B. - CULTURES

I. Fèces. — Le procédé primitivement employé consistait à pratiquer avec les matières fécales des isolements sur plaques de géla tine en boites de Pétri, mais les plaques sont fréquemment envahies par des microbes étrangers et la recherche est interrompue. On donnera la préférence au procédé suivant :

Procédé de choix (Metchnikoff). — 1° Préparer des tubes de solution gélo-pepto-sel de Metchnikoff ( Voy. p. 32), les ensemencer avec un peu de matières cholériques et les placer à l'étuve à 37°.

2° Dès la troisième ou quatrième heure il se produit un trouble dans les tubes et vers la septième heure il existe un léger voile à la surface du liquide. Une trace de ce voile est examinée au microscope : d'ordinaire la culture est impure et, à côté des vibrions, il existe d'autres formes microbiennes.

3° Pour purifier la culture on peut pratiquer un second passage en milieu gélo-pepto-sel (ensemencer une trace du voile dans un tube neuf et reprendre la culture au bout de six à sept heures), mais il suffit d'ordinaire de pratiquer de suite un isolement sur gélose :

On coule un tube de gélose liquéfiée dans une boite de Pétri, on laisse solidifier la plaque et on pratique à sa surface un isolement en stries avec une ose chargée d'une trace du voile de la culture (Voy. p. 89). La plaque est portée à l'étuve à 37° ; au bout de quelques heures apparaissent de petites colonies minces, transparentes, opalescentes, jamais opaques, que l'on peut prélever dès la sixième ou huitième heure. L'isolement est alors terminé : il n'a demandé au total qu'une quinzaine d'heures.

En même temps que l'isolement en stries sur gélose, on peut praliquer un isolement sur plaques de gélatine: ces plaques, examinées ultérieurement, fourniront un élément de diagnostic.

II. Eau. — Procédé de choix (Metchnikoff). — i° Préparer des fioles

•"'20 LE VIUKION DU CHOLÉItA.

de Vivien de 250 centimètres cubes environ ; les jauger à 200 centimètres et marquer sur le verre un repère avec un trait de diamant. 2° Dans chaque fiole verser la solution suivante :

Eau 50 centimètres cubos.

Peptonc Cliapotcau 2 grammes.

Sel marin 2 —

Gélatine 4. —

Solution de soude Q. S. pour légère alcalinité.

Stériliser à l'autoclave.

3° Ajouter au contenu de chaque fiole 150 centimètres cubes dé l'eau suspecte (jusqu'au trait de jauge de la fiole) et porter le tout à 37°. Quand l'eau contient des vibrions, au bout de huit à dix heures il se forme un voile à la surface du liquide. On prélève une trace de ce voile, on l'examine, on fait un ou deux passages successifs dans des tubes de gélo-pepto-sel et on termine au besoin par un isolement sur gélose comme nous l'avons dit plus haut.