étude de Dixon et Taurrow (5) sur la cinétique de l'oxydation diastasique des oxypurines montre que les tampons de phtalate et d’acétate inhibent cette réaction, il est donc préférable d’effectuer les expériences en présence de tampons de borates ou de phosphates.
32 SABNA FILITTI
L'acide urique était dissous d’abord dans la soude N/10 à froid, ou dans du tampon de Benedict à chaud (vers 600). Nous avons été amenés à faire dissoudre l'acide urique dans du tampon de Benedict (9 grammes PO,NaH et 4 gramme PO,NaH, pour 1 000 em° H,0), selon les indications de E. LE BRETON et Ch. KaïseR (8) pour ne pas avoir de trop grandes variations de pH quand on ajoute la solution d’acide urique dans NaOH N/10 dans le mélange d’hypoxanthine, de diastase et de colorant dans le cas où le tampon était dilué (0, 1 M ; 0,05 M ; 0,02 M ; et 0,01 M).
A froid (18) la solubilité de l’acide urique dans du tampon de Benedict n’est que de 1,17 gr. (pour 1000 em° tampon) vers 809, elle est de 2,79 gr. (pour 1000 em° tampon).
Quant à l’hypoxanthine, elle était dissoute soit dans de la soude N/10 à froid, soit en chauffant légèrement (60°) dans du tampon de Benedict, soit dans de l’eau (600) dans le cas où le tampon était dilué.
Il n’est pas utile en effet pour l’hypoxanthine d'utiliser toujours le tampon
TaBLzEeau VII
Hypoxanthine M /68 solution dans NaOH N/10 ; Acide urique M/68 solution dans NaOH N /10. Déshydrase 1 % solution dans tampon M de pH — 8,3 ; Méthylviologène 10 M.
Chaque tube contient : 4 cm® d’hypoxanthine, 3 cm de déshydrase, 0,2 cmÿ de méthylviologène. Dans le tube n° 3 on ajoute 1 cm? d’acide urique dès le début. Dans le tube n° 4 on n’ajoute l'acide urique que lorsque l'équilibre est atteint, au moment indiqué par un astérisque. Le tube n° 2 est un témoin servant à démontrer qu’un excès du substrat n’influe pas sur la valeur finale du potentiel. Dans le tube n° 1 DH aigus 1 cm de tampon de phosphate pour qu’il contienne le même volume de liquide que les autres ubes.
Numéros des tubes — "I Heures 1 2 3 Ë E} volt E} volt Ez volt Ex volt
AAA ME Rem nr coras — 0,056 — 0,373 — 0,371 0,220 SA PRE Ra 10,563 — 0,452 — 0,446 00 OA E nn n — 0,432 — 0,479 — 0,475 — 0.454 GRAS ne — 0,461 — 0,497 — 0,495 — 0,462 PAR (Da DE EE SN AMI — 0,502 0,522 10,529 — 0,502 2 CARO OR ERREUR — 0,504 — 0,520 — 0,522 — 0,506 20 EE — 0,507 —10 521 — 0,521 — 0,506 46 h.. — 0,503 — 0,509 — 0,503 — 0,511 28 he — 0,501 0913 — 0,507 — 0,510 + 1 cm ac.
Ne enr IRes "01500 Race 10,502 051 — 0,509 = 0,510 69 nie — 0,500 —0,508 — 0,501 — 0,512 be : Sn — 0,501 0,507 — 0,503 — 0,508 % me — 0,506 — 0,514 — 0,508 10,502 00 De — 0,490 — 0,496 — 0,489 En 0 408 1 Er — 0,489 — 0,493 — 0,489 10,294
