CHAPITRE PREMIER

Nous avons montré comment on peut, d’une façon générale, distinguer à la phagocytose deux facteurs principaux, en dehors du facteur opsonique dont nous reparlerons plus loin.

Ce sont :

1° L'activité leucocytaire ; 2° Le pouvoir leuco-activant du milieu.

Que l’on veuille examiner l’un ou l’autre, il faut : Une substance phagocytable ; Des phagocytes ; Un milieu favorable à la phagocytose.

Substance phagocytable. — Nous nous sommes exclusivement servis de levures de muguet tuées par le for- . mol.

Pour préparer une émulsion convenable, on se sert d'une culture de muguet, vieille au minimum de quatre jours. Une telle culture forme un tapis blanchâtre, épais, crémeux à la surface de la gélose. On prend à l’aide d’un fil de platine une bonne anse de culture et on la porte dans 5 centimètres cubes environ d'une

solution de formol à 10 p. 100. On laisse vingt-quatre heures.

Au bout de ce temps, on centrifuge, on décante, et l’on porte le culot formé de levures dans un premier tube de sérum artificiel. On lave ainsi deux ou trois fois. Après le dernier lavage et la dernière centrifugation, on porte le culot de levure dans un dernier tube contenant 5 centimètres cubes environ de sérum artificiel, on obtient ainsi une émulsion contenant en moyenne 60 à 70.000 levures par millimètre cube dont une goutte dans nos conditions d'expérience suffit pour obtenir une phagocytose convenable. Il va sans dire que si l’émulsion est trop riche, il suffit de la diluer légèrement; si elle est trop pauvre, on mettra deux et même trois gouttes d'émulsion *.

Une telle émulsion présente de multiples avanlages :

1° Les levures de muguet sont parfaitement dissociables et miscibles. L’émulsion est donc très exactement homogène, et la richesse de chaque goutte identique.

> Les levures de muguet étant extrêmement phagocytables, il suffit de fort peu de levures pour avoir une phagocytose convenable, on évite ainsi l'excès d’éléments non phagocylés qui peuvent, par leur simple superposition aux globules blancs, donner sur une préparation l'illusion de lenglobement.

1. N. B. — ITest d'ailleurs possible sans grosse cause d'erreur de se servir de levures vivantes ; en pareil cas, l'émulsion doit être renouvelée avant chaque recherche.

PHAGOCYTES 16

3° Leur fort volume, leur parfaite colorabilité, la vacuole qui dans les leucocytes ayant phagocyté entoure les levures, les rendent particulièrement faciles à numérer. |

4° Le formolage les transforme en particules inertes éliminant toute erreur d'interprétation provenant d’une quelconque modification de leur part.

»° Il permet d’avoir une émulsion constante au cours des divers examens.

Une seule précaution est nécessaire :

Les levures ayant une certaine tendance à déposer, il faut, avant d’en ajouter une goutte au milieu d’expérience, brasser l’émulsion à l’aide d’une pipette.

Phagocytes. — Nous nous servons des leucocytes du sang. Ceux-ci ne sont pas isolés par centrifugation, manœuvre longue, pouvant abîmer les leucocytes et n'arrivant jamais qu'à un isolement très incomplet. Par un artitice de technique, nous arrivons cependant à avoir des préparations suffisamment riches en leucocytes.

Pratiquement,nous prenons une goutte fine de sang prélevée au doigt par piqûre. Dans les très fortes leucocytoses (dépassant 30.000 leucocytes par millimètre cube) telles que celles que l’on observe dans les leucémies ou même dans certaines polynucléoses infectieuses, la goutte de sang sera prise extrêmement fine de facon à ne pas introduire une trop grande quantité de leucocytes dans le milieu. On pourra, pour plus de précaution, pratiquer une dilution au dixième dans du sérum citraté (v. plus loin). En réalité, on aspire aisé-

ment dans le bout d’une pipette une quantité de sang représentant environ un dixième de goutte.

Quand on veut apprécier l’activité des cellules d’exsudat, il est également nécessaire de pratiquer une dilution. On cherchera, en s’aidant au besoin de lhématimètre, d'obtenir une émulsion telle que la teneur en leucocytes soit à peu près celle du sang normal.

Il suffit d’ailleurs d’une approximation très relative, le nombre des leucocytes pouvant varier du simple au triple sans que le résultat soit modifié.

Milieu favorable. — Théoriquement, les milieux artificiels sont les meilleurs puisque toujours semblables à eux-mêmes.

Malheureusement, ils sont peu favorables à la phagocytose, si bien que Wright! les considère tout d’abord comme lotalement impropres.

Ceci n’est cependant pas tout à fait exact et quelques saprophytes dépourvus de virulence peuvent au bout d’une demi-heure être phagocytés dans le sérum artificiel.

Le fait que nous avons souvent observé a d’ailleurs été déjà relaté par Bordet *

On peut même en employant un milieu complexe, tel que le milieu de Fleig, dont nous nous sommes servis au début de nos recherches, obtenir des images très suffisantes. | | |

Cependant, pour la netteté des préparations, les

4, WRricur, Loc. cit.

2. Borper, Contrib. à l'étude du sérum chez les animaux vaccinés. Soc. roy. des sc. méd. Bruxelles, 1895, v. IV.