DEUXIÈME PART'E
Recherche du Toxique
$S #. Réactions. Leur sensibilité
Méthodes de recherche du toxique
Nous indiquons brièvement dans ce paragrapte les réactions du pentachlorophénol auxquelles nous avons eu recours dans nos recherches du toxique dans les organes et excreta d'animaux empoisonnés.
Parmi toutes les réactions que nous avons expérimentées au début de nos recherches, seulement quelques-unes nous ont paru présenter une sûreté, une spécificité et une sensibilité suffisantes. C'est ainsi que celle obtenue au moyen du réactif de Millon, quoique la plus sensible de toutes celles que nous ayons observées, ne présentail pas une spécificité suffisante dans les conditions où nous opérions : nous n'en avons jamais Lenu compte.
1% Réactions d'oxydaiion.
Les conditions de l'oxydation des chlorophénols ont été étudiées d'une facon approfondie par M. E. Barral. L’oxydation par l'acide azotique, ajouté à raison d'une partie pour deux de solution étendue. de pentachlorophénol ou de pentachlorophénate de soude (condition habituellement réalisée dans sa recherche dans les tissus et excreta) produit à chaud, autour de la température el delébullition, une belle
coloration rouge ou rouge-orangée, avec un ménisque rougecerise.
Sensibilité : A ; Où perçoit encore
on
: f | Û 4 :} L g nr "r 6 msn une vague coloration, jusqu à la concentration de ue
perçoit une odeur de chloropicrine.
2° Réactions de précipitation.
a) Par le nitrate d'argent. Deux gouttes de nitrate d'argent N/10 ajoutées 3 à 4 cm° de solution de pentachlorophénol ou de son sel de soude donnent à froid un précipité jaune-orangé de pentachlorophénate d'argent. Ge précipité se forme lentement aux grandes dilulions.
Sensibilité : 60 000:
b) par le sulfate de cuivre. Une goutte de solution de sulfate de cuivre à L 0/0 ajoutée à 3 ou # em° de solution de pentachlorophénol ou de son sel de soude donne à froid un précipité brun de pentachlôorophénate de cuivre.
Sensibilité : 16 di
e) par le chlorure merecurique. Donne un précipité jaune clair.
Sensibilité : :
d) par un acide. Un acide minimal, ajouté à une solution de pentachlorophénol à l'état de sel de soude précipité le pentachlorophénol très peu soluble dans l'eau. Un acide fort (HSE par exemple) ajouté à une solution aqueuse saturée de pentachlorophénol donne égasement un précipité blane floconneux très appréciable : le pentachlorophénol semble encore moins soluble dans l'eau acidifiée que dans l'eau distillée.
a à 3 11 \ . il Sensibilité : 10 000:
Eh fus
Méthodes de recherche du toxique
Nos premières recherches ont porté sur de l'urine, des matières fécales, du tissu musculaire et glandulaire d'animaux sains, auxquels nous avions incorporé de faibles quantités de pentachlorophénol. Celà nous a permis de mettre au point el de comparer plusieurs procédés, et d'en apprécier la sensibilité. Nous avons été à même alors d'opérer sur des tissus et excreta d'animaux intoxiqués.
Tout d’abord, nous nous sommes efforcés de relirer le poison par épuisement à l'alcool fort. ou au benzène de l'extrait sec. Get extrait élait fait dans le vide et à basse température. La grande difficulté est de séparer lé pentachlorophénol des pigments que dissolvent les solvants organiques. Cette méthode, longue et assez délicate, ne présente pas les conditions de sensibilité requises dans la majorité des cas.
Le procédé de choix est celui qui consiste à entrainer le pentachlorophénot par la vapeur d'eau. L'appareil consiste en un générateur constitué par un ballon, qui envoie un courant de vapeur, par un tube deux fois recourbé dont l'extrémité touche presque la paroi interne inférieure d'un ballon. Ge ballon est relié d'autre part à un réfrigérant descendant. Le produit à examiner est mis dans le ballon, pulpé s'il y a lieu et étendu d'eau, et additionné de 20 0/0 d'acide sulfurique. Il est porté lentement à une lempérature voisine de celle de l'ébullition, et on fait passer la vapeur d'eau. On recueille 30 à 40em° de distillat, en 3 ou # portions de 10cm°.
Ordinairement, ce distillat est trouble et contient des particules en suspension. Quand la proportion de pentachlorophénol est forte, le distillat est laiteux. Ce liquide est filtré à l’entonnoir à vide Büchner de 4 em. 5 de diamètre. Filtrat et fillre sont examinés à part. On peut pratiquer
directement les réactions sur le filtrat, ou bien le concentrer dans le vide à faible température. Quant au filtre, il estlavé modérement à l’eau distillée, puisilest mis dans un verre de Bohème de 5 em de diamètre: il en ed juste le fond. 3 gouttes de soude N/10 sont ajoutées à 5 cm° d’eau distillée, et le tout, versé sur le disque du papier-filtre, est porté doucement à l'ébullition. On filtre au Büchner pour séparer les substances non dissoutes s'il y en a, et les particules de papier filtre que l’ébullition à détachées. En présence de papier tournesol très sensible (nous nous sommes servis de Lakmus papier de Kahlbaum}, on ajoute très lentement de l'acide sulfurique N/10, de façon à oblenir un liquide aussi voisin que possible de la neutralité. C'est sur ce liquide qu'on fait les réactions.
Bien souvent, opérant sur des quantités extrèmement faibles de pentachlorophénol, nous avons opéré la dissolution des particules sur filtre par quelques gouttes d’eau distillée très faiblement alcalinisée ; les réactions sont alors faites, réduites au nombre des plus caractéristiques, dans des verres de montre. Nous avons quelquefois compté comme positives des recherches au terme desquelles seule a été positive la réaction au nitrate d'argent. Celle-ci est très sensible, et suffisamment caractéristique, quand on opère par comparaison avec des tissus ou exerela d'animaux sains comme témoins.
Sensibilité de la méthode
Nous avons pu retrouver par ce procédé, deux dixièmes de milligramme de pentachlorophénol dans 150 em.° d'urine. Les réactions, pratiquées sur le liquide provenant de la dissolution sur filtre par la soude des particules en suspension dans le distillat, ont donné les résultats suivants :
49 tue
Acide... —
NO° H à chaud... —
SO* Cu... douteux
NO Have
Nous avons constaté, en opérant sur 200 cm° d'urine
auxquels nous avions ajouté un milligramme de pentachlorophénol, que les réactions au sulfate de cuivre et au nitrate d'argent étaient très nettement posilives ; celle à l'acide nitrique était à peine perceptible.
S® Becherche du pentachlorophéno! dans
l'organisme
Nous nous sommes efforcé de déterminer :
A. — Si le pentachlorophénol se localise dans certains organes.
B. — Si le pentachlorophénol est éliminé en nature par l'urine et les fèces.
A. — Le pentachlorophénel se localise-t-il dans quelques oréanes
1° Le Foie. — Nous avons opéré nos recherches sur des foies d'animaux ayant succombé à des doses toxiques faibles, adminisirées en une seule fois, et à des doses très faibles mais répétées.
1'e analyse. — Chien, 18 kg, injecté le 22/11-19923 par voie intraveineuse à une dose de 0 gr, 40. Le chien a élé sacrifié une heure et demie après l'injection.
La recherche est pratiquée par entrainement à la vapeur.
Les réaclions sont faites sur le liquide provenant de la dissolution par la soude des particules en suspension (A) et sur le filtrat (B).
À. | acide fort... — NO°H à chaud... ?
S0‘Cu… — | NOag. + comparable au tube témoin à ns
B. — Toutes réactions négatives.
Présence de très faibles qualités de pendataclorophénol.
9 analyse. — Chien poids 11 kg. une première fois à la dose de 0 gr. 05 par kilogramme, et 5 jours après à la dose de 0 gr. 07 par kilogramme, par voie hypodermique.
Méthode : entrainement par la vapeur.
A. — Liquide provenant à la dissolution par la soude des particules en suspension dans le distillat :
acide fort... —
NO'H à chaud... —
SO‘Cu... —
NO'Ag... + {à peine perceptible).
B. — Filtrat. — Toutes les réactions sont négatives.
Présence douteuse de quantités extrêmement faibles de pentachlorophénol dans ce foie cependant macroscopiquement très altéré.
3° analyse. — Gobaye tué en 9 heures par une dose de 0 gr. 025 administré par voie gastrique.
Méthode : entrainement par la vapeur.
A. — Liquide provenant de la dissolution par la soude des particules en suspension : Réactions négatives,
B. Filirat : Réactions négatives.
Recherche du phénol : Réactions négatives.
Pentachlorophénol et phénol libres décelables — 0.
4° analyse. — Gobaye ayant subi une série d'injections hypodermiques de pentachlorophénol à doses croissantes,
