II. BIcii composé de Roii.r
Solution aqueuse (le violet de (lalilia à 1 0/0 \ partie.
Solution aciueuse de vert de méthyle à 1 0/0 3 —
Eau distillée stérilisée : Q. S. pour une belle couleur bleue, pas trop foncée.
Filtrer. Hain de une à deux minutes et inclusion dans le baume.
m. Méthode modifiée de Davalos, très pratique:
Rubiiie { gramme.
Alcool absolu 10 " —
Ajouter de temps en temps :
Eau ithéniquée à 5 0/0 100 grammes.
La solution est bonne au bout de quelques jours et s'améliore en vieillissant
90 EXAMEN DES MICROBliS
On augmente la puissance d'impréfj^nation des colorants :
a] Par le chauffage, soit pendant quelque temps à l'étuve ou à la lampe à alcool, c'est-à-dire jusqu'à ce que la surface liquide dégage des vapeurs.
h) Par l'addition de la potasse caustique. Kocli combinait, au début, ces deux méthodes pour colorer le bacille de la tuberbulose.
Actuellement, on ne se sert plus guère de la soude caustique que dans la solution de Loeffler au bleu de méthyle, qui est très stable et très employée en bactériologie.
c) Par dissolution des couleurs dans l'eau d'aniline. On prépare l'eau d'aniline en mélangeant 3 parties d'huile d'aniline à 100 parties d'eau dans un tube à réactif qu'on agite avec soin ; il se forme un liquide laiteux qu'on filtre et qui redevient clair, transparent. On dissout directement la couleur dans l'eau d'aniline, ou bien on y verse une quantité suffisante de la solution alcoolique concentrée pour obtenir une opalescence manifeste.
On emploie surtout la fuchsine à l'eau d'aniline et le violet de gentiane aniliné.
(1) Par l'acide phénique. L'eau phéniquée à 3 0/0 renforce aussi l'action de l'aniline. Les solutions phéniquées des couleurs d'aniline sont surtout recommandables à cause de leur énergie de pénétration et de leur stabilité.
Il suffît, en général, pour enlever l'excès de matière colorante, de laver la préparation dans une grande quantité d'eau distillée. Signalons aussi :
1° L'alcool ;
2*^ L'acide acétique dilué à 1/2 ou 1 0/0.
Ces deux produits permettent d'enlever complètement la couleur et font mieux ressortir le noyau dans les coupes.
Pour obtenir cette coloration nucléaire, on emploie souvent en premier lieu l'acide acétique, puis l'alcool.
S'' La solution iodo-iodurée à 1 : 2 : 100.
4° Les acides minéraux à 3 ou 10 0/0.
Ces deux procédés décolorent très fortement même un certain nombre de microbes qui deviennent ainsi différenciables.
5" Différents sels qui décolorent les noyaux : carbonate de potasse et de soude, perchlorure de fer, bichromate de potasse, permanganate de potasse, chlorure de palladium, carbonate de lithine, etc.
6" Des couleurs acides d'aniline : la tropoléine et la fluorescéine qui, ajoutées à l'alcool, augmentent son pouvoir décolorant.
Pour la plupart des cas, les couleurs basiques d'aniline agissent fort bien. La solution suivante est surtout d'un usage très répandu :
