EE SE

NEUROTOXINES DES VENINS + vért

Un peu plus tard, en 1905, Cazmerre et Noc reprennent la question ; ils montrent que la solution à r % de venin de Cobra dissout rapidement le vibrion cholérique, les formes jeunes et asporogènes de b. anthracis, le staphylococcus aureus, le b. diphteriæ et les cultures jeunes de b. subtilis. Le b. de la peste, le coli, le typhique sont plus résistants ; les b. pyocyaneus et prodigiosus sont presque insensibles ; le b. de Koch l’est totalement.

L’élimination du principe bactériolytique du venin pour l’une de ces espèces de microbes l’est aussi pour les autres, ce qui montre la non-spécificité de ce principe.

Le sérum anticobra arrête la bactériolvse due au venin de Cobra. La propriété bactériolytique ne disparaît par le chauffage qu'’au-dessus de 85° pendant 30 m. ; elle n’est donc pas due à l’action protéolytique du venin qui est, comme on l’a vu, détruite à 8o°.

La réapparition du pouvoir bactériolytique ne se produit pas dans le mélange venin-antivenin quand on chauffe ce mélange à 85°.

La solution à 1 % de venin de Cobra dissout en 30 minutes les trypanosomes (GOEBEL).

Action sur les végétaux pluricellulaires. — Un certain nombre d’expériences ont été faites sur les plantes élevées en organisation, ainsi que sur la germination des graines.

En 1854, B. J. Grzuaw, inocula quelques végétaux en introduisant le venin dans leur parenchyme sur la pointe d’une lancette ; le jour suivant les végétaux étaient flétris et ils moururent. L'auteur n'indique pas l’es pèce de venin employé, et il ne fit pas de témoins.

Simultanément, SazrBury expérimenta avec le venin de Crotalus adamanteus sur de jeunes rameaux de lilas, de marronnier d'Inde, de maïs de grand soleil et de concombre sauvage. Sans vérifier sur des animaux la toxicité du venin, il introduit celui-ci sur la face profonde de l'écorce au moyen d’une pointe de canif ; la quantité introduite était celle qui adhérait à la pointe de l'instrument. Six heures après, les feuilles situées audessus de la blessure commencèrent toutes à se flétrir. L’écorce au voisinage de l’incision ne montrait pas de changement appréciable ; 96 heures après l’opération, les limbes des feuilles situées au-dessus de la lésion semblaient mortes chez toutes les plantes ; puis les pétioles et l’écorce voisine commencèrent à sécher à leur tour. Au ro° jour, les rameaux commencèrent à guérir ; au 19°, quelques chétives feuilles apparurent sur les lilas, et les autres plantes se ranimèrent ; aucune ne périt complètement. Il ne se produisit aucune action au-dessous du lieu d’inoculation, et les lésions débutèrent par le voisinage immédiat de l’endroit incisé.

Werr-Mrrcnezz fit des constatations analogues en 1859 ; il expérimenta avec du venin de Crotale sur de jeunes rameaux de Tradescantia fendus jusque vers le milieu, où il introduisait un tiers de grain de venin sec et pulvérisé. La plaie était ensuite refermée, la plante arrosée, et une

goutte d’eau déposée sur l’incision ; 4 plantes ‘étaient traitées à titre de témoins, sauf le dépôt de venin. Au bout d’une semaine, 2 témoins et une des plantes envenimées devinrent malades et perdirent graduellement leurs feuilles dans la quinzaine suivante.

Dans une seconde série d'expériences, Weriz-MiremezL employa un rameau de fève commune, une fleur de colchique d'automne, trois vigoureuses branches de géranium, une petite plante grasse, un jeune dahlia. Le venin, fraîchement recueilli, avait été vérifié quant à sa toxicité. Le mode d'introduction du venin variait suivant la plante, et la quantité de venin correspondait à une ou deux gouttes.

La période d'observation dura trois semaines, sans que les plantes (dont malheureusement quelques-unes sans témoins), manifestent aucune souffrance. Werr-Mrrcmezz, tout en réservant son opinion en ce qui concerne des plantes plus élevées encore, pense donc que les résultats obtenus par SaziBurY sont surtout dûs au traumatisme.

Les effets du venin se montrèrent plus nets sur la germination de : certaines graines. Werr-Mircnecz plaça des graines d’alpiste et de réséda d’une part dans une solution de venin (à 1 ou 0, goutte de venin frais | pour 8 gouttes d’eau), d’autre part dans l’eau ordinaire. Aucune des oraines ne germa dans la solution venimeuse, contrairement à ce qui se produisit dans l’eau pure. |

C. DarwiN, dont BruNTuN et FAyRER citent les expériences, observa que 15 milligr. de venin de Cobra dissous dans 8 cc. d’eau, agissent fortement sur le drosera. Trois feuilles furent immergées dans 90 gouttes : de la solution ; bientôt les poils glandulaires se flétrirent et les glandes devinrent tout à fait blanches, comme si leur sécrétion eut été coagulée par la chaleur. Après une immersion de 8 heures, elles furent replacées dans l’eau ordinaire, et les poils s’épanouirent à nouveau ; le venin ne les avait donc pas tués.

Bibliographie Aucné (B.). — La moelle osseuse dans l’envenimation, Journ. de Méd. de Bordeaux, 1902, n° 14, p. 213.

Aucné (B.). -— Note sur un cas de foyers nécrotiques du foie dans l’enveni-

mation, /d., 1903, XXxIIF p. 69-71.

BanG (I.) er Overrox (E.). — Bioch. Zeitsch., 1911, XXXI, p. 243-293 (loco cit.). CALMETTE (A.). — Les venins, Paris, 1907.

CHATENAY. — Thèse de Paris, 1894.

EwixG Er Barzey. — Dans l’article de Gustave Langmann : « Poisonous snakes and snake poisons », The Med. Record, 1900, 15 sept., LVIIT, p. 4or. Féré. — Evolution de l'embryon de poule. Influence de l'introduction de venin

dans l’albumen de l'œuf de poule, C. R. Soc. Biol., 1896, XLVIII, p. 8.

FLExNER (S.) er Nocucui {H.). — On the plurality of cytolysins in snake venom, Pensyl. Med. Bull., 1903-1904, XVI, p. 163-171.

Hinpaze. — The lesions of snake venom, Med. News, Philad., 1884, XLIV,

Jaco8y (M.). — Beit. z. wiss. Med. u. Chem. Festisch. Ernst Salkowski, Berl., 1904, p. 199-204 (loc. cit.).

Jousser (P.). — Lésions produites par les venins des Serpents, Bull. Acad. de Méd., Paris 1899, LXXXVII, p. 358.

Noc. — Sur quelques propriétés physiologiques de différents venins de Serpents. Ann. Inst. Past., 1904, XVIII, p. 387 (Bactériolyse) id. 1905, XIX, P. 200.

Nowak (J.). — Etude expérimentale des altérations pathologiques produites dans l’organisme par le venin des Serpents et des Scorpions. Ann. Inst. Past., 1898, XII, p. 369-384.

PEARCE (R.). — An experimental glomerular lesion caused by venom (Crs2talus adamanteus). Jour. of Exp. Med., 1909, XI, p. 532-540, 1 pl. PeyroT. — Kérato-conjonctivite produite par projection de venin (Sepedon

hæmachates). Ann. d’Hyg. et de Méd. colon., 1904, t. VII, p. 107-110.

URUETA. — Thèse de Paris, 1884.

VaILLANT-Hovius (L.). — Etude expérimentale de quelques lésions viscérales causées par le venin des Serpents. Thèse de Méd. de Bordeaux, 1902. ZELiony. — Pathol.-histolog. Verânderungen der querstreiften muskeln «an der Infecktionstelle des Schlangengiftes. Wirchow’s Arch. f. Path. anat.

u. Physiol., 1905, CLXXIX, p. 36.

HÉMORRAGINES DES VENINS

Un des symptômes les plus impressionnants et les plus alarmants qu'on observe avec le venin des Vipéridés surtout, et avec celui même de quelques Colubridés Aglyphes ou Opisthoglyphes, est constitué par les hémorragies locales ou à distance qui se produisent.

Chez les Vertébrés supérieurs, ce fait avait déjà frappé les premiers observateurs comme Fonrana. L'hémorragie débute autour du point de pénétration du venin déjà dans la première demi-heure, et continue en s'étendant autour du point lésé ou dans des organes distants, pendant 24 heures, et même au-delà, facilitée par l’incoagulabilité du sang et la chute de la pression artérielle qui accompagnent l’envenimation. Des plages entières de la surface du corps deviennent pourpres, puis noires ; c'est aussi, une véritable apoplexie intestinale qui remplit de sang la cavité abdominale, en même temps qu'il se produit un gonflement manifeste des régions atteintes. Les animaux à sang froid sont beaucoup moins sensibles aux hémorragines que les Vertébrés supérieurs.

Le venin de Vipère aspic, de Crotale, d’Ancistrodon et des autres Vipéridés attaque presque aussitôt, de la manière que nous verrons, les endothéliums des vaisseaux mésentériques. qui livrent passage au sang ; ce phénomène peut être observé sous le microscope sur le mésentère de la grenouille. Après l'injection d’une certaine quantité de venin de Crotale dans le péritoine, la tension abdominale commence en quelques minutes à s'élever, et en une demi-heure devient assez marquée pour que la paroi ne se laisse pas déprimer sous la pression du doigt. Outre les hémorragies des viscères et des séreuses, on observe chez certains animaux marins des hémorragies intra-crâniennes ou localisées sur les branchies. Le venin des Lachesis produit même des hémorragies dans les parois du tractus alimentaire quand il est introduit par l’une ou l’autre extrémité du tube digestif. Chez le pigeon, les muscles qui reçoivent le venin, tel le pectoral, sont le siège d’une abondante infiltration sanguine.

Quelle est la nature des substances auxquelles les hémorragies sont -dues ?

Werir-Mrrenezz et Rercnerr les attribuent à des substances protéiques ressemblant par leurs réactions physiques et chimiques au groupe des globulines, et ils ont préparé au moins deux variétés de ces substances par la précipitation du venin, soit au moyen de la dialyse, soit au moyen du sulfate de cuivre.

Wein-Mironezz avait depuis longtemps mis en évidence quelques propriétés de ces principes hémorragipares du venin de Crotale ; il avait montré qu'ils ne passent pas à la dialyse, qu'ils sont détruits par la chaleur au voisinage de 75° à 8o°, que l’alcool les précipite sans les détruire, qu'ils sont facilement détruits par les acides faibles, mais non par les alcalis, et qu'ils sont enfin détruits dans le tube digestif par l’action des ferments gastrique ou pancréatique.

HÉMORRAGINES DES VENINS 615

La glycérine n’a pas d’action atténuante, non plus que la dessiccation. Il est à remarquer que l’activité hémorragipare des venins marche parallèlement avec la quantité de substances analogues aux globulines que contiennent ces venins.

Généralement l’hémorragie est accompagnée d’un gonflement œdémateux ; mais toutefois la réciproque n’est pas vraie, et les deux phénomènes sont indépendants l’un de l’autre ; ainsi le venin de Cobra détermine un œdème marqué sans hémorragie. Werr-Mrrcnezr et REICHERT attribuent l’action hémorragique aux globulines du venin, et les effets œdémateux aux protéines dialysables, analogues aux peptones, que l’on rencontre précisément en assez grande quantité dans le venin de Cobra.

Les principales recherches sur les hémorragines des venins sont dues à Fcexner et Nocucnr. D’après ces auteurs, le venin de Crotalus adamanteus est, en principes hémorragipares, le plus riche de ceux qu'ils ont essayés ; le chauffage à 75° pendant 30 minutes lui fait perdre 90 % de son activité, et la mort qui survient à la suite de l’introduction du venin chauffé est principalement due à la neurotoxine, plus résistante à la chaleur.

La séparation de la neurotoxine par fixation au moyen de l’émulsion de cerveau n’altère pas l’hémorragine, et en même temps, on n'observe pas de réduction sensible de la toxicité générale du venin de Crotale.

Le sérum antivenimeux, qui peut neutraliser une grande quantité de neurotoxine, d'hémolysine et d’hémagglutinine, mais non d'hémorragine, est seulement efficace contre les effets mortels de certains venins neurotoxiques comme ceux de Cobra et d’Ancistrodon, mais ne protège en aucune manière contre le venin de Crotale. Inversement un sérum qui est fortement antihémorragique, mais non antineurotoxique, n'a aucune efficacité contre les venins neurotoxiques, tandis qu'il protège les animaux contre un venin hémorragipare.

Par divers moyens, les auteurs établirent les distinctions assez mal délimitées jusque-là entre l’action hémolytique et l’action hémorragipare. Ainsi, ils trouvèrent en une occasion que le sérum des animaux immunisés avec du sérum de Crotale est nettement antihémolytique contre le venin de cette espèce, mais que n’ayant pas de propriété anti-hémorragipare, il ne peut combattre l'effet du venin in vivo. Une autre fois, ils trouvèrent que la toxicité des solutions de venin de Crotale reste presque intacte après avoir été conservées pendant deux mois à la température de 70°, tandis que celle du venin de Cobra avait perdu plus des neufdixième de son activité primitive. Les hémolysines des deux venins ont subi une diminution considérable pendant cette période ; mais l’activité hémorragipare du venin de Crotale n’a pas varié ; les hémorragines du venin de Crotale sont donc remarquablement stables sous ce rapport, bien quelles soient très sensibles aux températures élevées, aux acides et aux autres agents chimiques tels que l’oxydation.

La persistance des hémorragines et de la toxicité générale contrai-

rement à la disparition des autres principes toxiques, notamment l’hémolysine, est ainsi nettement mise en évidence.

En montrant les effets qui résultent des divers modes d'introduction du venin de Crotale, FLexNer et Nocucar ont démontré que les hémorragines en représentent les principaux constituants toxiques.

Avec les venins surtout neurotoxiques, le lieu d’inoculation importe peu en ce qui concerne l'issue finale ; ordinairement la mort suit rapidement l'instant où le venin atteint le système nerveux central, et la dose minima mortelle reste sensiblement la même. D'autre part, si le venin est injecté directement dans la substance cérébrale ou dans la cavité crânienne, la mort arrive avec une dose de venin qui n’est qu’une menue fraction de celle qui est mortelle par la voie sous-cutanée ; ainsi r milligr. de venin de Crotale, injecté sous la peau tue en l’espace de 3 heures un cobaye pesant 400 gr., tandis qu’une dose plus petite ne détermine que du sonflement de l’hémorragie, du suintement, maïs pas la mort ; avec le même échantillon de venin, o milligr. o5 suffisent à tuer l’animal dans le même temps, si l’inoculation est faite dans le cerveau ; l’inoculation intracérébrale de venin est donc environ 20 fois plus sévère que l’inoculation sous-cutanée. Ces faits mettent en évidence les modes différents par lesquels le venin de Cobra, d’une part, celui de Crotale de l’autre, entraînent la mort.

FLexver et Nocucnr expliquent cette différence par le fait que la neurotoxine, principale substance toxique du venin de Cobra, a une électivité particulière pour le tissu nerveux (les cellules ganglionnaires de certaines parties des centres), et n’est pas autant absorbée ou fixée par les autres tissus ; d’où l'effet final est sensiblement le même, indépendant du mode d'injection, sinon du temps au bout duquel agit le venin. D’autre part, l'hémorragine, principale substance toxique du venin de Crotale, a une électivité spécifique pour les endothéliums des vaisseaux sanguins et Ivymphatiques, et quand elle est introduite dans une région éloignée d’un organe important, comme le cerveau, elle doit parvenir jusqu'à ce dernier pour produire son effet ; mais le système entier du corps vivant étant entouré et pénétré par un riche réseau sanguin et lymphatique, l’hémorragine atteint rarement le système nerveux central en quantité importante. D’après les symptômes observés, on comprend que l’hémorragine soit le plus énergiquement absorbée aux régions les plus voisines du lieu d’inoculation. C’est seulement quand le venin est introduit dans la circulation que le danger de mort est le plus apparent : autrement, l’hémorragie se propage graduellement et s'étend, mais en diminuant progressivement d'intensité vers les parties éloignées du corps. Pour qu'une quantité mortelle arrive au cerveau, il faut employer de fortes doses.

Il est très probable que l’hémorragine a des fonctions multiples elle peut attaquer certains éléments constituants du système nerveux, mais si elle a une action, celle-ci doit être tout à fait différente de celle

De ee mm

HÉMORRAGINES DES VENINS 617

des neurotoxines en général, car les symptômes sont très différents. De plus, les effets hémorragiques et neurotoxiques en tant qu'ils correspondent à des substances existantes, sont produits par la même fraction du venin et disparaissent en même temps ; ils sont inséparables par les méthodes actuelles.

L’analogie des venins avec la ricine est manifeste ; cette phytotoxine est, comme on le sait, hémoagglutinante, hémorragipare et neurotoxique. Par la digestion pepsique, on peut en détruire la propriété agglutinante, mais les effets hémorragiques et neurotoxiques persistent, et ne peuvent être dissociés.

FLexNer et Nocucur déterminèrent la quantité d’hémorragine contenue dans des venins variés. À cet effet, ils employèrent les injections intrapéritonéales de venin chez le cobaye.

Ne tenant pas compte de la dose mortelle, et les animaux survivants ayant été éthérisés 30 minutes après l’inoculation, l'existence et le degré de l’hémorragie étaient seuls notés. Si on prend comme unité de mesure 1 milligr. de venin de Cobra, qui représentera 10 doses hémorragiques minima, les mêmes quantités de venin d’Ancistrodon piscivorus et contortrix contiennent 100 doses, de Crotale 1000 doses hémorragiques minima ; et si on injecte à un cobaye du poids de 300 gr. la dose de venin nécessaire à entraîner la mort en 4 heures, il faudra respectivement o milligr. 1 de venin de Cobra, égalant 1 dose hémorragique minima ; o milligr. 2 de venin de Mocassin d’eau, égalant 20 doses ; o milligr. 6 de venin d’Ancistrodon contortrix, égalant 60 doses, et 1 milligr. de venin de Crotale égalant 1000 doses hémorragiques minima. Ces évaluations confirment pleinement les vues de FLexNeR et Nocucni, à savoir que le constituant toxique principal du venin de Crotale réside dans son hémorragine.

MorGENROTH à constaté que l’hémorragine du venin de Crotale est extrêmement sensible à l’action des acides ; l’acide chlorhydrique en dilution très faible, inactive presque instantanément l’hémorragine du venin. Même si l’acide est injecté après le venin et aussitôt après ce dernier, il ne se produit pas d’hémorragie dans le péritoine du cobaye, donc pas de mort, même si la dose de venin était forte. Les observations antérieures de FLexver et Nocucur s'accordent pleinement avec ces résultats : ces auteurs utilisent cette modification de l'hémorragine dans l’immunisation pour éliminer l’action locale gènante, sans empêcher la production d'antihémorragine chez les animaux immunisés ; ils considèrent ce phénomène comme un exemple de formation toxoïde de l’hémorragine au sens propre d'Exrricn. Une solution faible de trichlorure d'iode produit le même effet et peut aussi être utilisée pour faciliter l’immunisation. Si les sérums antivenimeux préparés par le venin ainsi modifié ne possèdent pas une aussi grande valeur immunisante, ce qui n’a pas été recherché par ces auteurs, il est du moins toujours possible de compléter l’immunisation avec le venin naturel.

Le venin de Lachesis flavoviridis (S. — Trimeresurus riukiuanus),

contient principalement de l’hémorragine, et de petites quantités seulement d’hémolysine, d’agglutinine et de neurotoxine. D'après Isnizaka. l'hémorragine de ce venin est inactivée par agitation au contact du chloroforme et atténuée par l'hydrogène sulfuré, le chlorure de fer, les acides acétique et chlorhydrique. L’élimination de l’hémorragine par le chauffage à 73° réduit de 1/17 son activité primitive. D'autre part, les effets hémolytique et neurotoxique ne sont pas modifiés par ce traitement.

Comme FLexner et Nocuour, IsmizakA constata que la digestion trypsique du venin en détruit complètement la toxicité, et que l’hémorragine de ce venin modifiée (par le chloroforme ou HS) était capable de provoquer la formation d’anti-hémorragine par injections répétées aux animaux. Le même auteur essaya vainement de fixer l’hémorragine par contact avec des cellules endothéliales de l’aorte ou d'organes richement vascularisés.

Lèsions endothéliales déterminées par les hémorragines

FLexxer et Nocuceui les ont étudiées sur le mésentère de cobayes et de lapins, avec le venin de Crotalus adamanteus, injecté en solution dans le péritoine, ou déposé sec à la surface du mésentère. L'aire hémorragique est tendue sur l’ouverture d’un flacon au moyen d'une ligature, fixée au Zenker et colorée à l’hématéine-éosine. Les préparations transparentes se prêtent à un examen minutieux des lésions. L’extravasation sanguine se produit, non par diapédèse, mais par rupture des parois ; la solution de continuité ne se trouve que sur l’une des faces et en quelques cas est accompagnée d’un déplacement des cellules endothéliales adjacentes qui sont repoussées hors du vaisceau par la pression du sang qui s'échappe. Un autre phénomène intéressant se produit occasionnellement : c'est la stase dans les vaisseaux, due ordinairement à l’hémorragie et non à l’agglutination, car les contours des globules restent très nets.

On rencontre aussi des cellules géantes provenant de la fusion de leucocytes ; leurs dimensions sont suffisantes pour oblitérer les plus petites veines dans lesquelles elles se forment.

Les globules blancs peuvent, comme les rouges, s'échapper à travers les orifices de rupture des parois vasculaires, et tandis que dans quelques endroits les polynucléaires prédominent, en d’autres on rencontre surtout des mononucléaires.

La dissolution des parois vasculaires est limitée aux petites veines et aux capillaires ; ces vaisceaux montrent sous l’action du venin des gonflements irréguliers des parois, souvent en rapport avec le développement de l’extravasation. 11 est probable que les plages d'action du venin sur les parois sont nombreuses et que les vaisceaux ne cèdent que sur un certain nombre d’entre elles.

Dinan. neue.

HÉMORRAGINES 619

D'après ces faits, FLExNER et Nocucm considèrent l’hémorragine « comme une cytolysine vis-à-vis des endothéliums des vaisseaux », endothéliums dont la destruction est la cause la plus immédiate de l’extrava-

sation.

Bibliographie

FLExNER ($S.) et Nocucur (H.). — Snake venom in relation to hæmolysis, bactériolysis and toxicity. Jour. of. exp. Med. 1902, VI, p. 277-301

IsxizAKA (T.). — Studien über das habuschlangengift, Zeitsch, f. exp. Path. u. Therapie, 1907, IV, p. 88-117.

Miremezz (S. WeErr) et RetcHerT (E. T.). — Researches upon the venoms of poisonous serpents. Smith. cont. to Knowledge, 1886, XXVI, Bibliographie : p. 159-179:

MorGENRoOTH (J). — Ueber die Wiedergewinnung von toxin aus seiner antitoxinverbindung. Berl. Klin. Woch. 1905, XLII, p. 1550-1554.

HEMATOLYSINES ET AGGLUTININES DES VENINS

Historique, — Les recherches de Fontana (1781) l’amenèrent à constater que les globules rouges ne subissent aucune action in vitro de Ïa part du venin de la Vipère aspic. Près d’un siècle plus tard, en 1854, pr Lacerpa mentionne, à propos du venin d’un Lachesis, la déformation et la fragmentation que présentent les hématies sous le contact direct de ce venin ; elles adhèrent d’abord entre elles de telle façon que leur forme devient indistincte, et se dissolvent complètment en quelques minutes.

Les premières expériences de Weir-Mrrenezx, faites vers 1860-1861, avec le venin de Crotale, ne mentionnent pas de changements in vitro sur les hématies, au moins au bout d’une demi-heure ; l’auteur constate le fait important que la destruction peut survenir après un contact prolongé avec le venin dans certaines limites de concentration de celui-ci. Cette constatation a été faite depuis avec d’autres venins, notamment avec celui du Cobra. Dans son étude magistrale, faite avec Reicmerr sur le venin de Crotale (1883), Werr-Mircnezz observe ce qu'avait vu LacErpa, à savoir que les hématies deviennent sphériques, qu’elles se fusionnent en amas plus ou moins volumineux et perdent passagèrement leurs limites précises, puis reprennent leur indépendance et leur forme sphérique. Le phénomène a été désigné plus tard sous le nom d’agglutination. Il a constaté également que les mouvements amiboïdes des leucocytes sont rapidement suspendus dans les solutions de venin.

D'autre part, Fayrer et BRUNToN (1872-1874), au cours de leurs recherches sur les venins des Thanatophides de l’Inde, n'avaient pu constater dans le sang des animaux envenimés que l'aptitude des hématies à s’empiler et à se créneler plus ou moins sur les bords.

Avec les venins de Crotale et de Vipera berus, FEoKrTisrow (1888) constate qu’une solution à 2 %, de ces venins dissout les globules rouges en dix-huit à vingt-quatre heures. En 1890, Racorzi montre que les globules des Mammifères envenimés par le venin de Cobra et que leurs globules mélangés directement au venin deviennent convexes et qu'ils sont dissous en quelques heures. S’il s’agit des globules nucléés de la grenouille, l'hémoglobine diffuse d’abord, puis le stroma et le noyau sont finalement mis en liberté. Le plasma ainsi laqué conserve sa couleur rouge vif, et présente les caractères spectroscopiques de l’oxyhémoglobine.

Dans son important travail sur le venin de Pseudechis porphyriacus (1893), ainsi que dans ses recherches ultérieures (1896), G.-J. Mar trouve que si.on mélange à volumes égaux du sang de grenouille et une solution à 7 p. 1000 de sel marin contenant 1 p. 1000 de venin, on assiste, par l’observation au microscope, à la désintégration des globules qui s'effectue en l’espace de 15 minutes. Les leucocytes résistent plus longtemps, car après 15 minutss leurs mouvements seuls sont arrêtés ; mais bientôt les noyaux deviennent plus clairs, granuleux, gonflés ct finalement disparaissent, alors que les témoins sont encore très actifs. Les globules de pigeon sont un peu plus résistants. Les globules des mammifères ont une résistance très inégale au venin de Pseudechis : ceux du chien sont les plus sensibles : o milligr. or de venin suffit à détruire 100 cc. de sang in vivo ou in vitro; ceux du lapin, du chat, du cobaye, du rat blanc, et surtout ceux de l’homme, sont beaucoup moins sensibles. Chez le chien, l’hémoglobine diffusée cristallise dans le plasma aussi bien in vivo qu'in vitro ; on trouve même de ses cristaux dans l'urine et dans les reins, quand il y a eu rétention pendant quelques jours avant la mort. L'hémoglobinurie est fréquente chez les animaux autres que le chien avec les doses mortelles. L'hémoglobine se rencontre aussi dans la

bile, ainsi que Racorzi l’avait observé chez les animaux morts d’envenimation cobrique. Chez les sujets qui viennent de mourir du venin de Pseudechis, sauf chez ceux qui sont morts rapidement en quelques heures, G.-J. MARTIN a constaté un accroissement du nombre des leucocytes et parfois une agglutination. Chez les chiens inoculés avec le même venin, le nombre des hématies diminue très rapidement jusqu’à réduction de moitié ; les leucocytes semblent disparaître complètement de la circulation, mais cette leucocytopénie s'arrête assez rapidement, car au bout de 30 minutes à 5 heures, on constate que le sang contient presque autant de leucocytes qu'auparavant.

Dès 1894, l'attention est engagée vers la sérothérapie antivenimeuse, inaugurée par les recherches de Puisazix et BERTRAND, pour le venin de Vipère aspic, et par celles de CALMETTE pour le venin de Cobra capel ; les sérums antivenimeux fournissent l’occasion naturelle d'étudier de plus près l’hémolyse par les venins et l’antihémolyse par ces sérums, réaction qui peut être utilisée à mesurer leur action antitoxique générale.

En 1895, CunniNGHaM constate que le sang des mammifères ayant reçu une forte dose de venin de Cobra donne, après leur mort, un plasma rouge vit contenant l’hémoglobine, et que les globules rouges des Oiseaux (poules) sont pour la plupart réduits à leur noyau, devenu libre par dissolution du stroma.

En 1897, Werr-MircueLzz reprend en collaboration avec STEWART l’hémolyse par le venin de Crotale des globules du lapin, des serpents, du singe el de l’homme. Les auteurs constatent à nouveau que l’hémolyse se produit avec les solutions venimeuses de concentration moyenne, mais non dans celles où le venin frais est mélangé à un volume égal de sang.

En 1898 paraît un important travail de Srepuexs et Myers sur le venin de Cobra. Ces auteurs emploient tour à tour l'examen direct au microscope des globules soumis à l’action des solutions venimeuses, ou la méthode colorimétrique de l’hémolyse dans des tubes à essai contenant des mélanges en volumes connus de sang et de solutions venimeuses ; ils prennent la précaution de réaliser des solutions isotoniques ou hypertoniques. Ils constatent que le venin de Cobra a une action marquée sur le sang de l’homme et de diverses espèces animales et que cette action est empêchée par l’addition de sérum antivenimeux. Ce sérum, à lui seul, peut prévenir l’hémolyse in vitro à l’exclusion de tout autre sérum. Pour savoir s’il existe quelque relation entre la neutralisation in vitro et l’action protectrice in vivo, les auteurs cherchent la dose de sérum capable d'empêcher l’action hémolytique de la dose minima mortelle de venin. Celle-ci est de o milligr. r pour un cobaye pesant 300 grammes, qu'elle tue en 5 à 8 heures ; la quantité de sérum antivenimeux isotonique qui la neutralise est de o cc. 1 ; dans ces conditions, les sujets peuvent résister ou mourir. Si, employant de plus fortes doses de venin, on en neuiralise complètement l’action hémolyÿtique, la plupart des animaux meurent, d’où il résulte que, au delà de la dose minima mortelle, il n’existe pas de relation étroite entre la neutralisation et les actions hémolytique et toxique.

En résumé, les auteurs arrivent aux conclusions suivantes :

1° Le venin de Cobra est fortement hémolytique in vitro ;

2° Cette action est neutralisée spécifiquement par le sérum antivenimeux;

3° Pour certaines doses seulement (voisines de la dose minima mortelle pour le cobaye), la mesure de la neutralisation in vitro est aussi la mesure in vivo vis-à-vis du cobaye ;

4° Cette neutralisalion est exclusivement chimique.

Dans un autre travail sur le même sujet, les auteurs établissent que les solutions contenant 2 à 7 milligr. 5 de venin pour r cc. d’eau n'ont pas d’action hémolytique ou que, si elle existe, cette action est moindre que celle des solutions plus faibles. C’est ainsi que des solutions très diluées, soit par

exemple un volume de o cc. 5 ne contenant pas plus de o milligr. oog de venin hémolysent en moins d’une heure le sang de Chien et en quelques heures le sang d’homme ou de cobaye.

Poursuivant, en 1899-1900, les recherches commencées avec Myers, STEPHENS apporte quelques faits nouveaux intéressants, sans que les connaissances du moment lui permettent d’en fournir l'explication : il montre que l2 sang peut être hémolysé par une solution forte de venin de Cobra, si on lui ajoute une forte dose de sérum de cheval.

Essayant ensuite le sérum anticobra contre les effets hémolytiques des divers venins, il constate que cette action marquée, vis-à-vis du venin de Cobra lui-même, dont elle neutralise o milligr. 45, soit environ quatre fois la dose morteile, est très faible vis-à-vis des venins de Pseudechis porphyriacus, de Crotalus terrificus et de Vipera russelli : la dose de o milligr. 03 du venin de cette dernière espèce est en effet bien inférieure à la dose mortelle.

Le sérum normal ou le sérum antivenimeux de cheval possède, d’après STEPHENS, une action assez inconstante : il produit quelquefois une hémolyse progressive et rapide lorsqu'il est, par exemple, employé à dose incomplètement neutralisante ; mais il produit quelquefois aussi l'effet opposé, ce qui laisse dans l'incertitude quant à l’unicité ou à la pluralité de nature des hémolysines d’un même venin.

Pour essayer de dissocier les substances hémolytique et toxique, STEPHENS emploie la filtration sous pression sur une bougie gélatinisée ayant préalablement servi à filtrer du sérum de bœuf : une solution à 0,25 pour 1.000 de venin de Cobra est ainsi filtrée à plusieurs reprises jusqu’à ce qu'elle ne donne plus la réaction de l’albumine ; le filtrat, chaque fois essayé quant à son action hémolytique et toxique, se montre encore actif après le troisième passage, mais non plus après le quatrième, où il donne faiblement la réaction du biuret.

En 1900, Myers apporte une contribution importante à la connaissance des principes constituants du venin de Cobra. D’après les résultats de précédentes recherches et la considération de plusieurs ordres de faits, il conclut que dans le venin de Cobra il existe au moins deux substances toxiques, l’une hémolytique, qu'il appelle Cobralysine, l’autre qui entraîne la mort, probablement par action sur le bulbe et arrêt respiratoire, et qu'il appelle Cobranervine. Weir-Mrronezz et ReIcHERT avaient déjà montré, à propos du venin de Crotale, qu'une dissociation des deux substances pouvait être faite par l’action de la chaleur, qui précipite d’abord la substance hémolytique avant de détruire la substance neurotoxique. Une deuxième raison est déduite du fait, démontré par Srepnens et Myers, que les principes à action toxique mortelle sont mis en liberté en quantité très grande quand des doses multiples de Cobralysine sont neutralisées par l’antivenin : c’est seulement, avons-nous vu, pour les doses voisines de la dose mortelle que la neutralisation des deux effets suit une marche parallèle. Enfin, un troisième argument est tiré de ce fait que la sensibilité in vitro des hématies d'animaux variés n’a aucune relation avec la sensibilité des mêmes animaux aux injections sous-cutanées de venin.

Dans cette série de recherches, Myers emploie la méthode de saturation fractionnée d'Enriicn sur la toxine diphtérique et son antitoxine, à l'analyse de la propriété de la Cobralysine de se combiner avec l’anticobralysine. Le choix du sang devant être soumis à l’hémolyse est assez délicat, car chez certains animaux (cobaye, chiens), les globules sont souvent hémolysés par le sérum normal de cheval ; l’auteur s’arrête aux globules de l’homme, qui, mis en suspension dans 1 cc. d’eau salée isotonique à 8 pour 1.000, sont hémolysés par o milligr. 003 à o milligr. 005 de venin, en l’espace de deux heures, à la température de 15°. Dans ces conditions, l’action hémolytique

de 1 milligramme de venin sec est neutralisée par 1 cc. 3 d’antivenin. Théoriquement, l’addition de un treizième de cette dose d’antivenin devrait neutraliser un treizième de milligramme de venin, et la seconde fraction encore la même quantité et ainsi de suite ; mais l'expérience prouve qu'il n’en est pas ainsi. La première fraction ne neutralise que o milligr. 8, laissant encore libre o milligr. 2. En ce qui concerne les unités hémolytiques, 1 milligramme de venin en contient 2.000 ; mais après l’addition de 1 cc. 3 : 13=0o cc. 1 seulement, il y avait 4oo unités neutralisées par cette fraction, qui, théoriquement, ne devrait neutraliser que 2.000 : 13, soit 154 unités. L’addition de o cc. 2 d’antivenin laissait 200 unités, celle de o cc. 4 125 unités, celle de o cc. 6 58,8 unités de o cc. 8, 20 unités, etc., et enfin celle de 1 cc. 3 moins d'une unité.

Ces résultats paradoxaux, observés pour la première fois par Enxrzicu, puis par MapsEN avec d’autres toxines, ont conduit Myers à considérer la Cobralysine elle-même comme un mélange de substances dont l'effet toxique ne peut être observé, mais qui ont une affinité variable pour l’antitoxine. Par cette hypothèse, Myers expliquait les résultats qu’il obtenait et pensait que le venin de Cobra contient, outre l’hémolysine réelle et intacte un certain nombre de toroïdes capables de se combiner à l’antitoxine, bien que, dans la conception d’'Exrzicu, leurs chaînes latérales hémotoxophores soient inertes. Parfois, la première fraction de sérum neutralisait un peu moins que la seconde ; dans ces cas, la présence de prototoxoïdes était manifeste. En fait, dans cette hypothèse, la neutralisation d’une quantité déterminée de Cobralysine représente la neutralisation de toxine et de toxoïdes (prototoxoïde et deutotoxoïde, mais non le dernier épitoxoïde réactif), et la quantité de chaque fraction d’antivenin à combiner à la toxine seule est toujours la même (différant seulement dans l'expression toxique), qui est düe à la toxine seule, et non aux toxoïdes inertes, mais capables de se combiner à l’antivenin. Enfin, Myers essaie de trouver pourquoi dans un venin il peut exister des toxines et des toxoïdes. Il trouve que si une solution de venin de Cobra est abandonnée à la température ordinaire, ou mieux encore à l’étuve à 37°, son pouvoir hémolytique diminue rapidement, tandis qu’on n'’observe pas une diminution parallèle de sa faculté de se combiner à l’antivenin. En d’autres termes, il se forme des toxoïdes dans de telles solutions.

En 1903, les recherches de LamB, aux Indes, confirment les observations de CunniNGnaM sur l’hémolyse in vivo par le venin de Cobra. Il observe aussi un exsudat sanguin chez l’Homme autour de la région mordue; il constate chez l’âne une décharge muco-sanguinolente par le rectum. Avec le venin de Vipera russelli en injections intraveineuses ou sous-cutanées, il observe

.de l’hémolyse chez le lapin, le pigeon, le cheval et l’âne : le sérum est laqué

avant et après la mort. L’œdème qui existe parfois au lieu d’inoculation est teinté par l’hémoglobine et non par les hématies intactes. L’urine est brun sombre.

Ére actuelle des recherches sur l’hématolyse

Ces premières constatations établissent suffisamment l’action hématolysante des venins ; elles montrent que, sous l’influence de ceux-ci, les globules blancs aussi bien que les globules rouges, peuvent être dissous ; qu'il y aurait ainsi lieu de distinguer l’érythrolyse et la leucolyse. La plupart des travaux ultérieurs n’ont en vue que la dissolution in vitro des globules rouges des diverses espèces animales. Nous résumerons, sans tenir compte de leur ordre chronologique strict, les faits précis, qui ont

été établis depuis 1902, par les travaux des auteurs suivants : FLEXNER et Nocucnr, Nocucni, CALMETrE, Prisauix, Kyes, Kyes et Sacns, MorGEN- ROTH, MorGENRoOTH et KayA, GOBEL, DUuNGERN et Coca, Banc, Banc et OvERTON, DELEZENNE et LEDEBT, DELEZENNE et FOURNEAU, et qui conduisent à l’interprétation des mécanismes de l’hématolyse par les venins.

Erythrolyse

En 1902, FLExNER et Nocucnr font une découverte qui marque le point de départ d’une ère nouvelle dans l'étude de l’hématolyse par les venins ; ils constatent que certains venins ne dissolvent pas les hématies lorsque celles-ci ont été complètement débarrassées de leur sérum par plusieurs lavages successifs dans une solution isotonique de sel marin ; mais qu'il suffit d'ajouter une trace du sérum correspondant à chacun d’eux pour que l’hématolyse se produise.

Ainsi les hématies lavées dans la solution isotonique de sel marin ne peuvent être disssoutes par l’action du venin seul ; il faut, comme .dans le processus le plus courant de l’hématolyse par les sérums, l’action complémentaire fournie par ceux-ci ; le sérum agirait par son complément ou alexine.

COMPLÉMENTS HÉMOLYTIQUES DES VENINS Compléments contenus dans le sérum des Serpents

FLexner et Nocucur se fondant sur les résultats obtenus par EnrLic et MorGENROTH, à savoir que les composants sensibilisateurs du venin se trouvent en quantité dix fois plus grande vis-à-vis des sérums correspondants que vis-à-vis des sérums étrangers, étudièrent l’action complémentaire du sérum des serpents eux-mêmes (Crotalus adamanteus, Ancistrodon piscivorus, et Pituophis catenifer, cette dernière espèce étant considérée comme non venimeuse), sur l’hémolyse par les venins de Crotale, d’Ancistrodon et de Cobra.

Le sérum était débarrassé de ses constituants sensibilisateurs par contact à froid avec les globules lavés de l’espèce sur laquelle on devait essayer l’hémolyse, puis séparé par centrifugation ; il contenait ainsi le complément pur.

Sérum de Crotale. — a) Avec le venin de Crotale : 1 cc. de solution de 5 milligr. de venin dans l’eau salée physiologique + o cc. 5 de sérum + 5 % de globules lavés de cobaye donnent une hémolyse qui est com- | plète en 30 minutes ; avec les globules de chien il faut 50 minutes.

En substituant le sang défibriné aux globules lavés, l’hémolyse est très accélérée ; elle est immédiate avec le sang de chien, et se produit en 8 minutes avec celui de cobaye.

b) Avec le venin d'Ancistrodon contortrixr. — Le mélange 1 cc. (= 2 milligr. de venin) + o cc. 5 de sérum dissout en 4o minutes 5 % de globules lavés de chien.