Dosage de l’urobiline

1° Dosage en poids de l’urobiline.

Le type de cette méthode nous est fourni par le procédé d’Hoppe-Seyler dont voici la technique résumée : on prend un volume déterminé d'urine, qu’on acidifie avec de l’acide sulfurique ou acétique : on sature ensuite avec du sulfate d'ammoniaque. Dès que le liquide s’est reposé pendant quelques heures, toute l’urobiline se dépose en flocons roses qu'on recueille sur un filtre. On lave avec une solution saturée de parties égales de chloroforme et d’alcool. Le mélange est traité plusieurs fois de suite par de l’eau dans un entonnoir à robinet. Enfin dans un becherglass, préalablement pesé, on évapore le chloroforme au bain-marie. Le résidu desséché est extrait avec de l’éther.

On filtre la solution éthérée d’urobiline; on laisse évaporer, on traite à nouveau par l'alcool qu'on évapore; le résidu desséché est pesé.

C'est là sans conteste un procédé très rigoureux, bien que le résidu total renferme bien autre chose que la seule urobiline. De plus il faut se trouver en présence d’une urine renfermant des proportions notables d’urobiline.

Mais surtout c’est un procédé long, délicat, et qui exige une grande habitude des manipulations chimiques, et aussi des connaissances spéciales, qui sont plus du domaine du chimiste que de celui du médecin. En pratique du reste, on ne s’en sert jamais et on le réserve en général pour des épreuves de contrôle.

2° Dosage de l’urobiline par l'examen spectroscopique ou colorimétrique.

La recherche de l’urobiline dans l’urine peut être faite par l’examen direct au spectroscope et si on examine l’urine dans des tubes plus ou moins profonds ou plus ou moins larges, on peut apprécier approæimativement la quantité d’urobiline contenue dans l'urine. C'est là le principe général, qui a servi de base àtoutes les méthodes de dosage, établies sur l'apparition au spectroscope de la bande caractéristique de l’urobiline.

Mais pour une analyse exacte, il faut un procédé plus rigoureux.

On s’est donc proposé de résoudre le problème suivant : à quelle épaisseur peut-on observer nettement le phénomène de la bande caractéristique ? Et alors on déduira la quantité d’urobiline à l’aide de tables établies d'avance. — C’est croyons-nous, Vierordt, qui le premier s’est servi de cette méthode pour doser de l’urobiline.

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Pour apprécier l'épaisseur de l'urine à laquelle s'observe nettement le phénomène de la bande unique, caractéristique de l’urobiline, Hénocque se sert d'une éprouvette graduée à fond bien plat ou d’un godet gradué placé sur un miroir incliné, puis d’une indigotière ou vase prismatique à faces bien planes, portant une graduation correspondant à une échelle construite empiriquement. Cet appareil donne des épaisseurs graduellement progressives.

On désigne sous le nom de « spectroscopes pour l’observaiion de l'urine sous des épaisseurs variables » des appareils plus compliqués, dans lesquels les mouvements sont exécutés mécaniquement, ce qui rend les mensurations de l'épaisseur plus faciles à déterminer exactement. Ils ont un autre avantage, c’est que l’on peut faire varier l’épaisseur dans les deux sens, en plus ou en moins, sans ajouter ni retrancher de liquide. Moütessier à fait construire par Hoffmann un appareil de ce principe. Yron, quelques années plus tard, a imaginé et fait réaliser par Duboscq, « un Spectomètre à épaisseur variable » un spectomètre à disposition analogue à celle du précédent appareil. Avec l'instrument d’Yvon on peut examiner l’urine à des épaisseurs variant entre Ô et 70 m.m.

Cette épaisseur est insuffisante dans la plupart des cas pour l'urine. Aussi Hénocque a-t-il fait construire en 1890 un dispositif, qui permet d’examiner une plus grande épaisseur de liquide (de 1 à 10 cent.). C'est « l’urospectroscope ».

Enfin, plus récemment en 1896, un chimiste, M. Gautrelet, a dénommé « urobilinomètre ou pigmentomètre » un spectroscope à épaisseur variable, gradué de telle facon - qu’il suffit de lire sur un disque horizontal divisé, pour

avoir immédiatement la quantité d’urobiline par litre, du moins en théorie.

Hénocque, dont les travaux en spectroscopie, font autorité, déclare que « malheureusement tous ces procédés sont passibles des mêmes objections; ils peuvent être employés avec utilité entre des mains exercées, pour J’urobiline en solutions, mais ils ne donnent pas des indications rigoureuses pour l'urine où les phénomènes sont bien moins nets et où ils sont souvent obscurcis par la présence de divers pigments ». Tout ce que l’on peut en attendre, c’est l'indication générale qu’une urine contient peu où beaucoup d’urobiline. |

Les mêmes reproches s'adressent à un procédé récent décrit par Auché, sous le nom de méthode de dosage de l'urobiline par les spectres superposés. Tout en reconnaissant son ingéniosité, nous ne nous attarderons pas à décrire cette méthode, car les résultats auxquels elle conduit ne sont pas des dosages exacts, mais seulement des approximations bien relatives.

Les mêmes critiques s'appliquent au dosage par le spectre minimum de Deroide.

On peut rapprocher de ces procédés spectroscopiques, la méthode, imaginée par Viglezio, méthodecomplexe quidose l’'urobiline d’une part, par la constatation au spectroscope de la raie de l’urobiline, d'autre part, par l'apparition de la fluorescencedans un réactif approprié ammoniaco-zincique. C’est un procédé d’une exécution très délicate, entaché de toutes les causes d'erreur inhérentes aux méthodes spectroscopiques. De plus un autre défaut très important réside dans la méthode d'extraction de l’urobiline, défectueuse en principe et qui exige en outre des manipulations complexes, au cours desquelles, il est inévitable qu'une partie de l’urobiline extraite ne soit perdue.

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Quant aux dosages, par les procédés colorimétriques, ils sont encore moins recommandables. Le type peut en être fourni par la méthode de Studenski, dont voici le principe d’après Hénocque. A 20 centimètres cubes d'urine, on ajoute 2 centimètres cubes de la solution de sulfate de cuivre saturée à froid, puis du sulfate d’ammoniaque cristallisé jusqu’à saturation, enfin 10 centimètres cubes de chléroforme; on agite quelques minutes, le chloroforme se colore en rouge ; on le sépare.

Par comparaisons avec des solutions graduées d'avance, on peut juger d'après l'intensité de la coloration de là proportion d’urobiline.

La solution chloroformique contient d’abord des substances colorantes autres que l’urobiline ; de plus limpossibilité de conserver des solutions titrées d’urobiline sont autant de raison pour rejetter une telle méthode, qui ne peut prétendre en tout cas qu’à des résultats bien approximatifs.

M. Denigès a décrit un procédé voisin qui, s’il n'est pas passible du premier reproche, puisque à l’aide d’un réactif spécial mercurique, il isole l’urobiline des autres pigments, est passible du second. Il se sert en effet de solutions aqueuses d’urobiline pure que l’on ne peut conserver. De plus le dosage spectrophotométrique qu’il préconise fait intervenir dans l'appréciation des couleurs à l'échelle colorimétrique un coefficient personnel beaucoup trop important pour que lés résultats de plusieurs observations puissent, non seulement avoir une valeur absolue, mais même être comparés entre eux.

3° Dosage chimique de l'urobiline.

Procédé de Bogomolow. — Cet auteur considère lurobiline comme un acide faible, qui serait le dernier à se sa-

turer dans l’alcalinisation générale (?). Il neutralise donc un certain volume d'urine et reconnait que l'urobiline n'est pas encore saturée, à la présence de son spectre acide et à la teinte verte que produisent quelques gouttes de sulfate de cuivre au millième. Il ajoute alors une solution titrée et étendue de soude jusqu’à ce qu'il obtienne, à la fois, le spectre alcalin, la fluorescence verte et une couleur rouge par addition de sulfate de cuivre. La quantité de solution titrée de soude qu'il a dû ajouter donne celle de l’urobiline.

Nous ne nous attarderons pas à critiquer une pareille théorie purement hypothétique et ne reposant sur aucune base scientifique sérieuse.