Sforza. Rivista (figiene e Sanila puhblica, 1" mars
HÉMATOZOAIRE DU PALUDISME lUl
Après 24 h. les lamelles sont lavées à Teau distillée et montées dans le baume.
Les procédés plus compliqués de Romanowsky, de Malachowsky et de Sacharoff, basés aussi sur l'emploi de la double coloration par Téosine et le bleu de méthylène, ont été imaginés dans le but de colorer les nucléolos des hématozoaires.
Romanowsky a préconisé la méthode de coloration qui suit : le 'sang desséché et flambé sur des lamelles couvre-objet est mis à letuve sèche, à la température de 105 à HO** pendant une heure environ. Les lamelles sont ensuite plongées dans un mélange colorant composé de : solution aqueuse saturée de bleu de méthylène, 2 volumes, solution aqueuse d'éosine à 1 pour 100, 5 volumes. Ce mélange doit être préparé fraîchement ; on y laisse les lamelles pendant 2 h. au moins; on lave à Teau, on sèche et on monte dans le baume.
Au moment où Ton mélange les deux solutions il se produit un précipité; il ne faut pas filtrer; c'est le mélange trouble qui doit être employé pour la coloration du sang.
Lorsque les préparations sont bien réussies les nucléoles sont colorés en rouge-violet, tandis que le plasma des hématozoaires se colore en bleu.
Malachowski a employé pour la coloration des hématozoaires le bleu de méthylène borate de Sahli. Les préparations fixées par un séjour de quelques minutes dans Talcool absolu, sont plongées pendant 24 h. dans le mélange suivant :
Solution aqueuse concenlrée de bleu de méthylène. . . 24 parties
Solution de borax à 5 p. 100 46 —
Eau 40 —
A filtrer après 26 h.
On lave à Teau, on sèche et on monte dans le baume.
Pour obtenir la double coloration, on ajoute au mélange quelques parcelles d'éosine
Les hématozoaires se colorent en bleu et les nucléoles en rougeviolet comme les noyaux des leucocytes ; le protoplasma des leucocytes à noyau unique est violet, celui des leucocytes à noyaux multiples est bleu.
SacharolT recommande de procéder ainsi qu'il suit pour colorer les nucléoles et les flagelles * :
1, Sacharoff, CentralbL f, Bakter., 1895, Bd. XVUI, S. 379.
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A une solution aqueuse saturée de bleu de méthylène, étendue d'eau à moitié, on ajoute une solution aqueuse à 1 pour 100 d'éosine jusqu'à Tapparition d'un précipité granulé ; pendant cette opération on a soin de remuer constamment. Quand le précipité ne se produit pas, c'est que le bleu de méthylène emplpyé ne vaut rien pour cet usage.
A partir du moment où se montre le précipité on n'ajoute plus Téosine que goutte à goutte et, après chaque addition d'une goutle, on prélève au moyen d'une pipette quelques gouttes du liquide colorant et on les porte sur des lamelles recouvertes de sang desséché qui sont laissées pendant 24 h. dans la chambre humide. Les préparations sont ainsi colorées avec un mélange qui renferme des proportions variables d'éosine.
Au bout de 24 h. on humecte d'eau les préparations, on les lave à l'eau, on sèche et on monte dans le baume.
J'ai obtenu pour ma part de meilleurs résultats en faisant agir successivement l'éosine et le bleu de méthylène qu'en employant les mélanges précédents.
La thionine est, après le bleu de méthylène, le réactif colorant qui donne les meilleurs résultats pour l'étude de l'hématozoaire du paludisme.
La solution aqueuse fraîche de thionine à 1 pour 100 colore lentement les préparations de sang; la solution phéniquée vieille les colore rapidement.
M. le D*" Marchoux emploie la solution suivante qui donne de très bons résultats :
Solution saturée de thionine dans alcool à 60»^ 20 cm'
Eau phéniquée à 2 p. 100 100 —
A mélanger et à employer au bout de 15 jours seulement.
Les préparations de sang se colorent en quelques secondes dans cette solution.
Dans les préparations fortement colorées, les hématozoaires sont difficiles à voir et on ne distingue plus les granulations de pigment noir; les préparations sont bonnes lorsque les hématies ont une teinte verdàtre ou violet-clair.
Avec la solution aqueuse, les noyaux des leucocytes se colorent en violet foncé, les hématozoaires en violet plus pâle. Avec la solution de M. Marchoux et surtout après action de Talcool absolu,
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les noyaux des globules blancâ et les hématozoaires prennent une ointe rougeàtreou d'un rouge violacé.
M. le D' H. Vincent conseille de placer d'abord les lamelles couvre-objet sur lesquelles le sang a été desséché dans le mélange suivant qui détruit les hématies :
Solution aqueuse d'acide phénique à 5 p. 100 6 cm'
Eau saturée de chlorure de sodium 30 —
Glycérine 30 —
ile mélange est filtré. Le sang ne doit pas être desséché dans la flamme.
Pour la coloration des hématozoaires, M. Vincent se sert du bleu de méthylène phénique auquel il ajoute 1 à 2 pour 100 d'une solution aqueuse saturée de violet de méthyle*.
J'ai indiqué depuis longtemps le procédé qui consiste à traiter le sang par l'eau ou par l'eau acidulée à l'acide acétique : les hématies pâlissent, ce qui facilite la recherche des corps en croissant; pour la recherche et pour l'étude des corps sphériques je crois qu'il est préférable de ne pas détruire les hématies dont les rapports avec les parasites présentent un grand intérêt.
Grassi, Feletti et Mannaberg ont employé l'hématoxyline pour la coloration de l'hématozoaire du paludisme.
Le procédé de Mannaberg est long et compliqué*, mais il peut donner de bons résultats pour la coloration des nucléoles.
On laisse la préparation de sang desséché pendant 5' environ dans l'eau distillée, on sèche et on plonge la préparation, jusqu'à dissolution complète de l'hémoglobine, dans une solution très faible d'acide acétique (1 goutte d'acide acétique pour 20 cm' d'eau distillée).
La préparation complètement décolorée est placée pendant 2 h. dans le mélange fixatif suivant :
Solution aqueuse concentrée d'acide picrique 30 parties.
Eau distillée 30 —
Acide acétique cristallisé 1 —
En sortant de cette solution la préparation est transportée dans l'alcool absolu; on l'y laisse pendant 2 h.; après quoi elle est mise ilans la solution alunée d'hématoxyline dans laquelle elle doit séjourner de 12 à 24 h.
