I. Méthode d'Ehrlich

Elle peut être accélérée par la chaleur.

1° Colorer pendant 3 à 5 minutes dans la solution de fuchsine à l'eau d'aniline (ou dans le violet de gentiane à l'eau d'aniline).

-1" Décolorer dans l'acide nitrique à 20 0/0, 1/2 à 1 minute. :i° Laver dans l'alcool à 70°, jusqu'à ce qu'il ne prenne plus de couleur. A" Colorer par contraste au bleu de méthyle (ou au brun de Bismarck ), l 1|2 à 2 minutes.

5° Laver à l'eau.

(]" Sécher sur papier à filtrer.

7° Baume de Canada.

Remarque : la coloration des coupes demande plus de temps: on les passe de l'eau dans Talcool, puis dans le xylol et le baume de Canada.

n. MÉTHODE DE ZiEIIL-XeELSEN.

l" Colorer i)endant 3 à 5 minutes dans une solution chaude de :

Fuchsine \ ranime.

Al(;ool 10 l; ranimes.

Acide y)hénique concenUv 5 »

Eau distillée 100 »

2" Décolorer dans l'acide sulfurique à 5 0/0 ou Tacitle nili i(]ue à ITi ()/(). 3" Laver dans l'alcool à 70°.

\" Colorer en contraste dans la solution aqueuse de bleu de mcMlivIe, 1 /2 à 2 minutes, 5" Laver dans l'eau.

0" Sécher sur papier à filtrer.

1" Baume de Canada.

Voici la méthode la plus expédilive et la plus commode (\N urLz). 1:11e est busée aussi sur l'emploi de la solution de Ziehl :

Fuchsine ou rubine l gramme.

Phénol 5 i^raninio.

Alcool à 90° 10 ' »

Eau !)a »

Cette solution se prépare de la i'aron suivante : ou place l'alcool, le phénol et la fuchsine dans une éprouvette graduée de 100 cent, cubes et ou ayilo jusqu'à dissolution avec une baguette de verre. On ajoute ensuite Feaii. On attend jusqu'au lendemain et on filtre la solution avant de s'en servir, be liquide doit être d'un rouge très foncé; dans un tube à essai ordinaire, il ue doit pas laisser passer la lumière; s'il est transparent, c'est que la fuchsine était de mauvaise qualité.

1° La préparation séchée est placée dans une capsule dans laquelle on a versé quelques centimètres cubes de la solution de Ziehl, la partie enduite reposant sur la surface du liquide, et l'on chauffe jusqu'à ce qu'il se produise un commencement d'ébullition, 2 ou 3 fois; les bacilles sont dès lors colorés.

2» On lave la lamelle à l'eau pour enlever l'excès de matière colorante.

3° On la met dans Facide sulfurique dilué (acide 1, eau 3) pour quelques minutes.

4" On la lave à l'eau.

La lamelle est incolore ou d'une teinte lilas. Si, après cette immersion dans

l'eau, la lamelle redevient trop rose, on l'immer^^e de nouveau dans Tacide. Quand elle est décolorée, on la place sur une lame de verre bien nettoyée eu interposant entre elles une goutte d'eau.

On peut aussi colorer à froid les crachats en les laissant vingt minutes — ou de préférence 2i heures — en contact avec la matière colorante. Les autres manipulations sont identiques. On pourrait aussi décolorer dans le chlorhydrate d'aniline à 2 0/0 pendant 1 à 5 secondes. La décoloration terminée, il est, en général, plus commode de ne pas faire de double colorition quand on ne sait pas s'il existe ou non des bacilles dans les crachats, car, lorsque le fond est incolore, on les découvre plus facilement. Une fois qu'on sait qu'il existe des bacilles, on peut procéder à la double coloration. Ce n'est pas indispensable : avec un peu d'habitude, on décolore de telle façon que le fond de la pre'paration reste d'un rose très clair; on se rend ainsi compte de tous les élément.s contenus dans la lamelle. Pour efl'ectuer la double coloration, on place alors la lamelle décolorée et lavée dans la solution aqueuse saturée de bleu de métliyle, pendant 2 à 3 minutes. On lave à l'eau. Les bacilles apparaissent en rouge sur fond bleu. L'examen est effectué à l'aide d'un objectif à immersion homogène et du condensateur d'Abbe, en faisant usage du miroir plan.