TOME Il

roforme donne une émulsion qui, centrifugée, conserve dans la solution limpide l’action neurolytique et hémolytique, mais n’est plus hémorrhagipare (ÎsHizAKA).

L'acétone. — Isuizaka en a essayé l’action sur le venin de Lachesis riukiuanus. Tous les corps actifs de la solution sont précipités. Le précipité est peu soluble dans l’eau, mais plus aisément dans les alcalis, lorsque le contact n’a pas été trop prolongé. Le filtratum n’est pas toxique.

Le toluol. — Il n’a pas d'action sur le venin de Lachesis riukiuanus.

L'éther de pétrole donne avec ce venin une émulsion qui, centrifugée, présente dans sa partie liquide toute la toxicité du venin.

L'orygène et l’eau oxygénée. — D'après Werr Mrrenezz et REICHERT ces substances sont sans action sur les venins de Crotale et de Cobra.

L'eau chlorée. —— o cc. 5 d’eau fraîchement chlorée ne détruisent pas la toxicité du venin de Crotalus adamanteus (W. M. et R.). Pour détruire celle du venin de Cobra, il faut, d’après les recherches de KanTHACK, un contact prolongé pendant 4 jours.

L'eau bromée. — Cette eau employée à saturation est très efficace et détruit le venin dans les tissus. A la dilution de 1 pour 3, elle n’a pas d'effet nécrosant sur les tissus ; mais l’application en est douloureuse. (CALMETTE).

L'iode et l’eau iodée n'’altèrent pas la toxicité du venin.

L'iodure de potassium n’a pas d’action sur le venin de Crotalus adamanteus; mais, mélangé à une solution d'iode (iodure de potassium ioduré, liqueur de Gram), il retarde considérablement l’action de ce venin (Werr Mrrenerr). Il donne un précipité soluble dans un excès de réactif.

Le trichlorure d’iode à 10 %. — 2 cc. de cette solution, ajoutés à 5 gouttes d’une solution étendue de venin de Cobra, en détruisent l’action toxique en 24 heures (KanrrHaAcx). Il donne aussi un précipité soluble dans un excès de réactif.

Les alcalis caustiques. — D'après Werr Mircuerz et RercuerT, l’hydrate de potasse neutralise l’action toxique d’un même poids de venin de Crotale (C. adamanteus et C. horridus); mais il faut une solution plus concentrée pour neutraliser le venin de Cobra. L’alcalinisation empêche la coagulation ultérieure des protéines du venin par la chaleur, mais n’en prévient pas l’inactivation. Si on neutralise le venin alcalinisé, il récupère la plus grande partie de sa toxicité.

L'hydrate de soude agit comme l’hydrate de potasse.

A. GAUTIER a constaté que la potasse, même étendue (de 1 à 1,5 %), mise en contact, ne fût-ce qu'un instant avec du venin de Cobra, le rend complètement inoffensif, même quand on neutralise aussitôt l’alcali ajouté.

A. J. Wazz a également constaté cet effet de la potasse caustique sur le venin de Cobra, mais après avoir neutralisé par l’acide acétique, il à vu réapparaître le pouvoir toxique. Cependant celui-ci était définitivement détruit quand la potasse avait agi seule pendant 20 heures.

Kanrrack a observé les mêmes faits avec la potasse et la soude.

L’ammoniaque. — Il en faut une grande quantité pour produire quelque modification de toxicité dans le venin de Crotalus adamanteus (Weir Mrrenezz et RetcnerT) ; elle n’a aucune action atténuante sur le venin de Vipère aspic (Fonrana). 1 gramme d’ammoniaque est sans action sur 1 milligramme de venin de Cobra (CALMETTE).

L'eau de chaux, le chlorure de calcium n’ont aucune action atténuante sur le venin de Vipère (Prisarix et BERTRAND).

Les acides. — Leur action est un peu variable, suivant leur nature

L'acide chlorhydrique. — Concentré, ne détruit pas l’action générale du venin de Crotalus adamanteus, mais seulement son action locale et ces résultats ne sont pas modifiés par la neutralisation de l'acide (Werm Mrrenezz et RercnertT). Il détruit la toxicité du venin de Lachesis riukiuanus à la température ordinaire, en 10 à 15 minutes (IsnizAKA).

L'acide bromhydrique. — I] doit être concentré pour détruire le venin de Crotale ; mais il n’a pas d'action marquée sur celui de Cobra.

L'acide sulfhydrique. — Son passage à travers une solution de venin de Lachesis riukiuanus produit un abondant précipité qui est beaucoup moins toxique que le venin. Mais le liquide centrifugé est toxique et perd une partie de son activité par la dessiccation (IsxizAKkA).

L'acide azotique. — 11 donne un précipité blanc avec le venin de Crotalus adamanteus ; filtratum et précipité sont inactifs ; le venin est donc détruit.

L'acide phosphorique. —- I n’a aucune action sur la toxicité.

L’acide sulfurique n'’agit que très peu sur le venin de Crotale ou de Cobra ; il ne donne aucun précipité avec les solutions de venin de Vipère, mais détermine après quelques minutes une belle coloration verte qui vire ensuite au violet.

L'acide acétique. — A faible dose, il ne détruit pas le venin de Crotale (Werr Mrrenezz et Reicnerr). D'après Ismizaka, à la dilution de 1 % et agissant pendant 24 heures, à la température de 37°, il fait perdre au venin de Trimeresurus riukinanus son action hémorragique.

L’acide tannique. — Il exerce peu d'action sur le venin de Crotale, et n’en a aucune sur le venin de Cobra (W. Mrrenezz et REICHERT).

L'acide phénique à 5 % ne détruit pas l’action de venin de Cobra, même quand il est mélangé avec lui avant d’être inoculé (CALMETTE).

L'acide chromique. -* En solution à 1 %, il détruit la toxicité du

venin de Vipère aspic, comme l’a montré KauFMaANx ; mais il a une action nécrosante sur les tissus qui doit en faire restreindre l'emploi.

L'acide picrique. -— 11 forme avec le venin un précipité soluble à chaud, comme les protéides.

Le carbonate de potassium est sans effet sur le venin de Crotale (Werr Mrrenezz et REICHERT).

Les carbonates de sodium et d'ammonium à 1/10, ne déterminent aucune atténuation du venin de Cobra dans les proportions de 100 parties de ces sels à r de venin. (CALMETTE).

Le persulfate d'ammonium ne donne pas de précipité avec le venin de Cobra ; dans la proportion de 0 de sel à 1 de venin, il en empêche l’absorption.

Les phosphalte et sulfate d'ammonium donnent avec le venin de Cobra un précipité blanchâtre qui est toxique. (CALMETTE).

Le sulfate de fer ne détruit pas la toxicité du venin de Crotale (Werr Mrrcnezz et REICHERT).

Le permanganate de potasse. — 3 milligrammes de ce sel suffisent à détruire complètement 15 milligrammes de venin desséché de Crotalus adamanteus ; ceux de Cr. horridus et de Cobra sont également détruits in vitro, mais non in vivo. DE Lacerpa a montré l’action de ce corps sur le venin des Serpents, notamment celui de Bothrops (Lachesis), quand on le mélange au venin avant l'injection. Cependant Coury, en opérant avec le même venin fait des réserves sur les propriétés thérapeutiques du permanganate qui ne neutralise pas le venin in vivo. VULPIAN considère que l’action locale du permanganate est très limitée en raison de sa faible diffusibilité et de sa décomposition rapide en hydrate de bioxyde de manganèse. Kaurmanx le considère néanmoins comme un topique excellent du venin de Vipère. Kawrrack à constaté qu'avec le venin de Cobra, le permanganate donne un précipité non toxique après un contact de 24 à 48 heures. D'autre part, CALMETTE à montré que si on inocule le permanganate à l’endroit même où a été inoculé le venin et immédiatement après, l’animal ne succombe presque jamais, tandis que l’inoculation tardive est inefficace.

L'azotate d'argent. — I n'a pas d'action marquée sur la toxicité du venin de Crotalus adamanteus quand les deux substances sont employées à poids égaux ; mais à plus forte dose, le nitrate détruit le venin. D’après Cazuetre, la solution de nitrate à 1 % ne détruit pas le venin de Cobra.

Le bichlorure de mercure. — Mélangé avec un poids égal de venin de Crotale ou de Mocassin (Ancistrodon), il forme un précipité qui, lavé à l’eau et injecté au pigeon, n’accuse aucune toxicité (Wir Mircnerz et Rercnerr). La solution de bichlorure à 1 pour 1.000 donne avec le venin de Cobra un précipité soluble dans un excès de réactif, mais qui est aussi toxique que le venin lui-même (CALMETTE). +

Des

Le chlorure de fer précipite les protéines toxiques du venin de Crotale et en détruit la toxicité. Mais ce produit n’a pas d'action marquée sur le venin de Cobra, bien qu'il ait pu dans certains cas retarder la mort : Weir Mrronerr, et ReicHErT en concluent que le principe actif de ce venin, analogue à la peptone, n’est pas modifié par le chlorure.

Ils ont essayé aussi le fer dialysé, qui se montre inactif sur le venin de Mocassin.

Le chlorure d’or. — Launer-BrunroN et Fayrer ont vu qu'il détruit les venins avec lesquels on le met en contact : en solution à 1 4, détruit in vitro le venin de Cobra, en le précipitant.

Le chlorure de platine a une action destructive, maïs très lente (Car.- METTE).

Le tétrachlorure de platine. — La solution aqueuse et diluée à 5 % détruit la toxicité du venin de Cobra in vitro, dans les proportions de 30 centigrammes de tétrachlorure pour 18 de venin ; mais ne peut servir d’antidote. (PEDLER).

Les hypochlorites. — Le chlorure de chaux en solution à 1 pour 12, qu'on dilue avant l’usage dans 5 à 6 volumes d’eau distillée détruit les propriétés toxiques du venin de Cobra et le précipite (CALMETTE).

D'après MM. Puisarix et BERTRAND, cette action est due en propre à l’hypochlorite de calcium, les autres produits de la réaction de l’eau sur le chlorure de chaux (hydrate de chaux et chlorure de calcium), n'ayant aucune propriété atténuante.

Les essences. — D'après CALMETTE, les essences, telles que celles de romarin, de girofle et de citron, déterminent dans les venins un précipité, mais n’en modifient pas la toxicité.

Les sucs digestifs et Les ferments. — Le mécanisme par lequel les toxines microbiennes et les venins traversant le tube digestif sans produire d'accidents a fait l’objet de nombreux travaux. Depuis que le Professeur A. GAUTHIER a montré (1881) que le suc gastrique ne joue aucun rôle dans la neutralisation des venins, c’est du côté de l'intestin que l’on a cherché la cause de cette inoccuité.

D'après KanrHack (1892), la digestion pancréatique artificielle détruit en grande partie la toxicité du venin de Cobra, tandis que la digestion pepsique ne fait que retarder légèrement l’action du venin. D'après C. Prisauix, le venin de Vipère perd dans l'intestin son action immunisante. D'autre part, la bile a été considérée partout et de tous temps comme ayant des propriétés antivenimeuses manifestes, et on la retrouve dans la plupart des remèdes populaires, soit seule, soit associée au venin et à d’autres substances.

On sait par ailleurs que les serpents, qui avalent d’une manière

constante et par conséquent à forte dose, leur salive venimeuse, n’en sont pas empoisonnés, bien qu'il soit possible de les tuer par l’inoculation de leur propre venin. Celui-ci est donc vraisemblablement détruit chez l’animal même qui le produit, et c’est en plus grande partie par la bile que s'effectue cette destruction. Les expériences de Fraser, de Prisauix, de WEHRMANN (1897), sont à ce point de vue très démonstratives.

Fraser montra que des doses très minimes de bile de serpents ou de mammifères sont capables de neutraliser l’action d’une dose mortelle de venin de Cobra d'Egypte (Naja haje), ou de Cobra de l'Inde (Naja tripudians) et que la bile de serpents venimeux est environ 7 fois plus active que celle de bœuf dans cette neutralisation, Il employa avec succès dans ses expériences la bile de Naja, de Bitis, de Crotale, de Tropidonotus natrix, de Bœuf, de Lapin et de Cobaye ; et il pense que la bile de tous les animaux est antivenimeuse à des degrés divers. Le précipité alcoolique de bile est très toxique par rapport aux substances dissoutes, qui le sont très peu ; mais la bile tout entière est plus neutralisante que le liquide et le précipité mélangé provenant de l’action de l'alcool ; celui-ci a done insolubilisé définitivement l’une des substances actives de la bile. Une seule expérience, faite avec le précipité alcoolique de la bile de Bitis, a montré à Fraser que l'injection sous-cutanée de o milligr. o12 de ce précipité faite à un rat blanc qui a reçu 30 minutes auparavant une dose de 3 milligrammes par kilog de venin de Naja tripudians, prévient la mort du sujet, et n’est suivie que d’inappétence et d’un peu d'’incoordination.

En raison de la nécessité d'intervenir assez tôt après l'injection de venin, FRAsER pense que la bile ne présente qu’une faible valeur thérapeutique, à moins qu’en application externe et locale, et il en redoute par trop la toxicité.

Partant d'un autre point de vue, et dans le but de rechercher l’origine des substances antivenimeuses que l’on rencontre dans le sang et qui y sont déversées par le mécanisme de la sécrétion interne, C. Pmisazrx a recherché si les substances antivenimeuses provenant des glandes digestives ne seraient pas éliminées par la sécrétion externe, et ne contribue-

raient pas à neutraliser le venin dans l'intestin.

Il avait vu qu'il suffit de 20 à 30 milligrammes de précipité alcoolique de suc de pancréas de chien pour immuniser un cobaye contre une dose mortelle de venin de Vipère. Il rechercha si la bile aurait aussi cette action antivenimeuse sur le même venin. Il constata qu’un mélange de bile de Vipère et de venin, inoculé 10 à 15 minutes après sa préparation, reste complètement inoffensif. Pour neutraliser une dose de venin mortelle pour le cobaye, il faut 1/4 à 1/2 cc. de bile fraîche, soit 5 à 20 milligr. de bile sèche. Si au lieu de les mélanger, on inocule en même temps, mais en des points différents du corps, la bile et le venin, l’animal succombe : la bile n’agit donc pas in vivo comme antitoxique. Elle neutralise chimiquement le venin, et cette action est due aux sels biliaires, glycocholate et

taurocholate de soude. Cette propriété neutralisante est perdue par un chauffage à 120° pendant 20 minutes, soit de la bile, soit des sels.

Prisazix a, en outre, établi le pouvoir vaccinant de la bile et de quelques-uns de ses composés, que nous exposerons au sujet de la vaccination.

WEnrMANN confirme la propriété antivenimeuse de la bile avec celle de bœuf, d’anguille et de vipère. Il constate que le venin de Cobra perd sa toxicité quand il est soumis pendant 24 heures à l’action de la ptyaline. de la papaïne ou de la pancréatine. La présure, la pepsine et l’amylase réduisent légèrement la toxicité du venin, tandis que l’émulsine, la sucrase, l’oxydase des leucocytes et celle des champignons sont inactives.

FLexner et Nocucui (1903) étudient les effets de la pepsine et de la papaïne sur la toxicité des venins de Cobra, d’Ancistrodon contortrix et piscivorus et de Crotalus adamanteus, afin de différencier les constituants actifs de ces venins par leur résistance aux ferments. Ces auteurs ont vu que, en présence de o,8 pour 100 d’acide chlorhydrique, la pepsine détruit en 48 heures les principes hémorrhagipares et hémolytiques de tous les venins essayés, et que l’acide seul suffit à détruire les hémorrhagines. mais non les hémolysines.

En ce qui concerne le venin de Crotale, la toxicité en est presque complètement détruite par l’eau acidulée à 0,8 pour 100 de HCI, sans pepsine, tandis que le venin de Cobra ne subit qu’une légère atténuation par la digestion peptique, et que les venins d’Ancistrodon deviennent peu actifs après le traitement acide, et moins actifs encore après la digestion pepsique.

La papaïne, en solution à o,2 pour 100 de HCI, ne modilie en rien l’action neurotoxique et diminue seulement et très peu le pouvoir hémolytique.

L'eau acidulée à 0,2 pour 100 de HCI détruit les hémorrhagines de tous les venins, et atténue donc la toxicité du venin de Crotale, mais laisse intacte celle du venin de Cobra et des autres venins plus neurotoxiques qu'hémorrhagipares. MorGENrRoTu a confirmé l’action destructive de l’acide chlorhydrique dilué sur le venin de Crotale.

FLexner et Nocucur constatèrent en outre que la digestion tryptique a une action plus intense que les précédentes, et détruit la toxicité de tous les venins.

Plus récemment, Teruucur (1907), étudie les effets du suc pancréatique et du suc intestinal sur l’hémolysine du venin de Cobra et de ses composés avec l’antitoxine et la lécithine. Il voit que la digestion pancréatique réduit à près de 1/5 le pouvoir hémolytique du venin de Cobra relativement aux globules de chèvre, quand on ajoute au venin 1 pour 100 de lécithine ; mais lorsque le mélange de venin de Cobra et de lécithine a été fait un certain temps d'avance, il résiste à l’action des ferments pancréatiques. Le cobra-lécithide pur n’est pas influencé par la digestion.

Terruucar a montré également que l’hémolysine du venin de Cobra peut être dégagée de sa combinaison avec son antivenin par la digestion

pancréatique ; mais elle est obtenue en plus grande quantité que celle qui reste à l’état combiné dans un même tube témoin. Il trouva aussi que l’addition de lécithine au venin en augmente la résistance. Il n'est pas impossible que la digestion de l’antivenin libère assez de lécithine pour protéger l’hémolysine récupérée contre la digestion pancréatique. Il est intéressant de remarquer que la séparation du venin d'avec son antivenin est empêchée par une addition préalable de lécithine à ce dernier. Nous reviendrons d’ailleurs sur ces faits au chapitre de l’hémolyse.

Composition des venins

L'ensemble des réactions produites sur les venins par les divers agents physiques ou chimiques montre qu'ils sont en majeure partie formés de matières albuminoïdes, mais ne nous renseignent pas plus que l’analyse élémentaire sur la nature exacte des principes toxiques.

Eliminons toutefois, parmi les substances auxquelles a été attribuée la toxicité du venin, le sulfocyanure de potassium, que quelques auteurs ont incriminé, en raison de ce qu’on en rencontre des traces dans la salive humaine.

CLauDe BERNARD en a effectivement vérifié la présence dans certaines conditions particulières chez les fumeurs ; mais Werr-Mrrcnezz ne l’a pas trouvé dans le venin de Crotale, ni Vraup-Grann-Marars dans celui de Vipère aspic.

Les premières recherches sur la constitution chimique des venins des serpents sont dues au prince LuciEN BoNAPARTE qui, en 1843, isole du venin de Vipera berus une substance qui possède toutes les propriétés de ce venin et qu'il nomme Vipérine. Pour l'obtenir, il ajoute au venin un excès d'alcool qui détermine un précipité ; celui-ci est filtré, puis repris par l’eau distillée. Cette solution aqueuse laisse un résidu que Lucrex Bowa- PARTE débarrasse de la matière grasse et du pigment qu'il contient encore par un lavage à l’éther, et des sels par l’eau fortement aiguisée d'acide et d'alcool.

Le précipité ainsi purifié se prend en petites écailles par la dessiccalion ; sa solution neutre, sans saveur, présente les réactions des albuminoïdes, et l’auteur, qui pense qu’elle est le seul principe actif du venin (alors que les recherches ultérieures ont montré qu'elle est un mélange), la compare à la ptyaline de la salive normale.

Les autres constituants du venin, albumine, mucus, pigments, corps gras, phosphates et chlorures, sont analogues à ceux de la salive normale.

En 1860, Weïr-MirrcHELz obtient à peu près les mêmes résultats par un autre procédé, pour le venin de Crotale. I] traite d’abord ce venin par l’eau bouillante, et obtient un coagulum non venimeux, composé d'albumine et de mucus ; il filtre et ajoute de l'alcool au filtratum ; nouveau précipité blanc très venimeux qui est lavé plusieurs fois à l’alcool, puis

Me.

à l’éther, pour le débarrasser des corps gras, du pigment et des sels. Ce précipité contient de l’azote, et l’auteur en montre les analogies avec la Vipérine ; il lui donne le nom de Crotaline. Ces deux substances sont tellement rapprochées par leur action toxique et par leurs propriétés physiques que Vraun-Granp-Marais à proposé de les réunir, ainsi que la Najine ou Elaphine du venin de Cobra sous le nom générique d’'Echidnines ou Echidnases.

Ces composés sont insolubles dans l’eau, incolores, amorphes, neutres et en partie incoagulables, propriétés qui les distinguent des bases alcaloïdiques. Elles présentent la réaction du biuret, ne précipitent pas par l'acétate de plomb, mais précipitent par l’alcool comme la ptyaline ; elles en diffèrent toutefois parce qu’elles ne saccharifient pas l’amidon, qu'elles ne précipitent pas par le sesquioxyde de fer, et que leur sécrétion n'est pas continue. Physiologiquement, elles se rapprochent plutôt de la pepsine, car pE LAcERDA constate qu'elles peptonisent le blanc d'œuf cuit et d’autres albuminoïdes.

En 1883, Weir-Mircnez, en collaboration avec REICHERT, reprend ses études sur les venins des Crotalinés d'Amérique : Crotalus adamanteus, Ancistrodon piscivorus, A. contortrix. Il avait acquis la conviction que les symptômes divers de l’envenimation devaient être attribués à des corps différents, et que la Crotaline, primitivement considérée comme une substance simple, était en réalité de nature complexe. L'expérience ne tarda pas à justifier cette hypothèse : le venin de Crotalus adamanteus dissous dans l’eau et soumis à la dialyse, laisse passer à travers la membrane une substance incoagulable par une brève ébullition, non précipitable par les acides, le chlorure de fer, le sulfate de cuivre, précipitée, mais non coagulée par l’alcool absolu : c’est la peptone-venom. En même temps que cette peptone, des sels dialysent aussi, et il se forme dans le dialyseur, un précipité albuminoïde qui contient trois espèces de globulines, dont l’une, plus importante que les autres, la globulin-venom, possède les propriétés du venin entier ; elle paralyse les centres respiratoires et rend le sang incoagulable, tandis que la première, la peptone-venom, est aussi un peu toxique, mais beaucoup moins que la globulin-venom.

En faisant bouillir pendant quelques instants une solution aqueuse de venin, il se produit un coagulum albumineux non toxique, tandis que le liquide clair qui le contient est venimeux, mais dépourvu d'action locale. Les auteurs se demandent si cette substance coagulée et rendue inerte par l’ébullition ne pourrait pas être séparée par un procédé qui permettrait d'essayer ses propriétés.

Nous montrerons plus loin que cette substance dont l’action est ainsi détruite par la chaleur est un corps isolable en effet, et caractéristique du venin des Vipéridés.

D'après ces recherches, le venin de Crotale contient au moins deux classes distinctes de protéines, des globulines et une peptone, et en outre une albumine.

Les proportions relatives de globulines et de peptone dans le venin sec varient suivant l'espèce : chez l’Ancistrodon piscivorus, il y a environ 2h % de globuline et 735 % de peptone ; chez l’Ancistrodon contortrix, environ 8 % de globuline et 92 % de peptone.

En 1878, PEencer, étudiant le venin de Cobra, signalait la nature protéique de sa substance active, que devaient confirmer bientôt, en 1883, les recherches de A. J. Warz pour les venins des espèces indiennes suivantes : Daboïa russelli, Bungarus fasciatus, Bungarus cœruleus et Naja tripudians.

En 1886, Norris WoLFrevpex publie quelques études intéressantes sur la constitution du venin de Naja tripudians et de Daboïa russelli. I] nie d’abord l'existence de l’acide cobrique, signalé par BLyrn, et pense qu'il n’est autre chose que des cristaux de sulfate de calcium. Il écarte ainsi la théorie des bactéries et celle des substances alcaloïdiques de A. GAUTIER, déjà éliminée par Gautier lui-même et par les expériences de Werr-Mrrcnezz, et localise la toxicité du venin de Cobra dans les matières protéiques seules, cette toxicité variant dans le même sens que ces der nières, augmentant ou disparaissant avec elles.

En employant la précipitation par le sulfate de magnésie (de Hawxin), il sépare du venin de Cobra trois protéines distinctes : une globuline, uns syntonine et une sérine ; le liquide ayant abandonné ces produits et soumis à la dialyse (méthode de HorurisTer), laisse passer les traces de peptone.

La sérine, de même que la syntonine, a une action paralysante ; la globuline a une action asphyxiante semblable à celle de la syntonine, quoique un peu moins prononcée.

Le venin de Daboïa contient ces mêmes protéines, mais pas de peptone. WoLFENDEN pense que les substances désignées par Werr-MrrcneLr. et RercHERT comme peptone-venom et globuline-venom, appartiennent probablement aux albumoses.

Il se fonde pour la peptone-venin sur les raisons suivantes : elle ne précipite pas par l'acide acétique dilué ; le précipité obtenu par le chlorure de sodium est soluble par addition d'acide acétique glacial ; enfin, le précipité formé par la potasse se dissout dans l’acide azotique, donnant un liquide jaune, qui se décolore si on ajoute un excès d'acide.

Si la critique de WorFENpEN est juste en ce qui concerne la peptonevenin, il n’en est pas de même pour celle qui s'adresse à la globulinevenin. L'auteur contribue lui-même à le démontrer dans son analyse du venin de Daboïa. Il trouve, en effet, une substance qui précipite par les sulfates de magnésie, d’ammoniaque, par le chlorure de sodium et par un courant d'acide carbonique. Cette substance coagule à 75° ; elle est séparée de ses solutions par dialyse.

Inoculée au rat, la globuline détermine des accidents locaux graves, la mortification des tissus, des extravasations sanguines, et la mort est consécutive à des troubles respiratoires. Ces symptômes ne sont toutefois

pas dûs, comme le pensait WoLrexpEN, à la globuline seule ; celle-ci entraîne en précipitant une substance diastasique qui détermine les lésions locales.

KanrHAck reprend, en 1892, l’étude-du venin de Cobra en utilisant la méthode nouvellement décrite par C.-J. Marrin pour la séparation des albumoses des venins des serpents : Le venin légèrement dilué est traité par l’alcool en excès et abandonné pendant une semaine à lui-même. Le liquide est décanté, et le précipité lavé à l'alcool absolu ; il est redissous dans l’eau distillée et reprécipité par l'alcool, dans lequel il est encore abandonné, pendant une semaine, puis on le lave à l’alcool et on le redissout dans l’eau, à laquelle on ajoute un cristal de thymol pour en éviter la putréfaction. La solution ne contient pas d’autres protéines que l’albumose. ag

D'après les réactions que présente la protéine obtenue par ce traitement, Kavrnacx déduit qu'elle est une albumose primaire, et rien que cela ; il n’y a pas d’alcaloïde.

D’après Kawrmack, le venin de Cobra ne contient qu’une quantité insignifiante de globuline ; la globuline-venin de Werr-Mirenezz et Rri- CHERT ne serait qu’un dérivé de la proto-albumose du même venin.

Lorsque la solution d’albumose toxique est portée à haute température, elle abandonne un précipité, insoluble dans l’eau distillée, mais soluble dans l’eau salée à 7,5 pour 1.000, ou par addition de quelques cristaux de Nacl : ce précipité serait une hétéro-albumose. La solution de venin dialysée précipite quelquefois et le précipité serait aussi une hétéroalbumose. Parfois ce précipité obtenu, soit par la chaleur, soit par ja dialyse, est insoluble dans l’eau salée, et d’après KanrHack on a alors une dysalbumose.

L'action prolongée de la chaleur, l’ébullition, transforme l’albumose toxique en hétéro-albumose et dysalbumose non toxiques.

C.-J. Marin et Mac Garvie Surrx, en 1892 aussi, séparent des albumoses du venin du Serpent noir d'Australie : Pseudechis porphyriacus. La solution de venin est chauffée, et ses protéines coagulables sont séparées par filtration. Le filtrat est agité pendant 2 heures avec une solution saturée de sulfate de magnésie : le précipité est retenu par filtration et lavé encore avec le sulfate. Quant au filtrat, il est dialysé dans l’eau courante distillée pendant 24 heures, puis dans l’alcool absolu. Le liquide ainsi condensé contient en solution un mélange de proto-albumoses d’hétéro-albumoses et quelquefois de peptones.

La séparation des proto-albumoses et des hétéro-albumoses est faite par la méthode de NeumEsTER : les protéines sont précipitées par quelques gouttes d’une solution de Cu SO, le précipité repris et lavé à l’eau saturée de Mg SO!, dissous dans l’eau distillée et dialysé pendant 3 jours ; les protéines précipitent abondamment et on les sépare par centrifugation. Le liquide clair est dialysé dans l’alcool absolu et le résidu desséché à 40°.

Cette masse, traitée par l’eau distillée, abandonne sa proto-albumose, tandis que l’hétéro-albumose est constituée par le résidu insoluble.

Enfin, plus récemment (1896), grâce à l'emploi d’un filtre spécial, soumis à une pression de 50 atmosphères, C.-J. Manrrin a isolé du même venin de Pseudechis un protéide indiffusible, coagulable à 82°, à action hémorrhagipare, et une albumine diffusible, incoagulable, qui a une action toxique sur les centres respiratoires.

La fréquence des albumoses toxiques chez les plantes (lupin jaune, ricin, jéquirity...) et chez les produits bactériens (toxine diphtérique, tuberculine, etc...), rapproche la toxicité des plantes de celle des animaux.

Dès 1902, KyEes reprend, d’après les idées d'Enrricn, l'étude du venin de Cobra. Quelques observations biologiques de FLexner et Nocucni avaient montré que le venin devient hémolytique au contact du sérum des espèces sensibles, et les auteurs pensaient que les compléments ordinaires du sérum sanguin étaient ceux qui activaient le venin. D'autre part, CALMETTE montrait que ce n'est pas l’alexine qui est nécessaire à l’activation du venin, mais une sensibilisatrice qui résiste à la chaleur : tout sérum chauffé, primitivement activant ou non, contient plus de substances activantes que le sérum normal.

Ces observations amenèrent Kyes à chercher le principe activant le venin dans le sérum chauffé : et ce principe est la lécithine. Il découvrit bientôt un composé défini du venin et de la lécithine, qui est hémolytique par lui-même et qu'il appela Cobra-lecithid, ou lécithide du venin de Cobra.

Pour le préparer, il mélange 4o cc. d’une solution salée de venin de Cobra, avec 20 cc. d’une solution chloroformée de lécithine, et soumet le mélange pendant 2 jours à l'agitation. Puis le mélange est centrifugé ; entre l’eau salée et le chloroforme apparaît une mince couche blanchâtre. Le chloroforme retiré avec une pipette (à un vol. de 19 cc.) est mélangé avec D» fois son volume d'éther, qui précipite le lécithide et retient en suspension la lécithine en excès. On purifie le lécithide par des lavages successifs à l’éther. De 1 gramme de venin de Cobra sec, on forme par ce procédé 5 grammes de lécithide sec.

L'eau salée de centrifugation n’est que très faiblement hémolytique. mais elle retient inaltéré le principe neurotoxique du venin.

Le cobra-lécithide est hémolytique maïs non mortel ; à la dose de 10 ce. d’une solution à 1 %, il détermine chez le lapin, une infiltration étendue dans la région inoculée. Kyes étudie toutes les propriétés de ce produit, et nous aurons l’occasion d’y revenir à propos des recherches actuelles sur l’hémolyse.

Les venins des serpents ne sont pas les seules espèces de corps qui produisent l’hémolyse au contact de la lécithine ; il faut citer encore l'acide silicique colloïdal, l’hydrate de fer colloïdal. (LANDSTEINER et JAGrc).

En 1907, E. Fausr retire du venin de Naja tripudians une substance

ie on ns nn

COMPOSITION DES VENINS 493 neurotoxique non azotée, qu'il appelle Ophiotoxine, et qu'il prépare par divers procédés. Dans l’un d’entre eux, il utilise l’incoagulabilité par la chaleur des principes actifs du venin de Cobra : 10 grammes de venin sec sont dissous dans 100 cc. d’eau faiblement acidulée à C?2H{02, et chauffé pendant 19 minutes au bain-marie à la température de 90-95°, en ajoutant du NaCI à saturation. La plus grande partie des protéines du venin coagulent en un bloc qu'on sépare par filtration.

Le coagulum n'est pas toxique ; mais le liquide qui passe au filtre est aussi actif que la solution originelle de venin de Cobra.

Fausr en étudie les propriétés, la composition, qu'il rapporte à la formule empirique CIH#O. Par une série de considérations théoriques, il la compare à la bufotaline, et relie ainsi, bien artificiellement, le venin des Batraciens à celui des Serpents.

Inalyse physiologique du venin de Vipère aspic

Les divergences qui viennent d’être signalées à propos des substances actives du venin prouvent que les méthodes de séparation des principes actifs sont encore imparfaites. On peut penser avec Ducraux, que les précipitations successives des albuminoïdes par la chaleur et les sels neutres sont susceptible de modifier les espèces chimiques. D'autre part, il est certain que les substances albuminoïdes, précipitées par addition de sels, entraînent mécaniquement d’autres corps, comme les diastases auxquelles elles doivent une partie de leurs propriétés.

Ces recherches nous apprennent simplement que les substances actives des venins sont généralement de nature protéique, mais qu'elles pourraient aussi être d’une autre nature, comme l’ophiotoxine que Fausr prépare à l’aide du venin de Cobra.

Principes actifs du venin de Vipère aspic. — À défaut d’un moyen d'analyse chimique assez délicat et assez précis pour qu'il sauvegarde tous les composés actifs du venin C. Prmisarix (1894-1905), a eu recours à l'analyse physiologique pour caractériser ces principes d’après les symptômes qu'ils déterminent chez les animaux.

Si une substance extraite du venin détermine dans l’organisme une partie seulement des symptômes ordinaires de l’envenimation et si d'autre part le venin entier, soumis à des influences modificatrices perd le pouvoir d’engendrer les mêmes symptômes, on pourra en conclure qu'il existe dans le venin un principe actif dont les propriétés bien définies doivent être corrélatives de propriétés chimiques fixes et constantes, encore que mal déterminées.

En attendant que la nature chimique exacte puisse en être déterminée, Prisarix les désigne par un nom qui évoque leur action physiologique, et il distingue ainsi dans le venin de Vipère aspic trois substances principale : l'Echidnase, l'Echidno-torine et l'Echidno-vaccin.

1° Echidnase. — En 1883, Werr-Mrreuez avait observé que le venin de Crotale mélangé au tannin ou à l’iode, ou même porté à l'ébullition pendant quelques instants, perd son action locale. Kaurmanx, en 1889, avait constaté d'autre part que l'addition d'acide chromique produit le même effet sur le venin de Vipère aspic, tandis que dans le cas du venin de Crotale, comme dans celui de la Vipère, l’action toxique générale est conservée. En 1893, MM. Pmisarix et BERTRAND sont arrivés au même résultat en soumettant pendant quelques secondes le venin de Vipère (en solution aqueuse à 1/5000) à la température de l’ébullition, ou en le chauffant pendant plus longtemps à des températures plus basses. On peut conclure de ces faits à l’existence, dans le venin, d’un principe qui exerce une action locale.

Pour l'isoler, le venin frais est précipité par l’alcool absolu, puis filtré ; le précipité est d’abord desséché puis dissous dans un peu d'eau. On ajoute à la solution 5 à 6 fois son volume d'alcool absolu ; le deuxième précipité, traité comme le premier, produit encore les accidents locaux et généraux du venin entier. À cette deuxième solution, on ajoute 5 fois son volume d'alcool à 95° ; le troisième précipité ainsi obtenu a perdu ses propriétés toxiques, mais a conservé toute son action locale phlogogène : il détermine à la région où on l’inocule un œdème hémorrhagique, suivi d’une nécrose de la peau et des tissus. Pendant ces précipitations successives, les deux autres substances actives sont peu à peu détruites, et il ne reste plus que la diastase, dont l’action sur les tissus est caractéristique du venin des Vipéridés.

D'ailleurs, cette échidnase n'est pas un produit créé artificiellement par les réactions simples précédentes ; car en essayant les effets du venin de Vipères de diverses régions et en diverses saisons, C. Prisarix a vu que le venin des Vipères d’Arboiïs (Jura) recueilli en avril et mai, tue les animaux sans déterminer d'action locale. Cependant l’échidnase existe, mais elle est encore fixée dans les cellules qui l’élaborent, car en broyant la glande venimeuse, après l’avoir débarrassée de son contenu, et faisant macérer le parenchyme dans l’eau distillée, on obtient une solution riche en échidnase, et qui ne produit pas d'autres symptômes qu'une action locale très accentuée.

2° Echidno-toxine. — Comme son nom l'indique, c'est la substance qui, dans le venin, détermine les accidents généraux graves, le plus souvent mortels. Pour l’isoler complètement, il suffit de porter le venin à la température d’ébullition pendant quelques secondes ; cette action détruit les deux autres substances et laisse intacte l’échidno-toxine : celle-ci est encore appelée neurotoxine.

3° Echidno-vaccin. — La température de 8o° agissant pendant cinq minutes ou celle de 75° agissant pendant quinze minutes, détruit complètement l’échidnase et l’échidno-toxine du venin, mettant en évidence les propriétés vaccinantes du venin. Le sérum de Vipère, chauffé à 58° pendant 15 minutes, est de même transformé en vaccin.

Il y a deux manières d'interpréter ces faits : ou bien la chaleur détruit les substances toxiques en respectant les substances vaccinantes, qui préexisteraient ainsi dans le venin, ou bien elle transforme ces substances toxiques en substances vaccinantes.

La possibilité de séparer l’échidnase donne déjà quelque vraisemblance à la première hypothèse : en outre une preuve biologique de l'indépendance de l’échidno-toxine et de l’échidno-vaccin a été fournie par les Vipères capturées au printemps en Auvergne, aux environs de Clermont-Ferrand : leur venin détermine tous les symptômes ordinaires d’empoisonnement vipérique ; il s’atténue par la chaleur dans les conditions normales, mais ainsi modifié il n’engendre pas la réaction vaccinale à laquelle on pouvait s'attendre. Il n'existe donc pas encore d’échidnovaccin libre dans le venin ; la fonction sécrétoire pour l’échidno-vaccin n'arrive à son complet développement qu’à une saison plus avancée ; C. Pnisazx a constaté effectivement que le venin des Vipères du Puy, région peu éloignée de Clermont, recueilli en octobre, est apte à se transformer en vaccin.

Mais il a montré directement l'indépendance des principes vaccinants en employant encore d’autres moyens physiques tels que la filtration et la dialyse.

La filtration sur bougie de porcelaine, qui ne modifie guère la toxicité du venin de Cobra, altère au contraire celle du venin de Vipère une solution à 1/5000 de ce venin dans l’eau distillée perd toute toxicité. mais conserve néanmoins une action physiologique qui se traduit chez le cobaye par une légère hyperthermie. Comme l’échidno-vaccin produit le même effet, il était rationnel de présumer que le venin filtré contiendrait aussi ce vaccin, et c’est ce que l’expérience a vérifié.

Nous avons vu que, d’une manière analogue, C.-J. MARTIN a séparé du venin de Pseudechis porphyriacus, deux de ses substances actives.

Les effets de la dialyse sont également différents sur les venins des Vipéridés et sur ceux des Colubridés : tandis que les substances actives de ceux-ci passent à peu près intactes au dialyseur, le venin de Vipère perd ses propriétés toxiques et garde ses propriétés vaccinantes.

Les courants alternatifs de haute fréquence isolent aussi l’échidnovaccin du venin de Vipère (C. Pnisazix, 1896).

De l’ensemble de ces recherches, on peut résumer comme il suit la composition du venin brut de Vipère aspic :

1° Eau, 70 à 80 % ;

2° Matières extractives, 30 à 20 %.

Ces dernières se décomposent ainsi :

Sels : chlorures et phosphates.

Pigment jaune, peu soluble dans l'alcool ; Substance acide indéterminée ;

Substances albuminoïdes diverses : albumines, globulines, albumose, peptone, ferments.

Par les moyens physiques, les substances protéiques du venin de Vipère peuvent, comme l’a montré Pnisarix, être dissociées et le tableau suivant en résume les caractères différentiels.

Principes astits=| Filtration Solubilité | Action de

À Action physiologique et dialyse dans l'alcool | la chaleur

s’altère, une très] ractéristique.Apar préci-| courte é-| baissement de | pitations! bullition ; la pression san-

| successi-| s’atténue guine.

| ves. | parchauf-| Paralysie.

fage à par-

| | tir de 65°

| successives.

En résumé, les venins sont des sécrétions de constitution complexe contenant de multiples substances actives, les unes venimeuses, les autres antivenimeuses, et la plupart de nature protéique.

Parmi les premières nous citerons les neurotoxines, les cytotoxines. les hémorrhagines, les hémolysines, les précipitines, des ferments (fibrinferment...), dont l'étude sera faite séparément à la suite de cet exposé historique.

C'est l’action des premières qui est la plus distincte dans les symptômes d’envenimation consécutifs à la morsure ou à l'inoculation du venin. Lorsque nous aurons indiqué ces symptômes, nous résumerons l'étude spéciale de chacune de ces substances, telle qu’elle résulte des faits récemment acquis et actuellement connus.

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