GÉNÉRALITÉS
Aucune idée préconçue ne nous a guidé dans Île choix des antiseptiques employés, étant persuadé que presque tous les produits chimiques peuvent avoir une influence sur la morphologie des microbes. Nous nous sommes seulement attaché à n'utiliser que des corps solubles dans l’eau, car les autres solvants, l’alcool par exemple, sont susceptibles d’agir par euxmêmes, compliquant ainsi l'interprétation des résultats.
Nous avons, d'autre part, choisi le Sireptocoque comme sujet d'expérience, parce que les cocci, en général, ont été peu utilisés dans les recherches sur les variations morphologiques.
Le problème à résoudre consistait à provoquer chez le Streplocoque des modifications de forme en changeant ses conditions de vie, et, en particulier, en
ajoutant au milieu de culture des substances antisep-
RCE
tiques à des concentrations telles que la zone dysgénésique soit atteinte. L'équilibre s'établit alors entre le corps microbien et le milieu extérieur et les formes anormales apparaissent.
Tout se ramène donc à une question de doses. Il faut d’abord, pour chaque produit, déterminer la dose inhibitrice, puis se cantonner dans la zone qui la précède immédiatement.
Nous envisagerons successivement : 1° le milieu nutritif ; 2° les Streptocoques employés ; 30 les solutions d’antiseptiques ; 4° une technique spéciale pour l’anaérobiose ; 5° la température de culture ; 6° la solution colorante ; 70 l'action particulière de chaque antiseptique sur la morphologie du Streptocoque : À, en aérobiose, avec ou sans glycérine ; B, en anaérobiose, avec ou sans glycérine ; 8° les considérations générales sur l’ensemble des expé-
riences.
1° Le milieu nutritif.
a) Composrrion. — C’est un bouillon synthétique
renfermant :
MD SD ANIVNUTE 2e seven mea Ir Peptone bactériologique spéciale Byla........ 20 gr. GINCÉTINE De MO OMEnN APE. temN ane 50 gr.
DATICIS HÉROS Te Se. 1.000 cm
La peptone employée est une peptone pancréatique de viande de bœuf ; elle est d’une couleur blanc jaunâtre, de saveur amère, complètement
soluble dans l’eau froide.
Le milieu sans glycérine a la même composition, les 50 gr. de glycérine étant remplacés par de l’eau distillée.
Le bouillon est d’abord chauffé à 1259 pendant vingt minutes, filtré et réparti en tubes de 10 em*. La stérilisation est faite à: 120° pendant vingt mi-
nutes.
b) Réacrion. — L’alcalinisation du milieu est obtenue par addition de soude au 1/3. Le pH est de 7,8 par la méthode colorimétrique (échelle au bleu de bromothymol de Clark) ; il suffit d’ajouter à 10 cm° de bouillon, X gouttes de l'indicateur. L'usage du comparateur est nécessaire car le bouillon est ambré et tend à donner, avec le bleu, des teintes verdâtres. Mesuré électrométriquement, par la méthode des piles de concentrations de Nernst (avec un }, le pH du
bouillon, avec ou sans glycérine, s'établit également e (>)
système à électrode au calomel d'Ostwald
die 2° Les Streptocoques employés.
Ce sont des Sireptocoques isolés de pus d’abcès et réensemencés sur bouillon. Leur culture se fait parfaitement sur le milieu glycériné ou non. Cependant, dans ce dernier cas, les cocci paraissent un peu plus gros. Sur gélose, ils-donnent les colonies classiques (en gouttes de rosée ». La gélatine n'est pas liquéfiée.
Les passages sur bouillon ont été effectués quoti-
= Qi —
diennement. Nous n'avons ainsi employé que des cultures jeunes. Les expériences faites avec des Strepltocoques fraîchement isolés ont d’ailleurs donné les mêmes résultats que celles où des germes, depuis longtemps réensemencés, avaient été employés. Pour pratiquer les ensemencements, nous avons adopté la pipette Pasteur qui permet d'opérer avec une goutte de bouillon cultivé, c’est-à- dire sur une quantité relativement importante de germes, toutes
les précautions de stérilité étant prises.
3° Les solutions d’antiseptiques.
Nous avons préparé nos solutions dans des ballons jaugés de 50 cm. Théoriquement, le seul moyen d'avoir une ‘solution stérile serait, après dissolution du produit, de passer le tout à l’autoclave. En pratique, cette technique est irréalisable car la plupart des antiseptiques employés sont plus ou moins altérés par la chaleur. Aussi avons-nous opéré de la façon suivante : on stérilise à 120°, pendant vingt minutes, les ballons de 50 cm° remplis aux 3/4 d’eau distillée. L’antiseptique est pesé et introduit dans le ballon. On complète à 50 cm avec de l’eau distillée stérile. La forte concentration de l'antiseptique assure la parfaite stérilité de la solution. La solution antiseptique est ajoutée dans les tubes de bouillon, aux doses choisies, avec une pipette de r em, graduée en dixiè-
mes, stérile.
J. Pascal)
ee
Le calcul des dilutions est très simple, les tubes
contenant 10 em° de bouillon.
4 Technique spéciale pour l’'anaérobiose.
Par suite de la nécessité d'assurer une répartition homogène de l’antiseptique dans le bouillon, nous nous sommes arrêté à la technique suivante : les tubes de bouillon sont portés, pendant dix minutes, à l’autoclave à 110°, pour chasser l’air dissous, puis refroidis rapidement pour éviter sa redissolution, On ajoute alors la solution antiseptique et, aussitôt après, on coule dans chaque tube une couche de lanoline anhydre fondue d'environ r cm. de hauteur. La lanoline forme rapidement, en se solidifiant, un bouchon adhérent à la paroi du tube.
Pour l’ensemencement, on utilise une pipette Pasteur dont l’effilure a été recourbée à angle droit, à son extrémité, ceci afin d’en éviter l'obturation par la matière grasse. La lanoline ayant été fluidifiée sur la veilleuse d’un bec de Bunsen, on glisse la pipette chargée de culture le long de la paroi du tube, on traverse rapidement la couche graisseuse et, une fois dans le bouillon. on laisse apparaître un léger nuage de culture au bout de l’effilure. On retire la pipette. Le bouchon de lanoline se reforme. On agite alors pour homogénéiser.
Les prélèvements se font suivant la même technique. Quand la pipette chargée est sortie du tube, elle est
graisseuse à son extrémité. Pour éviter que des glo-
bules de lanoline ne viennent souiller la préparation, il suffit de casser l’effilure au-dessus de la partie graissée.
Cette technique nous a donné entière satisfaction. Si elle ne conduit pas à une anaérobiose stricte, elle nous à permis cependant de dégager des conclusions intéressantes de nos expériences. D'ailleurs, un critérium du degré d’anaérobiose atteint peut être tiré du fait que des doses relativement considérables de pyrogallol, ajoutées au milieu, ne lui communiquent pas
la moindre trace de coloration brune.
9° Température de culture.
Toutes nos expériences ont été effectuées dans une chambre étuve à 250. À cette température, le temps de génération est plus long, il est donc probable que les modifications morphologiques y prennent plus
d'ampleur.
6° Solution colorante.
Nous avons utilisé, pour toutes nos préparations,
la solution de fuchsine suivante :
ROSE 2 nee ae med ni 0 gr. 10 ATCOOMAEOUPRE ER EEE 1 em?
Fan dis er At Pere 100 cm°
Après étalement, séchage par agitation à l'air, fixation par l’alcool-éther, on laisse agir le colorant
quelques secondes.
LOGE 7° Action particulière de chaque antiseptique
sur le Streptocoque.
A. — Phénol.
Solution aqueuse à 2%.
AÉROBIOSE.
Milieu glycériné : la zone intéressante est réduite aux dilutions de 1/833, 1/625 et 1/550. On y observe de nombreuses chaînettes mixtes : cocci et bâtonnets rarement grossis. La dose inhibitrice correspond à 1/660% 7
Milieu non glhycériné : le phénol est nettement plus toxique qu'en présence de glycérine. La dose empéchante se situe à 1/625. Aux dilutions plus fortes, il n’y a pas de grandes variations morphologiques, à peine quelques grossissements.
ANAÉROBIOSE.
Milieu glycériné: peu de modifications dans la forme des cocci. On note seulement un recul très net de la dose inhibitrice jusqu’à 1/366.
Milieu non giycériné : quelques cocci géants. Les doses limites de culture sont les mêmes qu’en bouillon glycériné.
Coxczusioxs. -— L'action du phénol sur le Strepto-
coque se traduit en aérobiose, par la formation de
CÉRRR EE
quelques allongements et gonflements. Elle permet de confirmer le fait connu que la glycérine diminue sensiblement le pouvoir antiseptique du phénol.
En anaérobiose, par contre, en dehors de modifications morphologiques peu importantes, la glycérine ne semble avoir aucune influence sur la dose inhibitrice.
B. —- Pyrocatéchine.
Solution aqueuse à 2%.
AÉROBIOSE.
Milieu glycériné : aux doses de 1/5.000 à 1/1.000, on constate, dans les cultures, des chaînettes mixtes très nombreuses. Les bâtonnets sont longs et nets. Tous les éléments sont, en général, très grossis ou géants. Dose inhibitrice : 1/830.
Milieu non glycériné : mêmes constatations qu’en milieu glycériné. Les allongements sent particulière-
ment nombreux de 1/1.666 à 1/1.000.
ANAÉROBIOSE.
Milieu glycériné : la culture est plus rapide qu'en aérobiose. Dans l’ensemble, les éléments restent fins. IL y a formation de quelques bâtonnets.
Milieu non glycériné : culture rapide, mais les cocci sont le plus souvent géants, avec de rares allonge-
ments.
ConcLzusions. — En aérobiose, avec ou sans glycé-
Se
rine, les résultats sont identiques : production de formes allongées et de cocci géants.
En anaérobiose, les cocci restent fins dans le bouillon glycériné, alors qu'ils sont régulièrement grossis en l’absence de glycérine, ce qui indiquerait, dans ce dernier cas, une toxicité plus grande. La dose inhi-
bitrice est reculée en anaérobiose.
Nota. — Les cultures aérobies brunissent rapide-
ment.
