MICROMÈTRE

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N» 1 , moins la lentille inférieure . . .

1 Tube fermé

DE l'emploi du microscope. il

Il est d'autres instruments qui ne sont pas absolument indispensables à l'anatomiste; cependant, comme dans certaines circonstances ils peuvent rendre des services , je crois devoir également en donner la description : je veux parler de l'appareil de polarisation, du goniomètre et du compresseur.

■ Appareil de polafisation. Pour étudier les objets dans la lumière polarisée, on place sous la préparation, c'est-à-dire on fixe à la platine du microscope un prisme de spath d'Islande (dit de Nicole). Ce prisme est taillé dans un rhomboèdre naturel de spath ou carbonate

Fie. IV. Appareil . ^ ..... • f r i

de polarisation, (Je chaux, maticrc qui jouit de la propriété de fournir deux images d'un même rayon de lumière. Pour obtenir un faisceau de lumière polarisée, on élimine l'un des deux rayons en sectionnant le rhomboèdre par un plan passant par les deux angles trièdres AB et en réunissant les deux parties ainsi obtenues par une couche de. baume de Canada. Les considérations sur lesquelles on s'appuie pour expliquer comment l'un des deux rayons est réfléchi par la lame de baume de Canada sont du domaine des traités de physique, auxquels nous renvoyons. Qu'il nous suffise de savoir que par ce moyen le faisceau de lumière provenant du miroir est complètement polarisé.

Si on examine un cristal dans celte lumière, on n'aperçoit rien de particulier; mais si on place dans l'oculaire ou dans le corps du microscope une plaque de tourmaline ou un autre prisme de Nicole , de manière que leurs plans de polarisation soient croisés à 90 degrés, la lumière du

champ du microscope sera éteinte.

Au lieu d'un prisme de Nicole ou d'une tourmaline, on peut employer un rhomboèdre de spath (fig. V) posé à plat sur l'oculaire et dans lequel on élimine simplement l'un des rayons, en couvrant la face su-

FiG. V. Rhombe (le spath.

périeure d'un disque métallique percé d'un trou; ce moyen offre l'avantage de transformer instantanément l'observation ordinaire en observation dans la lumière polarisée, puisqu'il suffit de poser ce rhombe de spath sur l'oculaire. De plus, si on veul examiner l'objet dans les différents points de croisement des plans de polarisation , il n'y a qu'à tourner ce rhombe. On donne le nom d'analyseur à l'appareil supérieur, qu'il soit rhombe de spath, prisme de Nicole on tourmaline.

Si, d'après l'idée de Biot, on interpose entre les deux appareils, soit au-dessus, soit au-dessous de l'objet, une lame de gypse (sulfate de chaux), les phénomènes produits par certains objets prennent un éclat remarquable. On peut distinguer certaines nuances mal définies dans la simple lumière polarisée. Ces lames de gypse donnent une teinte uniformément colorée au champ de la vision ; cette teinte dépend de l'épaisseur de la lame; la teinte la plus propre à faire ressortir les détails délicats est le bleu violet.

Amici a depuis longtemps proposé d'ajouter au-dessus du prisme inférieur une lentille convergente très-forte, de manière à illuminer l'objet par un faisceau de lumière po-

DE l'emploi du microscope. 43

brisée et convergente; cela permet de pousser les investigations avec des objectifs plus forts. On peut réunir les deux perfectionnements: lames de gypse et lentille convergente, et c'est jusqu'ici l'appareil le plus parfait que nous connaissions.

Le goniomètre est un instrument destiné à mesurer les angles des cristaux. Il se compose essentiellement: 1° d'un cercle divisé, fixé au milieu du corps du microscope dans une position horizontale; 2° d'un oculaire garni d'une division micrométrique semblable au micromètre ordinaire, c'est-à-dire formé de lignes parallèles également espacées; 3° d'un index ou alidade attaché à l'oculaire, de telle sorte que, quand celui-ci tournera, il entraînera l'index mis en contact avec le cercle divisé.

Si donc on veut mesurer l'angle d'un cristal , il faudra amener un côté de cet angle en contact avec une des lignes du micromètre oculaire; ce qui s'effectue en faisant tourner celui-ci. On lira et on notera sur le cercle divisé le point où s'est arrêté l'index; puis continuant à faire tourner l'oculaire jusqu'à ce que l'autre côté de l'angle vienne coïncider avec une ligne du micromètre, on n'aura qu'à lire sur le cercle divisé l'espace parcouru par l'index. Cet espace est l'angle cherché.

Les cristaux à mesurer doivent être placés autant que possible bien horizontalement, afin que les deux arêtes constituant un angle soient également au foyer.

Le compresseur se compose d'une plaque métallique percée d'un trou à son centre , garnie d'une lame de verre, destinée à recevoir les préparations. A l'une des extémités

de la plaque est fixé un levier porteur d'un disque garni d'une autre petite lame de verre venant se présenter audessus de celle de la plaque fixe. Une vis de rappel , agissant sur l'extrémité externe du levier, opère une pression constante sur le disque supérieur. En plaçant un objet entre ces deux disques, on a ainsi le moyen de le comprimer et de l'écraser à toutes les épaisseurs nécessaires à l'observation.

Ce compresseur a été modifié par M. de Qualrefages, de telle sorte qu'il peut se retourner et présenter ainsi à l'observation les plans inférieurs d'un objet.

Préparations microscopiques. Les instruments les plus utiles pour les préparations microscopiques sont : des scalpels ordinaires, des pinces ordinaires et des pinces à mors très-fins; des ciseaux grands et petits, droits et courbes sur le plat; des aiguilles montées comme les aiguilles à cataracte et de différentes formes; des plaques de verre, des baguettes de verre pour prendre les réactifs.

On peut, avec des manches façonnés à la manière des aiguilles à crochet dont se servent les brodeuses, avoir des aiguilles mobiles de toutes les formes, qu'on fixe dans le manche au moyen d'une petite vis.

Le rasoir sert à pratiquer des coupes dans des tissus soit frais et mous, soit préalablement durcis par certains réactifs ou simplement desséchés. Il faut bien avouer que c'est encore le meilleur des instruments tranchants dont on puisse se servir. Le couteau à double tranchant de Valentin , qui théoriquement paraît devoir donner de bons résultats , ne peut servir pour faire des coupes très-minces,

PRÉPAllATIONS MICROSCOPIQUES. 15

car lorsque les lames sont Irès- rapprochées l'une de Tau Ire, elles agissent comme un seul tranchant, et le but cherché est complètement manqué. Les autres instruments connus n'offrent aucun avantage sur le rasoir qui, du reste, suffit largement dans la majorité des cas; avec un peu d'habitude on pratique des coupes assez étendues et suffisamment minces pour les études micrographiques. J'ai vu, il est vrai, de très-belles coupes de moelle épinière, qu'on n'obtiendrait pas avec le rasoir, mais qu'on n'obtiendrait également pas avec les instruments qui sont connus; il est fâcheux que le procédé de section auquel je fais allusion soit tenu dans le plus grand secret.

Les plaques de verre sont de deux sortes : la grande plaque, la petite plaque ou plaque à couvrir. C'est sur la grande plaque que l'on place les préparations, et on les recouvre avec la petite plaque , afin que le verre de l'objeclif ne plonge pas dans le liquide et pour que la monture en cuivre ne soit pas atteinte et détériorée par les vapeurs des acides qu'on mélange souvent avec l'eau distillée qui baigne l'objet soumis à l'examen microscopique. D'habitude on a des plaques à couvrir d'épaisseur variable, et l'on se sert des plus minces pour étudier avec les objectifs les plus forts dont le foyer est, comme nous le savons, très-court; on les emploie aussi pour recouvrir l'es préparations à conserver, afin qu'elles puissent être étudiées avec tous les grossissements possibles.

Réactifs. Les réactifs les plus usités sont :

L'acide acétique ,

L'acide nitrique ^

L'acide chlor hydrique , L'acide sulfuriqiie^ L acide chromique.

L'ammoniaque liquide, La potasse caustique , La solution aqueuse d'iode , La solution du carmin , L'éther sulfurique , Le chloroforme j Le nitrate d'argent.

L'acide acétique est tout à fait indispensable dans les recherches micrographiques. Sa propriété essentielle est de faire pâlir, gonfler et, à la longue, de dissoudre certains éléments anatomiques , comme par exemple les fibres conjonctives, les fibres musculaires et les jeunes cellules. Or, comme on rencontre presque partout du tissu conjonctif et qu'il peut renfermer et cacher des éléments de toute nature, il est facile de comprendre qu'à chaque instant on sera forcé d'avoir recours à l'acide acétique, afin de démasquer ces éléments logés au milieu des faisceaux de fibres connectives. Quand on veut conserver ce liquide à l'état de pureté et en faciliter l'emploi , il faut percer un bouchon et y enfoncer un petit tube effilé dont la pointe soit dirigée en haut; alors, quand on veut quelques gouttes d'acide, il suffit de renverser le flacon; les gouttes sortent par le tube , et de cette façon le liquide reste toujours pur.

Les acides nitrique et chlorhydrique servent principalement à déceler la présence des sels calcaires dans les tissus.

PnÉPARATlONS MICROSCOPIQUES. d7

L'acide chromique est tout aussi indispensable que lacide acétique; mais il iaut un peu d'habitude pour le manier convenablement. On emploie l'acide chromique pour faire durcir les tissus, afin de pouvoir pratiquer des coupes assez minces et étudier la structure du tissu. Il a l'immense avantage de ne pas altérer la forme des éléments anatomiques; il conserve parfaitement les cellules et même les globules sanguins, qui sont peut-être les éléments les plus délicats de l'organisme. Ainsi quand on plonge dans ce liquide un tissu très-vasculaire, les globules rouges qui sont dans les vaisseaux restent sur place comme enchâssés dans la fibrine du sang, et Ton distingue parfaitement ces canaux qui autrement seraient invisibles, et l'on peut très-bien en suivre la distribution.

L'acide chromique est encore le meilleur réactif pour faire durcir le tissu nerveux sans en altérer les éléments; il vaut mieux sous ce rapport que l'alcool. Il est également d'un précieux secours pour l'étude des glandes et en général pour tous les tissus délicats et ceux où prédomine l'élément cellulaire. Son mélange avec l'eau ne doit jamais donner une couleur foncée; c'est à la teinte jaune vin de Madère que l'on doit s'arrêter; si l'on va au delà, le tissu durcit trop; il devient friable, se brise sous le rasoir, et du reste les éléments anatomiques s'altèrent dans leur forme.

Dans les premiers 'temps qu'un tissu est soumis à l'action de l'acide chromique, il faut changer de liquide chaque jour trois ou quatre fois de suite; puis on peut laisser les choses sans changement pendant plusieurs

MOIIEL. llislOl. 2

jours et même plusieurs semaines. Il faut se garder de plonger dans le liquide des morceaux Irop volumineux, car ils ne s'imprégneraient pas bien. La durée pendant laquelle le tissu à étudier doit plonger dans l'acide chromique, varie avec chaque espèce d'organe et avec l'état particulier du même organe. Mais d'habitude il suffit de quelques jours pour obtenir une consistance qui permette défaire des coupes aussi minces que possible.

L'ammoniaque liquide et la potasse caustique ont la propriété de pâlir, de gonfler et de détruire la plupart des éléments anatomiques; il n'y a que la fibre élastique et les cellules cornées qui résistent à l'action de ces agents énergiques. Aussi ne les emploie-t-on que dans les recherches expéditives et surtout dans le cas où l'on veut constater la présence de fibres élastiques dans les crachats d'un malade supposé atteint de phthisie pulmonaire en voie de ramollissement. Cependant il faut dire que l'ammoniaque maniée avec précaution peut rendre quelquefois les mêmes services que l'acide acétique.

La solution aqueuse d'iode sert à déceler la présence des corps amyloïdes du tissu nerveux et la dégénérescence amyloïde, qui a plus spécialement pour siège le système vasculaire sanguin et en particulier les capillaires et les petites artères. On baigne la préparation dans la solution étendue; quelquefois la réaction est instantanée; mais le plus souvent elle se fait attendre quelques minutes. Alors on volt le corps amyloïde se colorer en bleu violet sale; quant aux tissus atteints de dégénérescence amyloïde, ils prennent une teinte plus franchement rouge. Dans cer-

PRÉPAr.ATIONS JIICROSGOPIQUES. 19

laines circonstances encore indélerminées , la réaction s'opère très-difficilement ou même pas du tout; alors, pour la provoquer, on a recours à l'acide sulfurique, que l'on ajoute en très-petite quantité.

L'étlier et le chloroforme servent à indiquer la présence des corps gras et à les dissoudre; le chloroforme est d'un emploi plus facile, parce qu'il s'évapore moins rapidement.

On emploie la solution de carmin pour colorer et rendre par cela même plus apparents certains éléments anatomiques et plus particulièrement l'élément cellulaire. On a eu surtout recours à ce liquide pour les préparations du tissu nerveux. Des coupes fraîches des parties grises des centres nerveux ou bien des lamelles de ce tissu durci par l'acide chromique ou l'alcool, plongées dans la solution de carmin pendant six, douze, vingt-quatre heures, s'imprègnent de fa matière colorante et deviennent uniformément rouges. Si on les traite ensuite par l'acide acétique, la matière colorante se fixe principalement dans les cellules et les cylindres d'axe des fibres nerveuses. Les fibres musculaires lisses, les cellules plasmatiques et les cellules épit-héliales en général oiTrent, sous ce rapport, la même réaction que les cellules nerveuses. On a avancé à tort que les noyaux seuls ont la propriété de fixer la couleur à l'exclusion des cellules; si les noyaux paraissent plus rouges, c'est que naturellement ils sont plus foncés; on observe dans ce cas le même effet produit par la peinture en teinte plate sur un dessin lithographique.

Depuis quelque temps on emploie en Allemagne le ni-

iralc d'argent pour certaines recherches de structure. Cette substance a la propriété de colorer en brun la substance conjonctive du tissu et de respecter les cellules, dont elle ne fait que tracer les contours en passant dans les interstices qui les séparent. C'est au moyen de ce réactif que Recklinghausen , de Berlin, a cherché à établir que les capillaires lymphatiques sont revêtus d'un épithélium. Les quelques essais que j'ai faits avec cette substance m'ont prouvé qu'elle rendra de grands services entre des mains habiles (voir à ce sujet un article de M. Cornil, dans les Archives générales de médecine, février 1863, p. 214),

Enfin, je dirai que les injections destinées aux études microscopiques doivent être faites avec des matières trèspures. La couleur à l'huile des peintres, délayée dans de l'essence de térébenthine, m'a parfaitement réussi pour certains organes (foie, rein, intestins, muqueuse linguale). On peut également employer la colle de poisson, que l'on colore soit avec le carmin, soit avec le jaune de chrome ou bien encore avec l'encre de Chine. Du reste, les matières à injection sont très-variées, et si l'on veut avoir à ce sujet des détails précis, il faut consulter le livre de l'habile anatomiste de Vienne, Hyrtl, intitulé: Hcmdbiich der praMischen Z erg lied erungskunst. Vienne 1860.

L'instrument qui me paraît encore être jusqu'à présent le plus commode pour les injections, est la seringue de nos amphithéâtres.

Préparations et conservations des pièces. Il faut avoir à sa disposition les substances suivantes :

Eau sucrée j

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Glycérine, Baume de Canada , Benzine ,

Essence de térébenthine, Solution de gomme arabique , Bitume de Judée.

L'eau sucrée, de consistance sirupeuse, me paraît être un des meilleurs liquides conservateurs. Je possède des pièces qui sont plongées dans ce liquide depuis trois, quatre et même six ans, et qui n'ont subi aucune altération (ovaire, peau avec corpuscule du tact, glandes salivaires et sudoripares, muscles, cornée, poils etc.). Elle se fabrique avec de l'eau distillée à laquelle on ajoute quelques gouttes d'alcool afin de prévenir la formation des sporules. L'eau sucrée, faite tout simplement de cette façon, vaut mieux que le sirop blanc; celui-ci à l'inconvénient de rendre les pièces trop transparentes, et par cela même de faire disparaître les contours naturellement pâles de certains éléments. Le même inconvénient est à reprochera la glycérine, à l'essence de térébenthine et au baume de Canada ; aussi je n'emploie que l'eau sucrée pour la plupart des préparations.

"Voici comment il faut procéder à la préparation des pièces qui doivent être conservées: la grande plaque de verre étant bien essuyée et parfaitement propre, on y dépose quelques gouttes d'eau sucrée bien limpide et bien pure, on place ensuite la pièce dans ce liquide et on la recouvre avec la petite plaque mince. Ceci fait, on mastique les deux plaques de verre de façon à ce que la pièce

cL l'eau dans laquelle elle plonge soient louL à fait à l'abri du contact de l'air extérieur. Il faut , pour que le mastic tienne bien, que le liquide ne dépasse jamais les bords de la petite plaque à couvrir; il est aussi très-souvent nécessaire de comprimer légèrement la préparation pendant que le mastic sèche, afin que plus tard elle reste fixée à la même place; la compression s'exécute au moyen de petits cylindres de plomb de 8 à 10 millimètres de largeur et de 2 centimètres de longueur. Quand on se sert de ces petits compresseurs, on doit les placer sur la plaque à couvrir avant de mastiquer celle-ci.

Un excellent mastic, et qu'on emploie habituellement, est le bitume de Judée dissous dans l'essence de térébenthine ou la benzine. La dissolution doit avoir une consistance crémeuse. Le bitume se fond bien plus rapidement dans la benzine et sèche bien plus vite à l'air que lorsqu'on le traite par l'essence de térébenthine. Pour mastiquer la préparation, on prend le bitume avec un petit pinceau ou une petite baguette et on l'étalé au pourtour de la plaque à couvrir et on laisse sécher en pleine air. Un cordon de bitume de i millimètre d'épaisseur et de 6 à 7 miUimètres de largeur suffît pour souder solidement l'une à l'autre les deux plaques de verre.

Il arrive quelquefois que, malgré les plus grandes précautions de l'opérateur, le mastic se fendille, et qu'à travers les fissures imperceptibles l'air se fait jour et pénètre dans le liquide conservateur; alors celui-ci s'évapore insensiblement et la pièce se dessèche. Dans ce cas, lorsqu'on veut conserver la préparation, il la faut plonger

PRÉPARATIONS MICROSCOPIQUES. là

dans l'eau pendant une huitaine de jours; le mastic se détache du verre et l'on prend la pièce, qu'on place ensuite sur une aulre/plaque. Mais quand on ne veut pas conserver la préparation, ou lorsque celle-ci est altérée, on peut la plonger pendant quelques heures dans la benzine qui dissout le bitume, et alors on n'a plus qu'à nettoyer les plaques de verre. J'ai remarqué que le bitume dissous dans l'essence de térébenthine ne se fendille presque jamais.

Quand on fait des préparations simplement destinées aux démonstrations d'un cours, et qui doivent être conservées seulement pendant quelques jours ou quelques semaines, on emploie la solution de gomme arabique pour souder les plaques de verre; alors il suffit de plonger celles-ci dans l'eau pendant quelques minutes pour les séparer, et il est plus facile de les nettoyer.

On agit de la même façon avec les préparations plongées dans la glycérine; mais il est facile de comprendre qu'on ne doit pas mastiquer les préparations traitées par l'essence de térébenthine, car celle-ci dissout le bitume de Judée. On n'emploie pas non plus le bitume pour les préparations emprisonnées dans le baume de Canada, car celui-ci, en se desséchant, soude très-solidement les deux plaques de verre l'une à l'autre. Cette substance peut du reste être parfaitement remplacée par l'eau sucrée. Elle n'est plus guère utile que pour les pièces injectées et desséchées, auxquelles elle donne une grande transparence. Il est fort difficile de faire des préparations très-pures avec le baume ; il reste presque toujours des bulles d'air dans cette subs-

tance , et pour les en chasser on est obligé de les ramollir soit par une assez forte chaleur soit par l'essence de térébenthine.

Mais avant tout, il faut que le micrographe soit d'une propreté excessive dans toutes ses manipulations, sans cela pas de préparations convenables.

CELLULES ET ÉriïIIÉLlUMS.