V. — GRENOUILLE ET CHARBON A

M. Gibier (15), le premier, constata le fait qu’un certain nombre de grenouilles inoculées du charbon et placées dans de l'eau à 35-37° mouraient avec de nombreux bacilles dans le sang et les organes. M. Metchnikoff (38) vérifia ce fait en 1884 et l’expliqua en admettant qu’à 38° le charbon sécrète un poison qui paralyse l’action des leucocytes.

Depuis, beaucoup de savants ont repris cette question. Les uns pensent que le corps des grenouilles chauffées présente moins de résistance à la croissance du bacille; les autres, comme M. Petruschky (51), que l'énergie des bacilles a augmenté; M. Voswinkel (60) croit même que les deux facteurs entrent en jeu. Pour MM. Nuttall (48) et Lubarsh (35), le corps des grenouilles chauffées se comporte exactement comme celui de grenouilles mortes.

MM. Lubarsh (35) et Sanarelli (57) mettent bien en évidence ce fait que, à des températures élevées, les grenouilles inoculées et non se comportent de la même façon. — M. Lubarsh constate que, à 35-37°, toutes meurent en 8 à 16 heures ; à 28-349, il y en à qui survivent. Et il arrive à cette conclusion qu’en réalité les grenouilles chauffées ne meurent pas du charbon.

Tous des savants se bornent à peu près uniquement à observer le résultat final. Ils n’eutrent pas dans l’étude intime des phénomènes, qui consiste à chercher comment se comporte le bacille du charbon dans le corps de la grenouille depuis le moment de l’inoculation jusqu’à la mort, et surtoul, quelques heures avant la mort. Presque tous se contentent de déclarer que la phagocytose au point d’inoculation est plus faible que chez les grenouilles à 20°

M. Kanthack (22), dans des expériences assez compliquées, porte alternativement les grenouilles à 25° et à 42°. 11 déclare que le charbon pousse à 25° et que les phagocytes n'y touchent pas (les éosinophiles ne sont pas alors attirés) ; il y a ensuite destruction du charbon à 12°, grâce au concours des éosinophiles.

Je me suis attaché à suivre le phénomène depuis le commencement jusqu’à la fin.

Les grenouilles étaient portées à la chambre étuve à 35°, dans un cristallisoir contenant une petite quantité d'eau, et légèrement incliné, afin que l’eau occupe seulement la moitié du fond. Ce cristallisoir était fermé par un treillis en toile métallique. L'eau était renouvelée une ou deux fois par jour.

Le point important est de mettre une quantité convenable d’eau. S'il ‘en a trop peu, le cristallisoir se dessèche pendant la nuit, et le lendemain matin on risque de trouver les grenouilles mortes desséchées. S'il y en a trop, l'inconvénient «estænutre : le corps de la grenouille porte une riche flore microbienne

Mr »

qui se développe rapidement dans l’eau à 35° et la corrompt ; les grenouilles meurent alors empoisonnées ou asphyxiées.

En y prenant soin, j ai réussi à faire vivre certaines grenouilles à l’étuve. Et elles continuaient à vivre ensuite à 20° — Naturellement, à côté des grenouilles inoculées, je mettais en même temps, et dans des conditions analogues, des grenouilles témoins appartenant au même lot que les premières.

En opérant comme je viens de le dire, un premier fait m’a frappé : c'est la différence de sensibilité pour la chaleur des Rana esculenta et des Rana temporaria.

Les Rana esculenta, inoculées ou non, résistent très bien à l’action de la chaleur; j’en ai eu qui ont vécu des semaines à 35°, Pour cette espèce, l’immunité à 35° pour le charbon ne fait pas de doute *.

La Rana temporaria. placée dans les mêmes conditions que la | résiste moins bien ; elle meurt toujours entre 12 heures

4 jours, la température du laboratoire élant 20°*. Malgré les précautions prises, je n’aipu en garder plus de 5 5 jours.

Par une acclimatation lente et graduée, on arrive à faire vivre des Rana temporaria à 35°.

Dans toutes ces expériences, les grenouilles étaient portées brusquement de 20° à 35°. Elles étaient inoculées au moment d’être mises à l’éluve.

J'ai reconnu, comme M. Lubarsh, que les grenouilles ino- “culées ét non inoculées mouraïent exactement de la même façon. JILest donc évident que les grenouilles inoculées ne meurent pas

du charbon.

Que devientle charbon à l’intérieur du corps d'une-grenouille à 33°? Mes recherches ont porté sur.3 points :

A. — Examen de l’exsudat dorsal à des temps variables après l’imoculation ; B. — Examen des D organes d’une grenouille. tuée

au moment où elle n’a plus qu’un petit nombre d'heures à vivre C. — Examen du sang et des différents organes d'une grenouille morte à l’étuve.

1. L’étuve étant par hasard à 38°, une 2. esculenta y a vécu 5j jours.et :est morte accidentellement ; 6 heures après l’inoculation, la moitié.des bacilles étaient intra-

cellulaires.

9. Quand la température du läboratoire est 42-150, les pere meurent à

l’étuve en moins de 12 heures.

A. — D'une façon générale, on peut dire qu’il y a leucocytose aussi rapide que chez les grenouilles à 15-20°, mais moins intense. La phagocytose est des plus nettes.

Sur ce point je suis en contradiction avec presque tous mes devanciers. Aussi vais-je préciser le fait par la description de quelques lames colorées. .

49 RANA ESCULENTA. — Lymphe prise 4 heures après l'inoculation. Leucocytose moyenne; la grande majorité des bacilles est intracellulaire.

Lymphe prise 6 heures après (autre grenouille); bonne leucocytose, phagocylose très intense et tout aussi nette qu’à 15-20°. Les microbes libres sont rares.

Lymphe prise 8 heures après (autre grenouille). — (Le maximum de leucocytose est dépassé.) Leucocytose faible; la moitié des leucocytes contiennent des bactéries dont quelques-unes se colorent mal; la majeure partie des bacilles sont libres.

Lymphe de la même grenouille 24 heures après. Même leucocytose que la veille ; les bacilles libres sont rares. On voit beaucoup de leucocytes ayant englobé des microbes; mais dans la minorité des cas seulement, ces microbes sont bien colorés.

Lymphe de la même grenouille 53 heures après. Les microbes semblent avoir complètement disparu; on n’en voit plus de libres; dans quelques leucocytes, traces plus ou moins nettes.

2° RaANA TEMPORARIA. — Lymphe prise 4 heures après. Leucocytose faible, 1/3 de leucocytes avec microbes; la moitié des microbes intracellulaires (celte grenouille meurt la nuit suivante avec charbon généralisé).

Lymphe prise 5 heures après. Leucocytose faible. Une notable partie des leucocytes (1/3 ou 1/4) ont englobé des microbes; quelques-uns en sont bourrés. Néanmoins les microbes libres sont plus nombreux que les intracellulaires.

Lymphe de la même prise T heures 1/2 après. Faible leucocytose. La majeure partie des leucocytes renferment des microbes; quelques-uns en assez grand nombre. La moitié au moins des microbes sont intracellulaires. Beaucoup d’éosinophiles.

Lymphe de la même prise 24 heures après. Même leucocylose que la veille: Très peu de microbes libres. Les englobés sont assez nombreux et paraissent encore peu dégénérés; — 1/8 d'éosinophiles. (Cette grenouille meurt la nuit suivante avec charbon généralisé).

Lymphe prise 55 heures après. 11 existe encore une leucocytose. La moitié au moins des globules renferment des microbes, en général en très grand nombre, et paraissant en bon état; les bacilles dégénérés sont peu communs. Les bacilles libres sont tellement rares qu'ils peuvent provenir de leucocytes éclatés. Cette grenouille meurt accidentellement (par dessiccation du cristal-

lisoir) 4 jours 1/2 après l’inoculation ; aucune trace de charbon dans le et les organes.

RÉSISTANCE DES VERTÉBRÉS INFÉRIEURS. Al

De tout ce qui précède résulte, il me semble, que la destruction du charbon, au point d’inoculation, m&rche parallèlement chez les Rolls : à 35° et chez les grenouilles à la température FER Ily a simplement un léger retard pour les premières.

Le même parallélisme existe pour la destruction dans le sang et le foie. 2 Rana esculenta traitées de la même facon, l’une à 359, l’autre à 20°, sont sacriliées 33 heures après l’inoculation.

POUR LA GRENOUILLE A 20° POUR LA GRENOUILLE A 35e 4 gouttes de sang donnent 6 colonies. | 5 gouttes de sang donnent 15 colonies. Le frottis d’un lobe de foie 10. 1 goutte — 5 — Frottis de foie 15 —

Les nombres sont bien comparables.

B. — Avec un peu d'habitude, il est facile de diagnostiquer, quelques heures à l’avance, la mort des grenouilles. Je vais décrire brièvement ce que j’ai observé chez 2 grenouilles (R. temporaria) sacrifiées l’une 12 heures, l’autre 45 heures après l’inoculation.

La 1'e appartenait à un lot de 3 grenouilles. Au moment où on la sacrifie, ses 2 compagnes sont mortes; elle paraît très affaiblie ; mise sur le dos elle ne se relève pas.

Le sang observé sans coloration ne montre pas de bactéridies. Mais en ensemençant 2 gouttes de sang sur gélose, il pousse de nombreuses colonies. Au point d’inoculation, exsudat faible. L'examen de la lymphe dorsale, en lame colorée, montre des microbes libres, mais la majorité des microbes sont à l’intérieur des leucocytes. Donc phagocytose très nette et très avancée.

Les coupes du foie, colorées comme nous Pavons indiqué précédemment, montrent :

Dans les vaisseaux, hyperleucocytose très nette. Nombreux microbes dans tout l’organe ; la grande majorité sont intracellulaires.

Parmi les phagocytes, la plus forte partie sont des leucocytes, et se trouvent soit dans les grands, soit dans les petits vaisseaux. Ces leucocytes se distinguent nettement des cellules hépatiques proprement dites par leurs noyaux plus petits, à chromatine disposée d’une façon plus dense et plus homogène.

Les cellules endothéliales rappellent, par leurs noyaux, les eucocytes ; quelques-unes manifestent leurs propriétés phago-

42 RÉSISTANCE DES VERTÉBRÉS INFÉRIEURS. o

cylaires. Leur position et la présence fréquente des grains de pigment brun à leur intérieur permettent de les reconnaître facile-

ment. Ces cellules du foie des grenouilles, appelées souvent « pigmentzellen » sont bien connues + ce sont les homologues des cellules étoilées de Kupfer du foie des mammifères; comme elles ce sont des macrophages.

Les microbes libres sont peu nombreux, toujours enfilaments d’un très petit nombre d'articles; on n’observe pas encorede développement net,

Dans la rate, le nombre des microbes est proportionnellement moins grand que dans le foie. La majorité de ces microbes sont englobés; il.y en a aussi de libres, et certains ont même légèrement poussé (4 ou 5 articles au maximum).

Dans le rein, le phénomène est un peu différent. Là les microbes libres sont nombreux et il y en a dans la veine cave, dans la veine porte rénale, et dans les ramifications de ces veines. Sur aucune des coupes, jen’en ai observé dans l’aorte, à lahauteur du rein.

Les microbes sont rares dans les glomérules. Ces bacilles paraïssent avoir déjà poussé; et l’on remarque fréquemment des filaments d’une dizaine d'articles au moins.

Quelques leucocytes renferment des microbes; mais ces phagocytes sont bien moins nombreux que dans le foie. Fe

Ainsi donc, cette grenouille, au moment où son agonte wa : commencer,montre des microbes englobés dans tous ses organes, et cet englobement semble être surtout dû aux microphages. :

Chez une autre grenouille, sacrifiée 45 heures après l’inoculation parce qu’elle paraissait malade (sa compagne, alors bien portante, meurt 20 heures après), l'examen des coupes d'organes ne révèle aucun bacille charbonneux. Deux gouttes de sang ensc-

“mencées sur gélose ne donnent le lendemain que 3 hs de charbon. La destruction des microbes était donc à peu près ‘complètement terminée au moment où cette grenouille commençait à présenter des signes morbides.

C.— Les examens post mortem corroborent complètement-ce que nous venons d'observer peu d'heures avant la mort. Voici, avec quelques détails, le résultat de l'examen des différents organes d'une grenouille ouverte comme morte 24 heures:après l'inoculation, mais dont le cœur battait encore. à

ot mi 7 ÈS D

Dans le sang, on voit de rares bacilles en filaments de quelques articles. Deux gouttes ensemencées sur gélose donnent le lendemain un gazon charbonneux à peu près uniforme.

Dans le foie, on voit un nombre considérable de microbes. On rencontre des microbes libres surtout dans les gros vaisseaux qui sont gorgés de globules sanguins. Ces microbes sont déjà en chaînes,*quelquefois d’une dizaine d'articles. Certaines coupes de vaisseaux montrent un réseau assez serré de microbes ; d’autres en montrent assez peu : et alors on peut woir mettement que les leucocytes bourrés de microbes bien colorés sont nombreux.

Cette constatation est surtout facile à faire dans les petits vaisseaux et particulièrement dans les capillaires ; là les microbes ont peu poussé, et on en voit des quantités d'intracellulaires. Nous n'avons jamais vu de microbes dans les cellules endothéhiales des gros vaisseaux, cellules aplaties et à noyau allongé se colorant bien par le carmin. Mais dans les capillaires, les cellules endothéliales remplies de microbes ne sont pas rares, et surtout celles qui renferment du pigment; pourtant, quand le pigment remplit la cellule, on ne voit plus de microbes. Dans la destruction des bacilles, ces cellules macrophages paraissent jouer un rôle qui est environ le dixième de celui des leucocytes.

- Dans la rate, il y a incontestablement moins de microbes que dans le foie, la plupart intracellulaires. Faible développement microbien.

Le rein au contraire, contient un nombre considérable de bactéridies. Ce qui frappe à un faible grossissement, c'est la teinte violet foncé d’un certain nombre de glomérules. |

Les petits vaisseaux de ces glomérules sont alors gorgés de microbes en filaments assez longs, souvent incurvés pour suivre le trajet de ces vaisseaux.

La veine porte afférente est gorgée de sang; les microbes, en grande partie extra cellulaires, sont en filaments assez

courts. | Les vaisseaux de la face dorsale (artérioles et ramifications. de la veine porte) sont remplis d'éosinophiles ‘et de microbes ayant déjà bien poussé. Ceux de la face ventrale renferment peu de microbes.

Malgré ce développement considérable de la bactéridie, il

est facile de voir des bacilles intracellulaires disséminés un peu partout. Il y en a quelques-uns dans des cellules endothéliales.

Ce tableau de la distribution des microbes dans les organes au moment de la mort, nous le retrouvons semblable chez tous les animaux morts avec du charbon généralisé.

Si nous faisons au contraire l’autopsie de la Rana temporaria morte cinquante heures après l’inoculation, nous ne trouvons aucun microbe ni dans le sang ni dans les organes. Il en est de même pour les autres grenouilles mortes au bout d’un temps plus long.

D'après tout ce qui précède, il est facile de se faire une idée de la façon dont le charbon se comporte chez une grenouille à 35°. La destraction des microbes se fait comme chez la grenouille à 15-20° : destruction au point d'inoculation par les leucocytes : transport des microbes dans le courant sanguin, arrêt dans un certain nombre d'organes, en particulier le foie, où il y a une faible destruction par les « pigmentzellen ». La disparition des microbes demande un certain temps pour être à peu près complète. C’est ce qui arrive chez les grenouilles qui résistent à la température de l’étuve, et aussi chez celles qui réussissent à y vivre un certain temps, plus de 48 heures par exemple. Il est bon de faire remarquer que toutes nos expériences ont été faites avec du charbon asporogène. En opérant avec des spores, M. Trapeznikoff (59) a eu mort avec charbon très longtemps après l’inoculation.

Chez les grenouilles qui meurent le premier ou le deuxième jour, le charbon reste encore en grande quantité dans le sang et les organes. Beaucoup de microbes se trouvent à l’état libre arrêtés par le filtre rénal. Quelques heures avant la mort, lorsque la période d’anesthésie commence, il y a probablement paralysie des leucocytes. Les microbes, étant dans un milieu nutritif favorable à leur température optima, croissent, Et au moment de la mort on a un développement HET du charbon dans les organes.

La condition nécessaire, pour qu’une grenouille meure avec du charbon généralisé dans les organes, est donc que l’heure de la mort suive d'assez près celle de l’inoculation, pour qu’une partie notable des bacilles inoculés ne soit pas encore détruite,

Et cela est vrai, non seulement à 35°, mais aussi à des tem-

pératures plus basses. Suivant leur manière d'opérer, les auteurs ont trouvé que les grenouilles mouraient à telle ou telle température, et avec charbon généralisé *.

Dans une de mes expériences à 20°, une grenouille a été trouvée morte 24 heures après l’inoculation, En faisant l'étude de ses organes, j'ai retrouvé le tableau tracé pour une grenouille morte à l'étuve, avec cette différence que les microbes libres avaient bien moins poussé.

Il faut évidemment expliquer de la même façon les résultats que MM. Klein et Coxwell (25) ont obtenu en narcotisant des grenouilles à la température ordinaire avec un mélange le chloroforme et d’éther. Les grenouilles, narcotisées puis injectées avec d'assez fortes doses de matériel charbonneux viralent, meurent avec charbon généralisé en 3 jours. Là encore, il a dû y avoir paralysie des leucocytes, et le développement du charbon a pu s’opérer.

L'étude des coupes révèle ce fait que la rate paraît jouer un rôle bien moins important que le foie dans la destruction des microbes.

Il m'a paru intéressant de rechercher si la bactéridie éprouve quelques variations dans sa virulence en passant par l’organisme chauffé de la grenouille.

PREMIÈRE ExPÉRIENCE. — (Charbon asporogène très virulent.) À goutte de sang du cœur d’une Rana temporaria morte en 24 heures {ue un cobaye de 325 gr. en 21 heures.

5 à 6 gouttes de sang d’une Rana tlemporaria morte en moins de 24 heures, tuent un cobaye de 410 gr. en 30 heures et demi.

DEuxIÈME ExPÉRIENGE. — (Charbon asporogène tuant 2 cobayes de 600 gr. entre 36 et 40 heures.) 2 cobayes sont inoculés avec le sang d’une grenouille (R. temporaria) sacrifiée 45 heures après l'inoculation.- L’ensemencement

" d’une petité quantité de sang sur gélose nous permet de compter approxi-

mativement le nombre de bacilles inoculés.

Cobaye de 435 gr. reçoit" 5 bacilles, meurt en 60 heures environ. — 635 gr. — 2ou 3 — — 68 heures et demie.

En se rapportant aux nombres donnés par M.-Eubarsh (32) pour la survie des cobayes inoculés avec une bactéridie ou un nombre très faible, on constate que les chiffres ci-dessus ne témoignent d'aucune atténuation de la bactéridie.

1. M. Rohrschneider tue ses ÆRana esculenta à partir de 30° en2 à 3 jours. D’autres tuent les grenouilles à 25° avec charbon généralisé, k

Je peux donc généraliser ce que j'ai dit dans un-<chapitre précédent : La Ilymphe de grenouille n’a de propriétés. atténuantes ni chez l'animal vivant, ni in vitro, ni à 15-209, n1 à 35°.

VI. — Roux DES DIFFÉRENTS ORGANES DE. LA: GRENOULLEE DANS EA RÉACTION. CONTRE LE CHARBON INTRODUIT PAR VOIR INTRAVAS- CULAITRE.

La bibliographie de cette question est courte.

M. Hess (19) injecte 1 c. c. de culture, diluée dans la solution physiologique de sel marin, dans la veine crurale des grenouilles, et recherche, à des temps différents, les bacilles dans le sang et les organes. Au bout de 3 heures, il trouve peu de bacilles dans le sang, la plupart dans les leucocytes. Au bout de de 6 heures, les bacilles libres sont très rares. Il y a hyperleucocytose dans le sang, et un sixième des leucocyÿtes renferment des microbes (tantôt 1, tantôt 15 et plus). 6 ou 8 heures après l'injection, les microbes se trouvent.seulement dans les capillaires du foie (dans les leucocyties et les « pigmentzellen »).

La rate, observée 16 ou 20 heures après l'inoculation, montre quantité de microbes dans les cellules de la pulpe. Dans la moelle des os, il y a peu de microbes, et ils sont presque toujours dans de grosses cellules mononucléaires.

M. Hess observait avec soin la dégénérescence des microbes, et il en concluait que les leucocytes ont un faible pouvoirbac-

téricide, qu'ils ont surtout pour mission de porter les bacilles

au foie et à la rate où sont les phagocytes fixes qui les détruisent.

M. Eubarsh (30), en faisant des injections par la veine ahdominale, confirme les résultats de M. Hess ; il note surtout ce. fait que les bacilles morts sont englobés bien moins spésman que les vivants. ”

Toute autre est la conclusion de M. Voswinikol (60). I constate la disparition des bacilles du sang en 3 héures et leur disparition complète en six jours. Mèmes résultats, quand il injecte, avant le charbon, dans les veines de la grenouille, une solution salée. De ses recherches, il conclut que la phagocytose ne joue aucun rôle dans la destruction des microbes.

Je me suis surtout préoccupé de saisir les premières phases

de la destruction des microbes. Pour cela, je fixais les organes à des temps variables entre 2 minutes et 2 heures après l’injecüon; les premières injectious ont été faites par la veine abdominale qui se rend directement au foie.

L’injection, même faite assez lentement, (3 minutes pour Le. c.), produit un gonflement notable du foie qui cesse environ dix minutes après la fin de l'injection.

Le premier fait qui frappe dans l’examen des organes, c’est que presque tous les bacilles sont arrêtés dans le foie. Le sang est chassé par l'injection, et les microbes sont arrêlés dans les capillaires hépatiques.

Aussi, dans les 2 heures qui suivent l'injection, ne trouvet-on que peu de bacilles dans la rate et le rein; il faut quelquefois parcourir plusieurs coupes de la rate pour rencontrer une bactéridie; et les coupes du rein en montrent une très faible quantité.

Examinons le foie. Trois minutes après l'injection, tous les

pélils vaisseaux sont gorgés de microbes extracellulaires. Il

n’est pas rare, néanmoins, d'observer quelques microbes dans des cellules endothéliales.

= Dix minutes après, le nombre des microbes n’a pas sensiblement diminué; mais il yen aun plus grand nombre dans les cellules endothéliales.

Une demi-heure après, l'axe des vaisseaux est encore rempli de- microbes; leur nombre a néanmoins diminué. De plus, on

observe une leucocytose abondante ; les microbes sont entourés

deleucocytes ; mais la minorité seulement sont englobés ; en forte majorité ils restent libres. L’englobement par les cellules endothéliales du foie est bien plus intense que dans les stades précédents. On observe de nombreuses cellules pigmentaires renfermant des bacilles, généralement en petit nombre.

Deux heures après, les bacilles ne se rencontrent plus guère dans. l’intérieur des vaisseaux; on n’en voit plus qu’un nombre : assez restreint; quelques-uns très rares, libres. La plupart des phagocytes sont des cellules pigmentaires. |

Ainsi, 2 heures après l’inoculation, nous observons une disparition presque complète des microbes du foie, et nous

voyons le rôie important des cellules endothéliales de cet organe.

- Dans tous ces phénomènes, les éosinophiles semblent n’avoir

aucun rôle; ils sont en général très rares, bien plus rares que dans la rate où il ne se passe rien.

L’inoculation par la veine abdominale a un double inconvénient; elle chasse pour un temps le sang du foie et les microbes sont arrêtés dans cet organe. Aussi j'ai fait également des injections par la crosse aortique. Le bacille du charbon se trouve alors distribué également dans toutes les parties du corps.

De toutes les préparations examinées, je conclus que :

4° Le foie a un rôle important dans la destruction des microbes.

Huit minutes après l'injection, on y trouve un petit nombre de microbes. Plus de la moitié de ces microbes sont intracellulaires ; mais une bonne partie des phacocytes sont des cellules endothéliales ; les microbes contenus dans ces cellules sont toujours en petit nombre. Il n'y a déjà plus de microbes dans les gros vaisseaux. Les éosinophiles peuvent déjà manifester leurs propriétés phagocytaires. Mais leur petit nombre indique qu’ils ne doivent avoir aucun rôle à jouer avant l’englobement des microbes par les microphages ordinaires ou par les macrophages. |

A mesure quele moment de l’inoculation s’éloigne, le nombre des microbes libres dans le foie diminue. Déjà 20 minutes après, on n’en observe que rarement d’extracellulaires. Ils sont en minorité dans les leucocytes, en majorité dans les cellules pigmentaires. Mais il y a encore quelques microbes libres 1 heure après l'injection.

L'englobement ne va donc pas aussi vite que chez les animaux à sang chaud ‘. Cela tient évidemment à ce que les propriétés chimiotactiques des leucocytes . de la grenouille sont, comme l’a montré M. Gabritchewsky (13), bien moins puissantes que celles des globules blancs du lapin;

2° Les coupes de rates, fixées 20 minutes ou 4 heure après l'injection, montrent très rarement des bacilles. En revanche, elles renferment des quantités d’éosinophiles ;

3° La moelle des os, prise une heure après l'injection, montre quelques microbes très rarement libres. Dans une coupe transversale de moelle de fémur, on compte en moyenne 2 microbes ;

1. Voir le travail de M. Werigo (63), et celui de MM. Kanthack et Hardy (24).

4° Enfin, il paraît y avoir dans le rein une sorte de rendezvous de leucocytes chargés de microbes.

C'est dans la coupe d’un rein fixé 20 minutes après l’injection que nous avons observé les exemples les plus nets et les plus indiscutables de leucocytes éosinophiles renfermant des microbes à leur intérieur. Les figures 10 et 11 représentent deux de ces éosinophiles phagocytes. Dans ce rein, la moitié des phagocytes étaient des cellules à granulations.

Le premier fait à retenir de cette étude, c’est que la destruction des microbes daas le sang, ou mieux leur englobement par les phagocytes se fait très rapidement après leur entrée dans les vaisseaux.

Il a lieu incomparablement plus vite que dans le sac dorsai.

Cette constatation permet de répondre à une objection formulée par M. Klein (26) contre la théorie de la phagocytose. 1l inocule des grenouilles dans le sac lymphatique dorsal, et il recherche les bacilles dans le sang et la rate depuis 10 minutes jusqu'à 24 heures après l’inoculation. Il constate ainsi que beaucoup de microbes disparaissent du sang dans les deux premières heures. Or, dit-il, la phagocytose n’a pu intervenir, puisqu'elle ne se manifeste jamais au point d'inoculation dans les trois premières heures. Mes expériences prouvent qu’elle se manifeste plus vite dans le sang, et les microbes que M. Klein ne retrouve plus ont dù disparaître par ce processus.

Un deuxième fait sur lequel j'appelle l'attention, et qui ressort non seulement de ces expériences d’injections intraveineuses, maisencore de celles sur les grenouilles à 35°, c’est le faible rôle de la rate dans la destruction des microbes.

Enfin, j'ai vu le rôle important des « pigmentzellen » dans la destruction des microbes injectés dans les vaisseaux. Ce rôle est bien moins grand quand les microbes sont inoculés dans le sac dorsal. Cela tient évidemment à ce que la plupart des leuco-

cytes que l’on observe dans les coupes du foie, ont pris leurs - microbes au point d’inoculation.

NII. — CONTRIBUTION A LA CONNAISSANCE DES ÉOSINOPHILES .

À Origine. — L'origine des cellules éosinophiles est encore

bien obscure. M. Ehrlich (10) prétend qu'elles naissent dans la 4 +

LE

* philes irrégulières.

moelle des os. Chez la grenouille. -elles sont en effet particulièrement développées dans ces organes ; mais elles n’y sont pas plus nombreuses que dans la rate. En tout cas, il faut leur chercher une autre origine chez la raie, qui contient de nombreux éosinophiles et n’a pas de moelle des os.

Beaucoup d’auteurs tendent d’ailleurs à admettre que souvent elles dérivent de leucocytes polynucléaires à protoplasme hyalin. MM. Massart, Demoor.et Mle Everard (37), chez le cobaye et le lapin, ont montré tous les passages.

Et ainsi une autre question se pose : celle de savoir comment naissent les granulations.

Sont-elles un produit d'activité secrétoire de la cellule, comme le veut M. Éhrlich, ou bien ont-elles une origine extra-

cellulaire ?

Un certain nombre de faits nous semblent militer en faveur

de cette seconde hypothèse.

M. Teitenhamer (58) a observé, chez des salimandres dont les testicules étaient en voie de dégénérescence, que « par la dégénérescence des noyaux des spermatocytes, ilse forme, aux dépens de la chromatine, une substance acidophile. » Et de l'observalion minutieuse des rapports entre cette substance acidophile et les leucocytes, il croit pouvoir conclure qu’elle pénètre à l’intérieur des globules blancs par phagocytose et y constitue des granulations &.

M. Tettenhamer note également que, dans les organes lymphoïques du cobaye, il a vu beaucoup de noyaux en dégé-

- nérescence et, dans ces Haas de la substance aeido-

phile. PIPIST MM. Hardy et Lem Boon Keng (18), étudiant la réaction

de la grenouille injectée avec du curare, remarquent qu’au second stade de la réaction, des globules rouges sont englobés par les leucocytes, et que ces débris de globules prennent l'éosine ; ils constituent ainsi dans les leucocytes des masses éosino-

M. Metchnikoff (4 et 46), chez des cobayes vaccinés contre le choléra, à qui il injecte des vibrions, a vu certains de ces vibrions se colorer-en rose vif par l'éosine, au lieu de prendre la teinte bleue de méthylène. Il a également vu des granulations

rangées de façon à rappeler exactement la forme d’un vibrion.

Cestévidemment là le {stade de l’émiettement d'un vibrion « éosinophilisé ».

Dans mes recherches sur le mode de résistance des Lacerta viridis à la bactéridie charbonneuse, j'ai constaté avec la plus grande netteté la transformation des microbes en granulations éosinophiles. Chez un lézard injecté sous la peau du cou, j'ai vu que, 24 heures après l’inoculation, la plus grande partie des microbes sont intracellulaires.

Parmi ces microbes, il en est à peine la moitié qui prennent la coloration bleue; on trouve toutes les gammes entre le bleu et le rouge. On saisit donc tous les stades de la transformation en PRO de nos microbes.

La teinte violette indique que le microbe se colore à la fois par le bleu de méthylène et par l’éosine ; il passe par le stade amphophile

” Dans les préparations colorées uniquement par l’éosine, une petite quantilé de microbes sont colorés en rouge aussi foncé que les granulations « typiques; d’autres sont colorés en rose pâle : ce sont probablement des microbes qui prennent la teinte violette dans le cas d’une double coloration.

Dans l’exsudat du même lézard, 52 heures après l’inoculation, il n'existait plus guère que des microbes rose violacé et rouge franc.

Le stade d'émiettement du microbe est assez rare à observer. Cette transformation des microbes peut se produire assez vite. J'ai trouvé bon nombre de microbes ainsi transformés dans l'exsudat d’un lézard, 5 heures après l'injection dans le péritoine.

Malgré des observations répétées, je n’ai jamais constaté de phénomène semblable dans la destruction de la bactéridie par la grenouille.

La conclusion s'impose donc : dans un certain nombre de cas bien observés, les granulalions éosinophiles proviennent de l’englobement par les phagocytes de matériaux Péégentant déjà

‘ou non la réaction acidophile.

B. Nature et rôle des granulations, — Les opinions les plus diverses ont été émises sur la nature de ces granulations. Les anciens auteurs les considéraient, les uns comme des globules . graisseux, les autres comme formés d'hémoglobine.

Des travaux de MM. J. Weiss (62), Lüvit (29), Seisweïlo, il

résulte que ces granules manifestent les réactions des matières albuminoïdes et en particulier des globulines.

MM. J. Weiss et Metchnikoff (43) ont d’ailleurs montré que les cristalloïdes des grains d’aleurone qui existent souvent dans les réserves végétales, prennent la couleur de l’éosine; ilenest de même des granulations vitellines, d’après M. Ehrlich.

De ces analogies, il semble qu'on puisse conclure que les granulations éosinophiles sont des matières de réserve.

M. R. Heidenhain (19) a noté la diminution des cellules à granulalions après des périodes de jeûne. Mais les preuves directes qu’on a bien affaire à des cellules de réserve ne sont pas encore suffisantes. Les anciennes opinions émises sur le rôle des granulations éosinophiles sont d’ailleurs abandonnées maintenant. M. Cuénot (5 et 6), en 1891, voulait voir, dans ces granules, le ferment albuminogène qui transforme les peptones du sang en albumine ; et il regardait le globule blanc sans granules comme le terme de l’évolution de la cellule à granules.

En 1893, au contraire, M. Cuénot considère la cellule éosinophile de l'écrevisse comme le terme final de l'évolution du globule sanguin. Dans sa revue des’ opinions émises sur le rôle des granulations «, il ne cite plus que pour mémoire, et sans y insister autrement, son ancienne opinion.

Tout ce que nous savons maintenant nous permet de rejeter a posteriori le rôle bactéricide que veulent leur donner MM. Kanthack et Hardy.

Je puis résumer en deux propositions les faits que j'ai observés à ce sujet chez la grenouille:

1° Dès que la leucocytose commence dans le sac lymphatique dorsal, (et quelquefois elle se manifeste une heure après l’inoculation), les leucocytes hyalins englobent des microbes;

2° Dans les injections intravasculaires, et ceci est surtout net

dans les injections par le cœur, la phagocytose des leucocytes et

des macrophages fixes commence moins de 10 minutes après l’inoculation.

Dans les deux cas, il est difficile d'admettre que les microbes englobés aient déjà pu subir l’action des éosinophiles.

C. Propriétés des cellules à granulations « . — J’ai montré que

4. W. Oxiwrseuirz (Arch. f. exp. Path., 31, 1893) note au contraire une légère »

augmentation quand le jeûne se prolonge.

dans un certain nombre de cas, c’est en manifestant des propriétés phagocytaires que les cellules se chargent de granules éosinophiles. Les cellules remplies de ces granulations ont-elles encore gardé quelques traces de leurs propriétés phagocytaires ?

Ces propriétés sont au nombre de trois :

1° Chimiotaxie positive exercée par certaines substances :

2° Ingestion des microbes ou des matières étrangères ;

3° Digestion de ces matières.

1° Parmi les nombreux savants qui se sont occupés des variations dans la proportion des globules blancs du sang, concomitantes à certaines affections de l’organisme humain, un certain nombre se sont préoccupés des RTÈRSS dans le

nombre relatif des éosinophiles. :

De ces travaux, pour la bibliographie desquels nous renvoyons au mémoire de M. Zappert (64) et à la revue critique de M. Metchnikoff (45), il ressort que les leucocytoses éosinophiles sont rares; dans la plupart des cas de leucocytoses intenses, quand la proportion relative des phagocytes typiques augmente considérablement, celle des acidophiles varie peu.

Les éosinophiles manifestent donc une chimiotaxie moindre que les leucocytes hyalins. MM. Massart, Demoor et Mie Eve-, rard (37) arrivent aux mêmes conclusions chez le cobaye et le

lapin.

+ Les éosinophiles de la grenouille sont-ils doués de chimiotaxie positive? MM. Kanthack et Hardy l’affirment et ils prétendent même que, dans les premiers temps qui suivent l’inoculation, il y a uniquement leucocytose éosinophile.

Chez les nombreuses grenouilles que j'ai inoculées dans le sac dorsal, j’ai souvent compté le nombre des éosinophiles, et cela de 2 à 6 heures après l’inoculation, c’est-à-dire depuis le commencement de la leucocytose jusqu'après son maximum, et j'ai toujours trouvé la même proportion de ces cellules.

C’est seulement lorsque la phagocytose est déjà très avancée que la proportion des éosinophiles diminue. Dans la première période, cette proportion est variable avec les individus.

Pour les Rana temporaria, elle est en général comprise entre 10 et 25 0/0. Mais elle peut dépasser ce chiffre. Dans un lot de grenouilles recueillies aux environs de Paris à la fin du mois de mai 1894, elle était supérieure à. 50 0/0; quelques-unes même

présentaient au point d'inoculation 80 éosinophiles contre 20 leucocytes hyalins. Chez les Rana esculenta, la proportion est bien é moindre; souvent elle n’atteint pas 4 0/0 ; elle dépasse rarement 10 0/0.

Quoique je n’aie pas fait d'observation attentive sur ce point, j'ai gardé cette impression que la proportion des éosinophiles ne diminue pas pendant l'été.

Examinons maintenant les variations de cette proportion avec

letempsqui suitl’inoculation et avecl’endroit de cetteinoculation. 7. J’ai injecté des grenouilles à la fois dans le sac lymphatique dorsal et dans la chambre antérieure de l'œil. En ce second point, il n’y a pas normalement de leucocytes, et ces cellules ont une certaine difficulté à arriver. M. Metchnikoff a montré que la leucocytose ne commençait que 18 à 24 heures après l’inoculation. Auparavant, si la température n’est-pas trop basse, il y a croissance des bactéridies. J’ai également constaté ces faits : % ” PROPORTION DES ÉOSINOPHILES Inoculation du 31 mai à 2 heures du soir.

‘ “$: > À - PRISES DE LYMPHE A SAC DORSAL GFIT, Ce. sy Es ou e - . à à Grenoune 1. — (R. temporaria.) 4 341:mai,u6.heures."...#,:12.. Se 76 0/0 :

AS TUNR POUREUTES en ee es 42 0/0 85 0/0 AU 6 NEUPES 2 RS net . 20 à 25 0/0 6 à 70/0 GRENOUILLE IT. — (R. temporaria.) EMA OC hOUrTÉS 2 ARE ES 67 0/0 : — Ar juin, 3 heures... ,......," RUES 40 0/0 44 0/0 2 juin, 6 heures... . HODE RE EU 25 0/0 29 0/0 . GRENOUILLE HT. — (R. esculenta.) 31 mai: 6 heurês pr 44 0/0 1% juin#2 Heures... 7... + à PAR IOES e 2 0/0. 2 AT d HBUTES As fr sed — 2 0/06 Il est ie que les nombres pour l'œil doivent être LOIRE aux nombres de la veille pour le sac dorsal , puisque les leucocytes > RE

mettent environ 1 ie pénétrer dans la chape antérieure de l'œil.

La proportion des éosinophiles est donc notablement moindre les jours qui suivent celui de l’inoculation; j'ai bien à ce sujet une trentaine d'observations toutes concordantes:; les expériences citées donnent une idée de la diminution relative des éosinophiles. Il y a également proportion moindre quand on observe le phénomène dans la chambre antérieure de l'œil.

Ilkm'a semblé que ces faits pouvaient s'expliquer en admettant que les éosinophiles ont un pouvoir chimiotactique moindre que les phagocytes ordinaires. La substance attirante au point d’inoculation diminue en effet à mesure que le moment de l’inoculation s'éloigne. Et, dans la chambre antérieure de l'œil, cette substance est en moins grande quantité que dans le sac dorsal; de plus, la difficulté de pénétration des leucocytes doit être un obstacle à la manifestation de leurs propriétés chimiotactiques.

Pour vérifier l'exactitude de cette hypothèse, j’ai cherché si la proportion des éosinophiles attirés dans le sac dorsal varie :

1° Avec la quantité de virus charbonneux inoculée;

2° Avec sa qualité.

Pour chaque série, on opérait avec deux 2 lots de grenouillese chaque lot recevait :

41e SÉRIE 4er LOT lle LOT D'abord. 1 goutte de charbon. 1/2 em. cube.

-40 jours après. 4/2 em. cube. - À goutte.

Ile SÉRIE ter LOT Ile LOT D'abord. 1/2 cm. cube. 1e vaccin. 1/2 cm. cube charbon virulent. 12 jours après. Charbon virulent. der vaccin. ;

Les expériences étant disposées de cette façon, les variations dans le nombre des éosinopliles dues soit à l'influence du jeûne, soit à celle d’une première inoculation, soit à toute autre cause, se trouvent annulées.

Avec les 10 grenouilles qui ont servi à ces expériences, j'ai obtenu 8 résultats conformes à mon hypothèse; dans 2 cas, le nombre des éosinophiles n’a pas varié. Je crois donc, de cet ensemble de faits, pouvoir conclure que les éosinophiles de la grenouille ont un pouvoir chimiotaclique très net, mais moindre que.celui des leucocytes à protoplasme hyalin.

Le pouvoir chimiotactique des leucocytes du lézard est également considérable. Sur des lézards expérimentés en septembre

et octobre 1894, j'ai compté en moyenne 80 0/0 d’éosinophiles au point d'inoculation. Chez un individu, ce nombre a même atteint 90 0/0. — Chez un autre, il n’a été que de 50 0/0.

Chez les reptiles, les éosinophiles sont d’ailleurs très nombreux dans le sang. M. Saint-Hilaire l’a déjà constaté chez la couleuvre.

20 Les éosinophiles ingèrent des microbes. — J'ai déjà dans les paragraphes précédents, noté le fait chez la grenouille.

Il suffira de le rappeler ici, en répondant à deux objections possibles. MM. Kanthack et Hardy disent n’avoir jamais vu de microbes dans les éosinophiles de grenouille. — Ils insistent sur ce fait que souvent les microbes sont collés à la surface des éosinophiles, et qu’à un examen superficiel, on peut croire qu'ils sont à leur intérieur.

J'ai moi-même été frappé de ce fait que souvent les microbes sont à côté des éosinophiles, et non dedans. Mon interprétation diffère de celle des savants anglais. Pour moi, grâce à ses propriétés chimiotactiques, le leucocyte s’est approché du microbe; il n’a pu l’englober, déjà rempli qu’il est de matières nutritives. Mais il est des cas où l’ingestion a lieu. Je l’ai maintes fois observé dans l’exsudat lymphatique dorsal ; et j'ai cité le cas. d'une grenouille inoculée par le bulbe aortique, où le phénomène était d’une grande fréquence dans le foie, et surtout le rein.

MM. Hardy et Lem Boon Keng notent qu'au second stade de la réaction des grenouilles contre le curare et le charbon, beaucoup de leucocytes à protoplasme hyalin englobent des éosinophiles, se les assimilent peu à peu et finalement prennent tout à fait l'apparence d’un éosinophile typique. Et pourtant, disent les auteurs, ces cellules conservent leurs propriétés phagocytaires.

Il me semble que les leucocytes hyalins parvenus à cet état sont de véritables éosinophiles, et que le fait qu'ils absorbent des matières étrangères plaide en faveur de l’idée que je soutiens.

Mais les éosinophiles dont j'ai constaté le pouvoir phagocytaire, sont probablement des éosinophiles de plus ancienne date que ceux de MM. Hardy et Lem Boon Keng. Je les ai en éffet observés dès les premiers temps de la phagocylose dans le

La \

sac dorsal, et 8 minutes après l'injection par le bulbe aortique, dans le foie:les phénomènes pathologiques décritspar MM.Hardy et Lem Boon Keng n'avaient pas encore pu se produire. D'ailleurs, l'observation du noyau montrait qu’on avait affaire à une cellule unique.

Cette propriété des éosinophiles est, je l’ai dit, peu accusée. On doit la considérer comme un reste des propriétés phagocytaires des cellules qui ont mis en réserve les granulations acidophiles.

Les éosinophiles du lézard ont aussi le pouvoir d’englober

-des microbes. (fig. 22). Et bien que j'aie fait à ce sujet peu

d'observations, je crois que ces cellules jouissent, à ce point

- de vue, des mêmes propriétés que celles de grenouille.

3° Les cellules éosinophiles digèrent-elles les microbes ? — On s’accorde à reconnaître qu’il est bien difficile d'observer avec certitude les stades de digestion des microbes à l’intérieur des phagocytes. Cette difficulté se complique, chez les éosinophiles, de ce que ces granulations, masquent en partie les microbes englobés. |

Je n’ai rien observé, à ce point de vue, chez la grenouille.

-Chez le lézard, j'ai vu des microbes, indubitablement absorbés

par des cellules à granulations, montrer del’affinité pour l’éosine

(fig. 23).

C’est là une preuve qu’une transformation des microbes à lieu à l’intérieur des éosinophiles. La digestion peut-elle être complète ? C’est ce qu'il nous est impossible de dire.

— En résumé, je crois que les éosinophiles sont d’anciens

phagocytes, bourrés de matières de réserve, et qui possèdent

encore quelques restes de leurs propriétés phagocytaires.

La différence la plus importante entre les éosinophiles et les pseudo-éosinophiles tombe donc. — Il est probable que ces deux sortes de granulations représentent 2 stades de l’évolution ou de la transformation d’une même matière albuminoïde. C’est d’ailleurs à cette conclusion que tendent les recherches. de MM. Ehrlich et Schwarze (pour M. Ehrlich, ces granulations ne diffèrent chimiquement que par la teneur en eau); et aussi celles de MM. Massart, Demoor et Mie Everard, et de M. Cantacuzène,

qui, chez le lapin et le cobaye, trouvent tous les passages

entre ces deux sortes de granulations.

LE à

Chez l'homme, où les éosinophiles existent avec les neutrophiles, MM. Max Schultze, Ehrlich, H.-F. Müller, Maragliano et Zappert ! ont observé également tous les passages entre ces deux sortes de cellules.

Les cellules à granulations , 6 et e d'Ehrlich ne diffèrent donc que par des détails secondaires ; MM. Kantack el Hardy proposent, avec raison, de réunir ces trois sortes de granulations sous le nom de granules oxyphiles ; et je crois, avec beaucoup de mesdevanciers, que les granulations éosinophiles représentent le stade ultime de ces sortes de corps.