ANIMAUX

L — L'injection de cultures de Vibrion et de selles cholériques restant sans action sur les animaux, Nicati et Riestch pensèrent à pratiquer directement l'inoculation dans l'intestin et injectèrent les cultures dans le duodénum du cobaye, après laparotomie ; les premiers ils obtinrent un choléra intestinal expérimental.

II. — Koch arrive aux mêmes résultats par le procédé suivant : il place une sonde dans l'œsophage du cobaye et injecte dans l'estomac quelques centimètres cubes d'une solution de carbonate de soude à 2 p. 100 ; quelques minutes après il injecte clans l'estomac la culture de Vibrion et dans le péritoine ou sous la peau 1 à lcc,5 de teinture d'opium. Les animaux tombent bientôt en somnolence, puis reviennent à l'état normal au bout d'une à deux heures; vers la douzième heure qui suit l'inoculation le collapsus s'établit, des selles diarrhéiques se produisent, la température s'abaisse progressivement et la mort survient après un à trois jours. A l'autopsie, l'intestin grêle est distendu, congestionné ; il contient un liquide aqueux présentant des flocons crémeux et renfermant une culture à peu près pure de Vibrions; les coupes de l'intestin montrent que les Vibrions en ont pénétré les parois.

Doyen a modifié légèrement le procédé de Koch ; il substitue à la teinture d'opium de l'alcool à 40°, à la dose de lcc,6 à lcc,8 par 100 grammes du poids de l'animal, et obtient les mêmes résultats qu'avec la teinture d'opium : c'est donc l'alcool qui agit dans cette teinture.

III. — Zabolotny a montré que le spermophile est très sensible à l'ingestion du Vibrion cholérique. Quand on nourrit des spermophiles avec des aliments arrosés de quelques gouttes d'une culture pure de Vibrion, la moitié des animaux ainsi traités prennent le choléra et meurent, les autres résistent. La mortalité est plus grande si on mêle un sel alcalin à la nourriture contaminée, mais quelques individus résistent cependant. Les animaux infectés présentent de la faiblesse, de l'hypothermie, fréquemment delà diarrhée, parfois des crampps, de la cyanose du nez et de la langue. A l'autopsie, le tube intestinal est distendu, hyperémié et contient un liquide riche en Vibrions ; souvent ces Vibrions envahissent le péritoine et Je sang. Malheureusement on se procure difficilement le spermophile et il ne se reproduit pas en captivité ; il ne saurait donc être d'un grand secours pour l'étude du choléra expérimental.

IV. - MetchnikofT, partant de cette idée qu'une large part de l'immunité des animaux contre le choléra intestinal est due à Fin-

lluence des microbes du canal digestif, cherche à supprimer ou à diminuer celte influence. Il s'adresse au jeune lapin, qui ne se nourrit que du lait de sa mère pendant plusieurs semaines et dont la flore inteslinale reste longtemps assez pauvre et peu variée. Avec l'extrémité recourbée d'une pipette, MelchnikofT racle une culture de vingt-quatre heures sur gélose [choléra de Massaouah(l)] et l'introduit dans la bouche des jeunes lapins : dans la moitié des cas, les animaux ainsi inoculés succombent au choléra intestinal ; il se produit de la diarrhée et la mort arrive vers le sixième jour ; à l'autopsie on trouve les lésions du choléra; le contenu de l'intestin renferme de nombreux vibrions.

V. Microbes favorisants. — MelchnikofT a établi que, dans les cultures sur plaques de gélatine, certains microbes favorisent le développement des Vibrions du cholér a tandis que d'autres microbes empêchent ce développement. MelchnikofT a reconnu des propriétés favorisantes particulièrement à trois microbes isolés de l'estomac de l'homme : une sarcine blanche, une torulaetun bacille du groupe des coliformes. Le Vibrion de Massaouah ingéré en commun avec des cultures de ces microbes favorisants a provoqué un choléra mortel chez la presque totalité des jeunes lapins inoculés (vingt sur vingt-deux) ; la mort survient d'ordinaire trente-six à quarante-huit heures après l'injection, parfois seulement vers la soixantième à cent-vingtième heure, rarement après la deux-centième heure. Les animaux infectés présentent une diarrhée liquide, incolore, séreuse, avec des grumeaux de mucus; il ne se produit pas de vomissements, mais on note fréquemment de l'anurie; les parois abdominales sont molles et flasques, le lapin devient triste et immobile, sa température s'abaisse jusqu'à 30° et au-dessous, et la mort arrive après une agonie parfois fort longue. — A l'autopsie, on ne constate aucune lésion des viscères thoraciques ou abdominaux; seul l'intestin grêle est hyperémié, présente une teinte hortensia et est distendu par un liquide louche, glaireux ; le csscum renferme une grande quantité de sérosité louche contenant des flocons muqueux et présentant une réaction alcaline. Le liquide de l'intestin grêle contient une énorme quantité de vibrions, le plus souvent en culture pure. Les microbes ingérés en même temps que le Vibrion disparaissent quand ils ont accompli leur rôle favorisant. Le Vibrion passe dans le sang dans un quart des cas.

Dès que les jeunes lapins cessent de s'alimenter exclusivement «le

(I) Un vibrion isolé des eaux de Versailles et virulent pour le cobaye (inoculation inlrapéi-itom'-ulc) s'est comporté de la même façon que le Vibrion de Massaouali vis-à-Tia dos jeunes lapins.

CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES. :i07

lait, leur réceptivité disparait et il s'établit une immunité que ne peut vaincre l'association des microbes favorisants. Le choléra intestinal des jeunes lapins est contagieux et peut se transmettre par l'intermédiaire des mamelles de la mère souillées pendant la tetée par les animaux infectés.

Les jeunes cobayes âgés de quelques jours sont beaucoup moins sensibles que les lapins à l'action du Vibrion de Massaouah ingéré avec les microbes favorisants; le choléra intestinal qu'ils prennent est moins caractéristique que celui des lapins et le Vibrion a une tendance plus grande à se généraliser dans l'organisme du cobaye.

HOMME

Depuis longtemps des expérimentateurs ont tenté de produire le choléra chez l'homme par ingestion de matières fécales cholériques (Bochefontaine, Klein). En 1892, Pettenkofer et Emmerich absorbent des cultures pures de Vibrion de Koch ; malgré l'ingestion préalable de carbonate de soude et la réalisation d'écarts de régime, ils" n'obtiennent qu'une diarrhée cholériforme sans accidents généraux.

Ilasterlik etStricker. Ferran, purent de môme déterminer des diarrhées et des vomissements par l'ingestion de cultures pures de Vibrion.

Metchnikoff, à diverses reprises, ingéra et fit ingérera ses élèves des cultures pures de vibrions de différentes provenances (Vibrions de Hambourg, Courbevoie, Saint-Cloud, Paris, Versailles, etc.). Le patient commençait par avaler un gramme de bicarbonate de soude dissous dans un peu d'eau et, immédiatement après, il ingérait une quantité variable de culture sur gélose émulsionnée dans un peu de bouillon stérile. Metchnikoff obtint ainsi des diarrhées riziformes caractéristiques et « un vrai choléra asiatique qui, quoique léger, présenta tous les symptômes classiques » (diarrhée rizi forme, hypothermie, vomissements, crampes des mollets, anurie, vibrions en culture à peu près pure dans les selles).

Il ne semble exister aucun rapport entre la propriété d'un vibrion de développer la péritonite cholérique chez le cobaye et l'aptitude à déterminer le choléra intestinal.

AuricLE 11. — CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES.

Les vibrions sont essentiellement polymorphes; il en résulte une certaine difficulté dans leur étude et leur recherche. La forme des vibrions, le nombre de leurs cils, la manière dont ils se comportent dans les différents milieux sont sujets à de nombreuses variations.

Îi08

S 1er. - ASPECT MICROSCOPIQUE.

Le Vibrion de Kocha la forme d'un bâtonnet trapu, long de i,5 à3(x, large de 0,5 à 0,6 |i, légèrement incurvé en virgule; le degré d'incurvation est très variable ; dans le champ du microscope un certain nombre de vibrions paraissent rectilignes, ce sont ceux dont le plan de courbure est perpendiculaire à la surface de la lame, l'œil n'en

Fig. 220. — Vibriou du choléra (Vib. indien). Fi g. 22 1 . — Vibrion du choléra (Massaouah). — — Culture sur gélose. Fuchsine de Zielil Frottis avec le contenu intestinal. Fuchsine de diluée (Keich.; Obj. 1/12 iram.; Oc. II). Ziehl diluée (Reich.; Obj. 1/12 imra.; Oc. II).

voit que la projection sur le plan de la lame et la courbure disparaît. Le Vibrion est très mobile et possède des cils vibratiles.

Mais il existe d'autres variétés de vibrions s'écartant notablement du type de Koch. Les uns sont minces, irrégulièrement incurvés et présentent parfois la forme d'un S allongé (Vibrions de Massaouah, de Courbevoie, de Paris). D'autres vibrions sont rectilignes et ne présentent jamais d'incurvation (Vibrion de Shangaï) ; d'autres encore, très petits, coccobacillaires (Vibrion de Malle). Bien plus, Metchnikoff, en réensemençant une vieille culture en eau peptonisée de Vibrion d'Angers, vibrion d'ordinaire trapu et recourbé, a obtenu une forme mince et allongée.

Dans les cultures âgées de plusieurs jours on trouve des formes d'involution ; beaucoup de vibrions sont irrégulièrement renflés, à côté d'eux on voit des éléments arrondis, de volume variable.

Certains de ces corps sphériques correspondraient d'après Hueppe à des formes de résistance, ce seraient des nrthrospores formées par eukystement des vibrions; ces arthrospores ne sont pas plus résistautes que le Vibrion lui-même*

Coloration. — Les vibrions se colorent plus difficilement que les bacilles; on utilise des solutions mordancées un peu fortes: la fuchsine de Ziehl étendue de trois à quatre fois son volume d'eau convient parfaitement. Les vibrions ne prennent pas le Gram.

Cils vibratiles. — Le nombre et la disposition des cils vibratiles sont très variables. Le Vibrion type de Koch ne possède qu'un ril placé à une extrémité ; Nicolle et Morax ont montré que certaines variétés présentaient deux, trois ou même quatre cils placés plus ou moins régulièrement aux extrémités; une variété indienne étudiée par ces auteurs est immobile et ne présente pas de cils.

On peut colorer les cils, à l'état vivant par le procédé de Straus, ou, après dessiccation, par les procédés décrits pages 150 et suivantes, en utilisant toujours déjeunes cultures sur gélose.

Conditions de culture. — Le Vibrion du choléra est essentiellement aérobie ; il donnerait cependant une culture très grêle dans les milieux privés d'air (Hueppe et Scholl). 11 se développe de + 12° à 40°, sa température optima de culture est 37°. Il cultive dans tous les milieux usuels, neutres ou légèrement alcalins.

Bouillon. — Eau peptonisée. — A 37°, trouble rapide (dixièmeàdouzième heure), puis formation à la surface d'un voile mince blanchâtre, très fragile; par la suite, il se produit un précipité floconneux.

Gélatine. — Piqûre. — A 20<> apparaissent dès La vingtième heure de petites colonies le long de la piqûre. Rapidement il se produit à la surface une petite cupule dans laquelle est retenue une bulle d'air. A partir de ce moment la liquéfaction s'accentue, elle progresse en entonnoir et est plus marquée à la surface qu'au fond du tube; la bulle d'air continue à exister à la surface (deuxième à quatrième jour, culture caractéristique). Peu à peu la liquéfaction envahit tout le tube et la culture cesse d'être caractéristique.

Colonies isolées. — A 20°, vers la vingtième heure, apparaissent de petits points blanchâtres qui ne tardent pas à former des colonies irrégulières, granuleuses, à bords un peu sinueux, puis la liquéfaction commence, elle se produit en cupule; au centre de la zone liquéfiée apparaît lacolonie, de la périphérie de laquelle se détachent de

Fig. 222. — Choléra; Vibrion indien.— Piqûre en gélatine, quatrième jour.

petits groupes de vibrions. Bientôt la plaque se liquéfie en totalité.

Gélose. — A 37°, strie abondante, blanchâtre, se développant rapidement et ne présentant pas de caractères spéciaux.

Sérum coagulé. — Développement rapide avec liquéfaction.

Pomme de terre. — Les vibrions ne se développent bien que sur la pomme de terre alcalinisée (Voy. p. 57), ils forment alors une strie épaisse, brun clair. Sur lapomme de terre légèrement acide le développement est nul ou très grêle.

Lait.— Les vibrions cultivent d'ordinaire dans le lai t sans le coaguler.

Article III. — PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES.

§ 1e'. - VITALITÉ ET VIRULENCE.

Le Vibrion du choléra garde assez longtemps sa vitalité dans les cultures conservées à l'obscurité et à l'abri de la dessiccation; dans ces conditions, les cultures en gélose sont encore vivantes après cinq ou six mois.

La dessiccation tue très vite les vibrions, surtout dans les cultures; dans les matières fécales les vibrions résistent mieux.

Une température de H- 50° à 60° tue les vibrions en dix minutes environ, mais des températures très basses ( — 10°) sont sans action sur leur vitalité.

Les vibrions sont très sensibles à l'action des antiseptiques : des traces de sublimé, de sulfate de quinine, etc., arrêtent leurs cultures.

A propos du choléra expérimental nous avons insisté sur les variations de la virulence des vibrions; cette virulence s'atténue dans les cultures et s'exalte par les passages chez les animaux réceptifs (Voy. aussi Toxine).

Les Vibrions cholériques sont des êtres très sensibles à l'influence des microbes qui les entourent (Metchnikoff).

Nous avons déjà dit que certaines bactéries favorisent le développement des vibrions dans les cultures et dans le tube intestinal ; il en est d'autres, au contraire, qui empêchent ce développement, tels sont le Bacille pyocyanique, un coccus blanc isolé de l'eau, etc. Ce coccus blanc a une action remarquable sur les vibrions : pendant les premiers jours il en empêche complètement le développement, puis, au bout de quelque temps, le Vibrion commence à se développer, mais ses colonies sont rares et grêles et constituées non par des bacilles virgules, mais par des formes d'involution en doubles massues (Metchnikolï).

§ 2. - RÉACTIONS BIOCHIMIQUES.

Réaction indol-nitreuse. — Dans les cultures en eau peptonisée le Vibrion du choléra réduit les nitrates pour donner naissance

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES. 511

à des nitrites et produit de l'indol. Quand on verse un acide minéral exempt de produits nitreux (de l'acide sulfurique pur, par exemple) dans une de ces cultures il se produit une réaction rouge caractéristique, c'est la réaction du kolera-roth ou indol-nitreuse (réaction de Bujwid, de Salkowski). Cette réaction est encore plus apparente si l'on a eu soin d'ajouter un peu de nitrate de potasse dans l'eau peptonisée ; on peut utiliser la formule ci-dessous :

Peplone Chapoteau 10 grammes.

Sel marin 5 —

Nitrate de potasse 1 gramme (non indispensable).

Eau 1 000 grammes.

La solution est alcaline sans addition de soude ; la stériliser à 1 15°.

Le tube d'eau peplonisée, ensemencé avec le Vibrion, est placé à l'élnve à 37°; au bout de vingt-quatre heures on y verse doucement 1 à 2 centimètres cubes d'acide sulfurique ou chlorhydrique purs : il se produit une teinte rose qui s'accentue pendant plusieurs heures.

Tous les Vibrions cholériques ne donnent pas la réaction indolnitreuse et, par contre, d'autres bactéries peuvent la fournir.

Réaction de l'indol. — Le Vibrion du choléra produisant de l'indol dans les cultures, celles-ci donnent les réactions que nous avons énumérées page 426.

Le choléra est un empoisonnement aigu causé par l'absorption d'une toxine élaborée dans l'intestin par le Vibrion ; depuis longtemps on s'est préoccupé de l'étude de cette toxine (1).

[. — Briegcr et Frânkel décrivent dans les cultures une substance albuminoïde de nature indéterminée qu'ils rapprochent dos diastases et nomment toxalbumine ; Outchinsky montre que le Vibrion élabore celle toxine même dans un milieu exclusivement minéral :

Eau 1 000 grammes.

Glycérine 40

Chlorure de sodium 5 —

Chlorure de calcium 0.1 cenligramme.

Sulfate de maguésium 0,2 '

Phosphate de potassium 2 grammes.

Lactate d'ammonium G

Asparaginc 4

11. — Pétri montre que les cultures qui fournissent le plus de

(1) Nous laisserons de cota les travaux anciens dans lesquels on a rechercha et décrit les ptomaïnes du choiera ; nous ne citerons que pour mémoire la théorie d'Emmerich qui voulait que l'intoxication cholérique soit produite par les nitrites élaborés par le Vibrion • i"ï suffira de dire que les cultures des vibrions ne produisant pas de nitrites sont aussi toxiques que celles qui renferment ces sels.

P*« t-E VlliHION DU CHOLÉRA.

toxine sont celles qui sont faites dans une solution de peplone à 5 ou 10 p. 100. Les cultures ainsi préparées et stérilisées à 120" sont toxiques pour le cobaye. La toxine cholérique n'est pas détruite par la température de l'ébullilion, sa nature diffère donc complètement de celle de la toxine djphtéritique, Pétri la désigne sous le nom de loxopcplone.

A la dose de 1 à 2 centimètres cubes injectés dans le péritoine du cobaye, la toxine de Pétri produit une maladie mortelle en huit à vingt-quatre heures, débutant après une incubation de deux à trois heures et caractérisée par de la somnolence, de l'hypothermie et la production d'une péritonite à exsudât séreux. La culture entière stérilisée par la chaleur est plus active que la culture filtrée.

III. — Ilueppe et Scholl objectent aux travaux précédents que dans l'intestin humain le Vibrion prépare sa toxine à l'abri de l'air: les cultures aérobies sont donc impuissantes à fournir la véritable toxine cholérique. Ilueppe et Scholl cultivent le Vibrion à l'intérieur d'œufs de poule (Voy. p. 55, A), croyant le placer dans des conditions de vie anaérobie, oubliant la présence de la chambre à air et la porosité de la coquille. La culture développée, les auteurs précipitent le contenu de l'œuf par l'alcool, dissolvent le précipité dans de l'eau stérile et injectent la solution obtenue dans le péritoine de cobayes. Cette solution se montre extrêmement toxique et tue les animaux en quelques minutes, sans période d'incubation. Gruber et Wiener montrent que cet empoisonnement n'arien de spécifique et est produit par l'hydrogène sulfuré développé dans la culture et par l'alcool employé à la précipitation. Gruber et Wiener confirment les résultats de Pétri : la véritable toxine cholérique ne tue les animaux qu'après une période d'incubation.

IV. — Gamaléia soutient l'existence de plusieurs toxines cholériques. Des cultures de Vibrion en bouillon de pied de veau sont placées pendant quinze jours à l'étuve à 37°, puis abandonnées quelques jours à la température ordinaire pour que le poison contenu dans le corps des microbes diffuse dans le liquide. Ce liquide de macération contiendrait deux poisons, l'un altérable par la chaleur et provoquant de la diarrhée chez les lapins, l'autre résistant au chauffage et tuant les lapins sans provoquer de diarrhée.

V. — Pour Pfeiffer, la toxine cholérique est adhérente au corps même des vibrions et n'est mise en liberté que lorsque ceux-ci sont morts ou se désagrègent; il en résulte que les toxines solubles ren contrées dans les cultures ne seraient qu'un produit plus ou moins modifié des cadavres microbiens.

Pfeiffer base son affirmation sur ce fait que l'on lue le cobaye en lui

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injectant clans le péritoine les vibrions d'une culture récente sur gélose tuée par les vapeurs de chloroforme ou la chaleur.

VI. — Metchnikoff, Roux et Taurelli-Salimbeni démontrent que la toxine cholérique est soluble et qu'elle diffuse pendant la vie des vibrions; ils préparent une toxine qui est analogue à celle que Ransom a obtenue de son. côté.

Préparation de la toxine. — 1° Il faut commencer par se procurer un vibrion très virulent. Metchnikoff, Roux et Taurelli-Salimbeni exaltent la virulence de leur vibrion par des passages successifs dans le péritoine du cobaye : ils arrivent à obtenir un microbe tuant le cobaye à la dose de un vingtième de culture sur gélose (inoculation intrapéritonéale). Les mêmes auteurs donnent la préférence au procédé suivant : on prépare de petits sacs de collodion de 3 à 4 centimètres cubes de capacité (technique, p. 182); après avoir stérilisé un de ces sacs on y introduit de l'eau peptonisée ensemencée avec le vibrion et on en referme avec soin l'ouverture. On introduit aseptiquement le sac dans le péritoine d'un cobaye ; au bout de quarantehuit heures le sac est retiré de l'abdomen de l'animal (1) et son contenu est inoculé directement dans le péritoine d'un nouveau cobaye; l'exsudat péritonéal de ce second animal fournit la matière d'ensemencement d'un nouveau sac. On fait ainsi plusieurs passages successifs en alternant les ensemencements en sac avec les inoculations directes dans le péritoine. Par ces passages alternatifs, le vibrion prend une telle virulence que le contenu d'un sac tue bientôt un cobaye moyen à la dose de l/160c de centimètre cube inoculé dans la cavité péritonéale.

La conservation de la virulence s'obtient en faisant tous les trois ou quatre jours une culture en sac inclus dans le péritoine ; le vibrion se trouve ainsi dans les conditions les plus favorables à son développement sans être en contact direct avec les tissus du cobaye : il échappe à l'influence nuisible des phagocytes.

2° Préparer et stériliser dans un matras le milieu nutritif suivant :

Eau

Peptone. . .

Gélatine. . .

Sel marin .

Ensemencer avec le contenu d'un sac retiré du péritoine d'un cobaye. Placer à l'étuve pendant quelques heures, jusqu'à apparition d'un trouble manifeste, puis répartir purement la culture dans des

(1) Les cobayes ayant reçu dans le péritoine un sac de 2 à 4 centimètres cubes ense mcncé avec un vibrion viraient succombent du troisième au cinquième jour à l'empoisonnement causé par la toxine soluble qui diffuse h travers la paroi du sac.

Besson. — Techn. microb., 2° édit. 33

1 000 grammes.

ni 4

LE VIBRION 1)11 CHOLERA.

boîtes de Pétri stériles disposées dans une chambre humide à 37°; dès la douzième heure il existe un voile épais à la surface du liquide des boites. La culture obtient son maximum de toxicité le quatrième jour, on la Jitlre alors sur la bougie Chamberland.

Metohnikoff a montré le rôle favorisant de certains microbes vis-à-vis des cultures du vibrion (Voy. plus haut); nous avons dit qu'une lorula retirée de l'estomac de l'homme possédait à un haut degré ces propriétés favorisantes. Une culture de cette torula en bouillon ordinaire, âgée de huit jours et filtrée sur la bougie Chamberland, fournit un liquide non toxique où le vibrion cholérique produit notablement plus de toxine que dans le bouillon neuf.

Propriétés de la toxine. — Le filtrat obtenu est alcalin et doué d'une odeur spéciale; il tue le cobaye à la dose de 0,3 centimètre cube par 100 grammes du poids de l'animal. La toxine n'est pas altérée par la température de l'ébullition ; elle perd son activité au contact de l'air, surtout en présence de la lumière, mais elle la conserve longtemps dans des tubes exactement remplis, scellés à la lampe et placés à l'obscurité. L'alcool absolu et le sulfate d'ammoniaque précipitent le principe actif de la toxine.

Action de la toxine sur les animaux. — De tous les animaux de laboratoire le cobaye de taille moyenne ou petite est le plus sensible à la toxine cholérique ; le cobaye de forte taille résiste mieux. Le poison agit aussi sûrement et aussi rapidement quand on l'inocule sous la peau que quand on l'injecte dans le péritoine. La mort survient en six à trente-six heures avec des doses moyennes (1 centime! re cube sous la peau ou un tiers de centimètre cube dans le péritoine, pour des cobayes de 250 grammes environ) ; mais en injectant une grande quantité de toxine, la mort peut être produite en quelques minutes, surtout si l'on pratique l'injection dans le péritoine.

Les symptômes de l'intoxication sont analogues à ceux que produit l'inoculation des cultures vivantes, mais ils surviennent plus rapidement : aussitôt après l'injection, l'hypothermie se manifeste ; elle se continue jusqu'au moment de la mort, où la température centrale est de 24° à 25°. A l'autopsie on constate un peu d'oedème au point d'inoculation, un peu d'épancheinent péritonéal, de l'hyperémie de l'intestin grêle et de l'estomac, de la congestion des viscères abdominaux ; l'intestin est distendu par un liquide diarrhéique.

Quand la quantité de toxine injectée est trop faible, il se produit une élévation passagère de la température, avant l'abaissement, et l'animal se rétablit.

Le lapin résiste mieux à la toxine que le cobaye ; à poids égal, la dose mortelle pour cet animal est supérieure d'un tiers à celle qui tue le cobaye. La souris est encore plus résistante : pour tuer une souris, il faut au moins i .centimètre cube de toxine injecté sous la peau ou

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un tiers de centimètre cube dans le péritoine; c'est-à-dire qu'une souris de 15 grammes résiste à la dose qui tue un cobaye de 250 grammes.

[, — Ferran a montré que le cobaye qui a résisté à l'inoculation sous-cutanée d'une petite dose de culture de Vibrion cholérique devient réfractaire aux doses mortelles. Il a tenté d'appliquer à l'homme cette méthode d'immunisation et a pratiqué 50000 vaccinations: après deux inoculations sous-cutanées de ses cultures (légère réaction fébrile) l'homme deviendrait réfractaire au choléra. Malheureusement la réalité de cette hypothèse n'a pas été démontrée.

II. — Haffkine essaye de conférer l'immunité par l'inoculation d'un virus atténué. Il prend un vibrion à virulence exaltée et fixée par une vingtaine de passages dans le péritoine de cobayes et il l'atténue en le cultivant dans du bouillon à 39° en présence d'un courant d'air ; il fait ainsi plusieurs cultures successives en réensemençant le vibrion tous les deux ou trois jours ; l'injection de ces cultures immunise le cobaye contre l'inoculation sous-cutanée ou intrapéritonéale du virus exalté. Pour vacciner l'homme contre le choléra intestinal, Haffkine injecte d'abord le virus atténué et, huit jours après, une culture virulente. S'il est indiscutable que les vaccins d'Ilaffkine protègent contre la péritonite cholérique, ils semblent impuissants vis-à-vis du choléra intestinal.

III. — Pfeifï'er, Klemperer, Vincenzi, Klein, etc., montrent qu'il est très aisé de protéger le cobaye contre l'infection péritonéale.

L'injection de cultures du Vibrion liltrées ou stérilisées par la chaleur empêche le développement ultérieur de la péritonite cholérique (Klemperer, Vincenzi). Klein démontre que cette vaccination peut s'obtenir par l'injection de produits de microbes autres que celui du choléra : une culture chauffée de Micrococcas prodigiosus, injectée à petites doses, vaccine le cobaye contre des doses mortelles de Vibrion. Israël voit que l'injection intrapéritonéale de bouillon neuf protège les cobayes contre la péritonite vibrionienne ; les injections de sérum humain (Voy. plus loin), de solution physiologique de chlorure de sodium, d'urine, agissent de même (Israël, Metchnikoff). L'injection de ces substances a pour effet d'exciter la fonction phagocytaire : les leucocytes englobent les vibrions inoculés et l'évolution de la péritonite est arrêtée.

IV. — Metchnikoff, Roux et Taurelli-Salimbeni montrent que les animaux s'accoutument très rapidement à la toxine cholérique : les cobayes, les lapins, les chevaux, les chèvres sont susceptibles d'être immunisés par l'injection de toxine.

Les cobayes et les lapins traités partie petites doses de toxine présentent après chaque injection une hyperthennie de courte durée suivie d'une hypothermie modérée qui dure environ vingt heures; les injections répétées amènent un amaigrissement, passager chez les cobayes, plus durable chez les lapins; il est alors nécessaire d'interrompre l'immunisation jusqu'à ce qué les animaux aient repris leur poids initial.

La chèvre réagit, par une élévation de température, à l'injection de 2 à o centimètres cubes de toxine; la réaction s'atténue à mesure que l'accoutumance s'établit.

Les chevaux réagissent vivement à l'injection de 10 centimètres cuites de toxine et présentent un œdème notable au point d'inoculation ; on renouvelle les injections tous les dix ou quinze jours et on arrive à leur faire supporter au bout de six mois des doses de 200 centimètres cubes injectées en uu seul coup.

S 5. — SÉROTHÉRAPIE.

[. — Klemperer montre que le sérum des animaux vaccinés contre le Vibrion présente des propriétés préventives.

II. — Lazarus constate que le sang d'individus guéris du choléra possède un pouvoir préventif considérable : dans certains cas, un centimètre cube du sérum extrait de ce sang protège le cobaye contre la péritonite vibrionienne. La propriété préventive du sang ne joue aucun rôle dans la guérison du choléra humain : Metchnikoff et Klemperer ont montré que le sérum d'hommes n'ayant jamais eu le choléra possède parfois celte propriété. De plus, MetchnikofT a vu que le pouvoir préventif peut être très développé dans le sang d'individus venant de succomber au choléra et qu'il manque souvent chez les cholériques convalescents.

III. — Pfeiffer étudie les propriétés du sang des animaux vaccinés par injection de Vibrions cholériques (Voy. plus haut). 11 obtient un sérum actif au quinzième de milligramme, c'est-à-dire dont un quinzième de milligramme suffit à vacciner un cobaye contre la péritonite cholérique quand on l'injecte, avant, en même temps, ou dans les quinze minutes qui suivent l'inoculation du Vibrion. Ce sérum n'est pas bactéricide, mais il possède des propriétés agglutinantes vis-à-vis du Vibrion du choléra.

Metchnikoff a montré que le sérum de Pfeiffer ne possède pas de propriétés antitoxiques ; il est extrêmement efficace contre l'envahissement du sang et des organes par le Vibrion, parce qu'il excite la fonction phagocytaire et permet l'englobement du microbe par les leucocytes, mais il est totalement inefficace contre le choléra intestinal, qui est une intoxication.

Pfeiffer a proposé d'utiliser la propriété immunisante du sérum des animaux vaccinés pour différencier le Vibrion du choléra des espèces voisines; d'après lui, le sérum d'un animal vacciné contre

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES. M

le choléra protège le cobaye contre l'infection par le seul Vibrion cholérique et non contre les vibrions voisins ; pour être fixé sur la nature d'un vibrion, il suffirait dès lors d'inoculer ce vibrion à un cobaye traité par du sérum anticholérique, l'animal ne résisterait qu'au cas où le vibrion inoculé appartiendrait au groupe des cholérigènes (1). Metchnikoff a montré le peu de valeur de cette épreuve: la réaction d'immunité peut manquer vis-à-vis de vibrions isolés de selles cholériques et se rencontrer avec des vibrions saprophytes.

IV. — Metchnikoff, Roux et Taurelli-Salimbeni étudient les propriétés du sérum de leurs chevaux immunisés par la toxine (Voy. plus haut). Ce sérum est préventif contre la péritonite cholérique du cobaye, la dose préventive est comprise entre 0,01 et 0,005 centimètre cube. Il est antitoxique : 2 centimètres cubes neutralisent quatre fois la dose mortelle de toxine. — Injecté à la dose de 4 à 8 centimètres cubes sous la peau de petits lapins avant l'ingestion de Vibrion cholérique, ce sérum se montre préventif contre le choléra intestinal : sur 100 lapins traités par le sérum 56 ont échappé au choléra, tandis que chez les témoins la proportion des survivants n'a été que de 16 p. 100. Le sérum est efficace quand il est injecté au moment même de l'ingestion du virus, mais il échoue totalement à guérir les animaux qui ont ingéré le Vibrion depuis vingt-quatre heures.