AGE DE LA GOUTTE POIDS DU COBAYE | TEMPS DE LA MORT

2 jours — 3 heures. Etuve. 587 grammes. 45 heures. — — laboratoire. 639 42

4 jours — 6 heures étuve. 670 B2-h. 1/2.

— — étuve. 610 survit (impuretés.) 6 jours — 3 heures laboratoire. 665 98 — 6 jours — 6 heures étuve. 508 survit.

9 jours — 7 heures laboratoire. 537 48

4. Pour la 1re survie, le charbon Moculé était UHR d’un autre microbe; dans le 2e cas, le charbon était pur.

GrenouiLze IT. — Lymphe prise 6 heures 1/2 après. AGE DE LA GOUTTE | POIDS DU COBAYE | TEMPS DE LA MORT 3 Jours 2 heures étuve. 471 -- 67h "Ar:

Témoins. | 105 =

1 jour 6 heures étuve. | 590 grammes. | 53 heures, | | |

Ces deux séries d'expériences concluent très nettement à une non atténualion. :

La lymphe in toto constitue donc un bon milieu de culture pour la bactéridie charbonneuse. — L'étude de cette lymphe nous donne une autre démonstration de ce fait que j'ai déduit de mes recherchés sur la durée de vie du bacille dans le corps de la grenouille, à savoir que les microbes sont englobés à l’état vivant: en observant une goutte à l’étuve, on constate que de petites colonies prennent naissance dans les leucocytes, et proviennent naturellement des microbes qui y sont inclus. Les leucocytes constituent eux aussi un milieu favorable, mais seulement quand ils sont morts.

Il suffit de comparer ce que j'ai dit à propos des poissons avec ce que nous venons de voir pour se convaincre de la similitude absolue des phénomènes observés dans le mode de réaction de ces animaux contre le charbon. Et cette similitude doit suffire, à mon avis, pour prouver que la théorie de MM. Kanthack et Hardy (23-24), non applicable aux poissons,

ne doit pas l'être non plus aux grenouilles. ÿ

La constatation que les microbes sont englobés à l’état vivant et virulent par les leucocytes nous empèche également d'accepter cette théorie. ,

Examinons pour terminer ce qu'il faut penser de la présence des éosinophiles au point d’inoculation.

Quelles sont les cellules qu'on rencontre dans l'exsudat péritonéal?

Normalement, le sac lymphatique dorsal renferme une petite quantité de lymphe. Si on cherche, à l’aide d’une pipette effilée, à recueillir un peu de cette lymphe, on n’en a jamais qu’une quantité insignifiante. Il faut recourir aux artifices que M. Ranvier décrit dans son traité d’histologie, pour s’en procurer une quantité appréciable. |

7 Nr

Dans cette Iymphe se trouvent les 3 sortes de cellules qui constituent les globwes blancs des grenouilles.

1° Les lymphocytes, petiies cellules à noyau unique, arrondi, prenant assez uniformément et assez fortement les couleurs basiques d’aniline, ce noyau occupe presque toute la cellule; le protoplasme tient une place extrêmement faible, et il prend le bleu de méthylène plus fortement que le noyau ;

2° Les leucocytes ordinaires à noyau tantôt arrondi et unique (c'est le cas le plus rare), tantôt multilobé; tous les termes de passage sont à observer entre ces deux formes extrêmes; on peut avoir jusqu’à 4 lobes. Ces lobes sont en général nettement séparés et unis entre eux par des ponts de substance d’une finesse et d’une ténuité extrèmes (fig. 8); on observe ces fils d'union comme une légère ligne bleue, un peu plus épaisse au voisinage des lobes. Dans des cas assez rares, on n’observe pas ces fils d'union; mais il semble impossible de dire qu'ils n'existent pas. Ce noyau, si varié d'aspect, se colorebien par lebleu de méthylène, aussi fortement que le noyau des lymphocytes.

1] n'existe donc pas dans la lymphe de la grenouille deux types tranchés de globules blancs tels que les microphages et les macrophages humains.

Les microphages existent seuls; mais ils ne présentent pas toujours le type polynucléaire.

Le protoplasme occupe un volume double du noyau et se colore en bleu très clair, à peine granulé. Ce sont les leucocytes hyalins de MM. Kanthack et Hardy ;

3° Les éosinophiles, comme dimensions et comme forme du

noyau, rappellent tout à fait les leucocytes hyalins. Notons cependant que le noyau ne prend pas toujours la couleur aussi fortement que celui de ces derniers. On a tous les-degrés jusqu’au bleu très pâle. Tout l’espace extra-nucléaire est rempli de granulations arrondies se colorant en rouge par l’éosine, en jaune sale par l’aurantia, et ayant tous les caractères des granulations & d’'Ehrlich (fig. 9).

Quel rôle jouent ces diverses formes de leucocytes dans la leucocytose et la phagocytose?

Dans la lymphe normale, dans le sang, les lymphocytes sont en proportion assez forte, quelquefois la moitié du nombre total des globules blancs.

Dans l’exsudat dorsal, on en trouve à peine 2 0/0, quelquefois moins; et jamais on ne trouve de microbes dans ces cellules. Leur chimiotaxie est nulle ainsi que leur pouvoir phagocytaire. Les vrais phagocytes, ce sont les leucocytes ordinaires, les leucocytes à protoplasme hyalin. Ils arrivent des premiers; dès le commencement de la leucocytose, uous en voyons ayec des microbes à leur intérieur; et leur rôle continue jusqu’à la disparition complète de tous les microbes.

Les uns en contiennent peu à leur intérieur, les autres en sont baurrés; le noyau paraît alors refoulé à une extrémité de la cellule qui renferme une grande vacuole avec les microbes à son intérieur. Souvent les microbes isolés, englobés par les leucocytes, sont entourés d’un espace clair; ce qui indique nettement qu'ils sont dans des vacuoles. C’est probablement là le stade initial de l’englobement.

J'ai été maintes fois frappé par ce fait que, dans une cellule, les microbes englobés sont en majeure partie disposés parallèlement les uns aux autres.

. Chaque leucocyte agit pour son propre compte, et jamais nous n'avons observé de ces plasmodes que décrivent MM. Kanthack et Hardy. Tout au plus voit-on, assez rarement, plusieurs leucocytes bout à bout occupés à dévorer une longue chaîne bactéridienne. Nous sommes sur ce.point d'accord avec tant d'auteurs qu'il est superflu d’insister. Les éosinophiles viennent au point d'inoculation et souvent même en grand nombre. D’autres fois, on n’en trouve que 1 0/0, surtout si l’on opère avec Réna esculenta.

L'opinion unanime, dans la science, est que les cellules à granulations n’ont aucun pouvoir phagocytaire. £t MM. Kauthack et Hardy, qui ont porté leur attention sur celte variété de cellules, qui ont cherché, par de nombreuses expériences, à préciser leur rôle, sont tout à fait affirmatifs sur ce point. Ils disent bien avoir souvent vu des microbes collés pour ainsi dire sur ces cellules, mais jamais ils n’en ont observé à leur intérieur.

Il est difficile souvent de dire si un microbe est à l’intérieur d'une cellule ou à sa surface: maintes fois on hésite. Mais certains cas ne pouvaient être douteux, et j'ai dû me rendre à cette évidence que les éosinophiles sont des phagocytes ; ils englobent des microbes. C’est là un fait qui est surtout impor-

tant au point du vue de la physiologie générale du sang et de la lymphe.

Dans le cas de la grenouille, leur rôle phagocytaire se réduit à peu de chose. Ceux qui contiennent des microbes à leur intérieur sont rares, et ces microbes sont en général en très petit nombre, 2 ou 3, 5 au plus.

Les faits que je viens d'indiquer seront repris dans notre

“chapitre final quand nous chercherons à nous faire une idée du

rôle de Ja cellule éosinophile.

B. sr des souris. — Dans son mémoire de 1889. M. Lubarsh (32) s'exprime ainsi : « C'est un fait particulièrement PR que les bacilles de la septicémie des souris qui se trouvent en si grande quantité dans les leucocytes des souris sensibles à la maladie, ne donnent lieu, dans le sac lymphatique dorsal de la grenouille, à des phénomènes de phagocytose, que si on en injecte une quantité considérable ; dans mesrecherches, il fallait au moins 5 à 6 c. c. d’un liquide contenant beaucoup de microbes en suspension. »

Ainsi donc les leucocytes de la grenouille n'engloberaient que dans des.cas tout à fait exceptiônnels le Bacillus murisepticus. Et de ce fait, M. Lubarsh (35), dans son grand travail d'ensemble sur le charbon, tire un très bon argument contre la théorie des phagocytes. |

= Dans son dernier mémoire (36), après avoir développé cette idée que les leucocytes sont attirés par les produits de sécrétion des microbes, il ajoute : « Si les bacilles virulents sont portés dans um milieu nutritif tellement défavorable que leurs propriétés vitales les plus faibles ne puissent plus se manifester (B. de la septicémie des souris chez la grenouille, bactéridie charbonneuse chez les Ascidies), il ne se produit ni chimiotaxie ni phagocytose...» C’est d’ailleurs une simple hypothèse que M. Lubarsh n’appuie par aucun fait. Il m'a paru intéressant de rechercher s’il y avait réellement là une exception à la théorie

dela phagocytose.

Je me suis servi de septicémie des souris tuant la souris en 2 jours 1/2 à 3 jours à une dose variant entre 1/4et 1 c. c. Entre ces limites, la quantité de culture injeclée n’a pas d'influence sur la durée de l'infection. 5

La culture était faite en bouillon de veau peptonisé, et on

injectait dans le sac dorsal 1 c. c. de cette culture âgée de 1 jour ou 2 au plus.

Une petite quantité de lymphe était prélevée au point d'inoculation à des temps variables après l’injection.

L'examen des lames colorées permet de se rendre compte de la manière dont la grenouille réagit.

Une heure après l’inoculation, pas ou extrêmement peu de leucocytes dans le sac dorsal (probablement ceux qui y étaient déjà) : donc leucocytose nulle. 4 heure 1/2 ou 2 heures après, on

observe toujours unephagocytose, tantôt très faible, tantôt très active (avec des phagocytes bourrés de microbes).

Deux à trois heures après, les microbes libres commencent à être moins nombreux. La phagocytose est de plus en plus importante. Quelquefois même, la moitié des microbes sont déjà intracellulaires, certains phagocytes sont tellement bourrés de microbes qu’ils ont triplé ou quadruplé de volume (fig. 12).

Le résultat observé 4 heures après ne diffère pas sensiblement de celui que. je viens de décrire. On passe par un maximum d'action qui dure toute la quatrième heure. À ce moment, le sac dorsal est gonflé de lymphe, tout à fait comme dans le cas du charbon. |

Puis cet exsudat diminue: sensiblement. Après 5 heures, le nombre des microbes libres diminue rapidement; le nombre des phagocytes également; les leucocytes bourrés de microbes deviennent plus rares.

Si nous examinons la lymphe 17 heures après l’inoculation, nous observons très peu de microbes libres; et en revanche des phagocytoses nombreuses : la mauvaise coloration des microbes semble indiquer que beaucoup d’entre eux ne sont plus vivants. — Les phénomènes de dégénérescence sont des plus nets; les microbes se colorent faiblement en bleu, quelques points seulement prenant bien la couleur.

On observe quelquefois aussi dans les ae de petites boules bleu foncé, qui proviennentindubitablement des microbes. M. Metchnikoif en a figuré de semblables pour le rouget (41).

29 heures après l’inoculation, la phagocytose est à peu près terminée, — Les microbes intracellulaires se colorant bien sont extrêmement rares. Les formes d’involution représentées (fig. 15 et 16), ne sont plus fréquentes. Dans beaucoup de cellules, on

RÉSISTANCE DES VERTÉPRÉS IMFÉRIEURS. 33

observe de petites masses tout à fait informes se colorant assez faiblement, mais mieux que le fond protoplasmique homogène. Quelquefois la masse rappelle un peu une forme de bâtonnet. Ce sont Les derniers restes des microbes tués et bientôt digérés.

Ainsi donc, la disparition des bacilles de la septicémie se fait peu à peu et dans les mêmes conditions que pour ceux du charbon. Il semble seulement que la leucocytose, et aussi la phagocytose commencent un peu plus tôt.

Nous sommes loin de cette idée de M. Lubarsh, que les cultures de septicémie ont un pouvoir chimiotactique à peu près nul: il est supérieur à celui du charbon.

Nous devons maintenant résoudre les questions, jusqu'ici inabordées, de la vie et de la virulence du microbe sous la peau de la grenouille.

J'ai fait trois sortes d'expériences :

41° De la lymphe prise un temps variable après l’inoculation est ensemencée dans du bouillon; et, quand il y a culture pure de septicémie, le bouillon est injecté à une souris;

2° De la lymphe prise au point d’inoculation est introduite sous la peau du dos d’une souris;

3° Delalymphe est conservée à l’étuve ou dans le laboratoire un temps variable et étudiée au bout de ce temps (colorations, cultures en bouillon, inoculations).

Les deux premières séries d'expériences, traitant de l’action de la lymphe chez l'animal vivant, nous les examinerons ensemble.

Elles se trouvent résumées dans le tableau suivant :

DATÉE DE LA PRISE RÉSULTAT NE Lee : RÉSULTAT

DE LYMPHE DE L'INOCULATION 2h DE L’INOCULATION FE de 4: c. c: en bouillon.

bouillon,

de la grenouille. Souris meurt en: Souris meurt en:

après: l’inovulation de la lymphe:

eures. Culture pure. ÿ j.et quelqu?s heures.

id. Moins de 23:

Culture pure. 2 j. et 1/2

4 jours. id. j. et quelques heures.

3J. et quelques heures.

j. et quelques heuresf

id. id,

id, : 1 tube sur 2 pousse 6 jours. id.

8 — "id.

id. D FEU) Culture pure.

id: 5 J: 1} id.

id! * jte id.

Ne meurt pas. Nul.

5j. moins 3h. Culture pure.

Ne meurt pas. Nul.

Un certain nombre de faits ressortent de ce tableau. Le bacille de la septicémie reste vivant longtemps dans le sac lymphatique dorsal; j’ai encore eu une culture en ensemençant la lymphe 11 jours après l’inoculation.

Ces cultures en bouillon tuent la souris dans le temps normal. Done, s’il: y a atténuation, elle est tout à fait passagère, et disparaît dès qu'on transporte le bacille dans un bon miliew de culture.

En: examinant le résultat des inoculations de lymphe directement à des souris, il semble qu'il y ait tantôt atténuation, tantôt perte complète de la: virulence.

Mais toutes les fois que la souris n'est pas morte, nous devons

remarquer que les cultures faites avec de la lymphe prise en même temps que celle qui a servi à l’inoculation, ou bien n’ont rien donné, ou bien ont donné seulement une culture sur 2 tubes ensemencés. — Il serait donc exagéré de chercher à tirer une conclusion de ces survies.

Festent les cas oùies souris sont mortes, mais avec un retard sur le temps normal. En admettant que les bacilles qui ont tué les souris étaient atténués, ils ont vite repris leur virulence : une culture en bouillon du sang de ces souris tue dans le temps

4. Dans ce dernier cas, nous avions inoculé une culture à une souris de poids double de la moyenne.

id. 3j. etquelques-heures:|}

RÉSISTANCE DES VERTÉBRÉS INFÉRIEURS. 35 normal. — Mais je crois bien plutôt que le retard dans la mort

est dû am petit nombre de bactéries injectées

J'ai, en effet, inoculé plusieurs souris avec une aiguille à cataracte trempée dans une culture de septicémie, et il est évis dent que j'inoculais ainsi un nombre de microbes incomparablement plus grand que celui qui se trouve dans une goutte de lymphe plus de 4 jours après l'injection.

Mes résultats ont été les suivants :