RÉSULTATS ET CALCUL DU TITRE DU SÉRUM

— Le tube témoin de la dilution du complément à 1/r contenant 1 unité bo 0/0 (soit 0,02 em° de complément à 1/r où 1,5 em° de complément à 1/rx 3b) doit présenter environ 50 0/0 d’hémolyse (entre 45 et 55 en tenant compte du fait que le coefficient d'erreur est de l’ordre de 10 o/o), sinon il faut recommencer la réaction en ayant soin de retirer le complément au préalable.

— Si le sérum ne contient pas de réagine syphilitique, le complément n'a pas été fixé et le pourcentage d'hémolyse est le même dans le premier tube réaction et dans le tube témoin-sérum. Les quatre autres tubes « réaction » sont parfaitement hémolysés.

— Si le sérum contient de la réagine, le complément a été fixé en quantité correspondante : on constate que les premiers tubes ne sont pas hémolysés alors que l’hémolyse est totale ou presque dans les derniers. En sénéral, entre ces extrêmes un tube ou deux présentent une hémolyse partielle : l’ensemble de ces 5 tubes contenant des doses croissantes de complément réalise ainsi un véritable titrage du complément en présence de ‘sérum et d’antigène et après un temps de fixation de 6 heures. On sait que la courbe représentative des variations du pourcentage d’hémolyse en fonction de l’augmentation du volume de complément employé est une courbe de Gauss, comme nous l’avons vu en parlant du titrage du complément à 50 o/o d'hémolyse. Sur un papier millimétré on porte, en abscisse, les volumes du complément à 1/r utilisés dans chacun des cinq tubes de la réaction et en ordonnée les pourcentages d’hémolyse correspondants. Les points ainsi construits peuvent être reliés graphiquement par une courbe en forme de S. L’abscisse du point de cette courbe d’ordonnée 50 représente le volume de complément à 1/r qui en présence de 0,05 em* de sérum et de l’antigène à la dose optima, permit l’hémolyse de 5o 0/0 des

: pere Sr Le globules rouges. Soit x cm° ce volume, qui équivaut à 553 unités 50 o/o ; + 2

de complément puisque 1 unité 5o o/o=0,02 em* de complément à 1/r (x em° de complément à 1/r=5o unités bo 0/0). Le nombre d'unités 50 0/0

ROULIER à

jixées par 0,05 em” de sérum en présence d’antigène dans le premier temps

de la réaction est donc :

TL ; re 7 r "= 1 (l'unité retranchée représentant la quan-

tité de complément libre qui a servi à Fhémolyse dans le deuxième temps

de la réaction). Le litre du sérum est donc de ra (Remarque).

Permetllant de calculer directement le titre d’un sérum (nombre d'unités

50 0/0 de complément fixées) soumis à la réaclion quantitative décrite

dans le lableau 6.

Numéro des tubes « réaction »

1 | 2 | 3 4 100 0 4 9 14 19 É 90 0 4,5 9,5 14,5 19,9 Es se 80 0 5 10 15 20 ; à 70 0,5 DES 10,9 15,9 20,5 D En LS Lo = 60 I 6 II 16 21 [=| E ea T 2 50 10 6,5 11,5 16,5 21,5 AE © $ È 40 3 7 12 17 22 Le vd tn £ 30 2,5 7,0 12,5 17,9 22,5 VU ÔO a 3 20 £ 3 8 13 18 23 10 3,5 8,5 13,5 18.5 53,5 le En ee un nn à] Remarque. — Il existe plusieurs manières d'exprimer le titre d’un sérum en fonc-

tion du nombre d'unités 50 o/o de complément fixé [34] et Thompson à étudié

l'aspect mathématique de ce problème [35].

Nous avons établi expérimentalement d’après ces données un tableau (tableau n° 7) permettant de calculer directement et avec une approximation suffisante le titre du sérum connaissant le pourcentage d’hémolyse compris entre 10 et go d’un seul tube de la réaction. Si deux tubes consécutifs présentent un pourcentage d'hémolyse compris entre o et 100, le ütre du sérum sera la moyenne arithmétique entre les deux résultats ainsi trouvés.

Par exemple : si les pourcentages d’hémolyse observés dans chacun des cinq tubes « réaction » sont, dans l’ordre : 6, 0, 0, 4o, 100, le titre du sérum est calculé d’après le pourcentage d'hémolyse du tube partiellement hémolysé, c'est-à-dire le 4° tube présentant 40 0/0 d’hémolyse : le titre du sérum est 17, chiffre trouvé dans le tableau à double entrée n° 7. Si les pourcentages d'hémolyse sont respectivement 6, 0, 30, 90, 100, le titre du sérum calculé d’après le 3° tube serait 12,5 ; calculé d’après le 4° tube il serait 14,5. On prend pour titre du sérum la moyenne de ces deux chiffres, soit 13,5. Le calcul du titre du sérum ne doit se faire que d’après le pourcentage d'hémolyse des seuls tubes partiellement hémolysés. Mais, si on se trouve en présence d'une réaction où les pourcentages d’hémolyse dans les cinq tubes « réaction » sont respectivement 0, 0, 100, 100, 100, le caleul du titre se fait exceptionnellement d’après le premier tube où l'hémolyse est totale : soit ici le 3° tube : le titre du sérum est 9.

— Le tube témoin du pouvoir anticomplémentaire du sérum doit présenter au moins 80 0/0 d'hémolyse. S'il présente un pourcentage d’hémolyse inférieur, c'est que le sérum est anticomplémentaire et fixe spontanément une certaine quantité de complément : il faut alors corriger le titre du sérum du nombre d'unités de complément fixées par le sérum seul : ce nombre est trouvé dans la colonne n° 1 du tableau précédent en regard du pourcentage d’hémolyse atteint dans ce tube témoin-sérum (Il est exceptionnel de trouver des sérums non altérés fixant spontanément plus de 4 unités de complément).

— Si le 5° tube « réaction » lui-même ne présente aucune trace d’hémolyse, c’est que le sérum titre plus de 23,5. I1 faut recommencer la réaction avec 0,0 em° d’une solution au 1/10 de ce sérum dans l’eau physiologique. Les résultats seront alors multipliés par 10, pour avoir le titre du sérum.

— La réaction quantitative ainsi réalisée est d’une très grande sensibilité, la moindre variation du taux de réagine dans un sérum se traduisant

par une variation parallèle du nombre d'unités bo 0/0 de complément fixées.