DOSAGE DES LIPIDES ET DE LEURS CONSTITUANTS

Pour saisir «in vivo » les modifications des lipides hépatiques et de leurs constituants il fallait réaliser les trois conditions suivantes :

1°) Trouver un anesthésique qui ne modifie pratiquement pas la composition delà glande hépatique.

2°) Prélever fréquemment de petits fragments de foie sans entraîner de mutilations trop importantes de l’organe.

3°) Choisir des techniques de dosage permettantde suivre, avec le maximum d’approximation, sur de minimes portions de la glande l’évolution des lipides et de leurs constituants au cours des diverses expériences réalisées.

I Anesthésie.

Les animaux sont anesthésiés à l’aide de morphine et de numal et à l’éther ; ces anesthésiques ne modifiant pas le taux des lipides totaux et de leurs constituants dans le foie.

II Prélèvements.

Les prélèvements ont été pratiqués à l’aide du bistouri électrique. J’incisais avec une anse d’acier ou de platine, des languettes de foie pesant chacune environ 500 milligrammes.

Grâce à un réglage correct de l’intensité et de la fréquence du courant l’hémostase est presque obtenue immédiatement.

Des dosages effectués sur deux fragments prélevés côte-àcôte l’un au bistouri ordinaire, l’autre au bistouri électrique montrent que l’emploi du bistouri électrique n’introduit que de faibles erreurs du même ordre de grandeur que celles trouvées lors de la justification des méthodes de dosages employées.

III Technique des dosages-

Extraction des lipides totaux. — L’extraction des lipides se fait dans un micro-Kumagawa à l’aide de l’alcool à 95°.

Cette opération qui dure huit heures s’effectue à une température de 80° au bain de sable électrique. On réunit ensuite dans un ballon à extraction de 150 cm 3 , l’alcool contenu dans le ballon de Kumagawa, et l’alcool qui a servi à fixer le prélèvement des fragments hépatiques, puis on évapore à sec sous le vide au bain-marie bouillant. Le résidu de l’évaporation est repris trois fois par du benzène anhydre. Les extraits benzéniques réunis dans un tube à centrifugeuse et centrifugés sont rassemblés dans un cristallisoir et évaporés dans une étuve électrique réglée à 50°. On obtient par pesée les lipides totaux qui sont mis quantitativement en solution chloroformique.

Constituants lipidiques. Dosage dans la solution chloroformique DES DIVERS CONSTITUANTS DES LIPIDES.

I« Phosphore lipidique.

Le phosphore lipidique a été dosé par la méthode de M me Sôrensen modifié d’abord par Machebœuf ensuite par Flatter.

2°) Cholestérol.

Le cholestérol a été estimé colorimétriquemenl par la technique de Grigaut dans certaines expériences, et a été dosé pondéralement par la méthode de Windaus toutes les fois que cela nous a été possible.

3°) Détermination de l’indice d’iode.

J’ai utilisé la méthode de Rosenmund etKüLMEHLM (microtechnique de Yasuda). (

La détermination de l’indice d’iode doit s'effectuer des que les lipides totaux ont été mis en solution chloroformique ou le plus tôt possible sur cette solution conservée à l’abri de la lumière solaire. Avec P. Cristol nous avons montré que si l’on expose à la lumière solaire une solution chloroformique de lipides totaux l’indice d’iode diminue graduellement ; au contraire, celui-ci reste constant si la solution est gardee dans l’obscurité. Une modification semblable paraît s’observer sur les acides totaux et sur les acides gras phosphatidiques. (voir tableau n° I).