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Lésions. — Ce sont des lésions de congestion passive et d’hémorrhagie. Le tube digestif, les reins, le cerveau, les muscles présentent une congestion plus ou moins marquée et des taches ou de petits épanchements hémorrhagiques. Cette action est moins intense qu'avec le venin de vipère.

Immunité naturelle contre le venin muqueux

S’il est possible, comme nous l’avons montré, d’envenimer mortellement les Serpents et les Batraciens avec le mucus de la peau de ces derniers, il faut du moins employer des doses qui sont très élevées, comparativement à celles qui suffisent à tuer les Mammifères et les Oiseaux.

Le tableau ci-contre donne une idée assez exacte de la résistance relative des divers Vertébrés au mucus de quelques Batraciens. On y remarquera en effet que la dose mortelle pour une vipère, qui ne pèse pas plus de 50 gr., ou pour une grenouille, ne dépassant pas 25 gr., n’est pas plus élevée que pour un lapin pesant 1.300 gr., et que cette dose n’a même aucun effet sur la Couleuvre vipérine et la Salamandre terrestre.

Mécanisme de l’immunité. — Nous verrons que les Serpents sont aussi résistants que les Batraciens eux-mêmes à la salamandrine, et que leur immunité est due à l’antagonisme physiologique entre cette substance et la toxine contenue dans leur sang.

C’est par ce même mécanisme que les Batraciens, et en particulier la Salamandre, sont protégés à la fois contre leurs sécrétions cutanées, toutes deux venimeuses, l’une primitivement paralysante comme le venin de Vipère, l'autre tétanisant d’abord les muscles comme la salamandrine ; et on comprend que la présence simultanée dans leur sang de ces venins à effets opposés, maintienne l’équilibre physiologique chez l’animal normal, et que cet équilibre puisse être rétabli chez l’animal inocuié par l’apport immédiat et constant du produit antagoniste.

Quant à l’immunité naturelle des Vipères et des Couleuvres contre le mucus, elle a la même origine que celle de ces Reptiles contre leur propre venin : elle est due à l’antitoxine dont C. Pmisaix a montré l'existence dans leur sang, et qu'il a désignée sous le nom d’échidno-vaccin.

Si on détruit en effet le pouvoir toxique du sérum de Vipère, soit en le chauffant pendant 15 minutes à 58°, soit en le précipitant par cinq à six fois son volume d'alcool à 95°, on constate qu'il se montre antitoxique aussi bien vis-à-vis du mucus d’Axolotl que vis-à-vis du venin de Vipère : c’est ainsi que le mélange in vitro du précipité de 4 cc. de sérum avec la dose de mucus mortelle pour la Vipère, inoculé dans l’abdomen de celle-ci, ne produit plus qu’une asthénie passagère, alors que les témoins meurent en quelques heures. La même dose de ce précipité, inoculé dans l’abdomen vingt-quatre heures avant l’inoculation sous-cutanée de mucus, exerce également chez la Vipère une action préventive contre la dose mortelle de celui-ci. Mais la dose d’antitoxine contenue dans le sérum d’une seule Vipère serait insuffisante à neutraliser la dose élevée

de mucus qui la fait périr, et suffirait à peine à protéger un animal sensible : il faut donc admettre ou bien que l’inoculation du mucus, comme celle du venin de Vipère, est suivie de la formation plus active d’antitoxine, comme elle serait chez les Batraciens suivie d’un apport plus rapide du venin antagoniste, ou bien que les cellules nerveuses des animaux réfractaires ont une résistance particulière au venin paralysant.

Ce qui montre la réalité de la première hypothèse, c’est qu’on peut paralyser les Batraciens et les Serpents en portant directement le poison sur leurs centres nerveux; ainsi, une Couleuvre à collier meurt en trois heures, une Grenouille verte en quinze heures, après avoir reçu sur l’encéphale, à travers la membrane occipito-atloïdienne, la vingtième partie du mucus qu'elles tolèrent par les autres voies. Les cellules des centres nerveux des animaux les plus réfractaires n’ont donc pas de résistance manifeste au venin muqueux ; et on constate qu'il en est de même visà-vis de la salamandrine ; une dose de o mgr. 5 de ce venin, introduite semblablement dans le crâne, convulsive aussitôt et tue en trente minutes une Couleuvre à collier qui en supporterait 15 milligr. par les autres voies.

La Salamandre elle-même est tétanisée par o mgr. 30, et la Grenouille verte par o mgr. 10 de salamandrine, alors qu’il faudrait des doses 10 et 6 fois plus grandes introduites sous la peau ou dans l’abdomen pour produire le même effet.

La sensibilité des cellules cérébrales aux venins est telle qu'elle permet de déterminer exactement les doses de venins antagonistes dont les effets s’annulent ; c’est ainsi que le mélange des solutions à 2 pour 1000 de salamandrine et de venin de vipère, dans les proportions de 1/3 de la première pour 2/3 de la seconde, ne produit pas plus d'effet que les mêmes volumes d’eau salée physiologique inoculés aux animaux témoins.

Il en est de même quand on substitue au venin de vipère le mucus de Salamandre terrestre, dont on peut facilement régler la concentration, et qui, sans perdre ses propriétés toxiques, peut être, ainsi que la salamandrine, stérilisée par la chaleur, ce qui écarte les causes d’erreur, dues à la présence de toxines microbiennes par exemple.

Non seulement les animaux neufs, mais encore ceux dont on a renforcé l’immunité naturelle par une ou plusieurs inoculations de venin, se montrent sensibles à l’inoculation intra-crânienne, sans qu'on puisse établir de différence avec les premiers dans la façon dont ils réagissent au mucus ou à la salamandrine : c’est ainsi qu’une Couleuvre à collier qui avait supporté l’inoculation sous la peau du mucus de six Salamandres, et une Couleuvre vipérine qui avait de même résisté à l’inoculation de la quantité de mucus correspondant à la peau du ventre d’un Axolotl, sont mortes de la même façon et dans le même temps que les témoins inoculés comme elles avec la même dose de mucus de Salamandre.

La résistance des cellules nerveuses des Batraciens et des Serpents ne semble pas non plus augmenter par les inoculations répétées de venin à

leur surface, car une Grenouille verte qui avait reçu, à intervalles de quelques jours, de petites doses de son propre mucus, s’est montrée aussi sensible à la quatrième inoculation qu’à la première ; et il en a été de même pour une Couleuvre à collier vis-à-vis d’inoculations répétées de salamandrine.

Ces résultats, joint à ceux que nous avons déjà obtenus, établissent les rapports d’immunité réciproque des Batraciens et des Reptiles, ainsi que les analogies du mucus des Batraciens avec le venin de Vipère et le sérum d’Anguille. Ils sont à rapprocher de ceux qui ont été obtenus par C. Pri- SALIX avec la salamandrine déposée directement sur les lobes optiques de la Salamandre elle-même, et avec le venin de Vipère introduit dans 1e crâne de ce Serpent, de ceux de MM. Roux et Borrez avec la morphine,

les toxines tétanique et diphtérique, de MM. LinGeLzsnEeIM, BoRREL, avec

la toxine tuberculeuse, et de ceux de M. Gzeyx avec les sérums d’Anguille et de Torpille.

Immunité acquise

La grande analogie qui existe entre l’action physiologique de la sécrétion cutanée muqueuse des Batraciens et celle des sérums d’Anguille et de Hérisson, des venins d’Abeille, d’Araignée et de Vipère, sérums et venins qui, privés en tout ou en partie de leur pouvoir toxique par un chauffage approprié, se comportent comme des vaccins vis-à-vis du venin de Vipère lui-même, pouvait faire prévoir que le venin muqueux possèderait la même action immunisante.

Déjà en 1897, C. Pnisarix avait montré cette action pour le venin de la Salamandre du Japon (Megalobatrachus japonicus, TEmmincx), en se fondant précisément sur son analogie d’action avec le sérum d’Anguille dont il venait d'établir les propriétés vaccinantes.

Il avait constaté aussi que non seulement le venin de la Salamandre du Japon, chauffé pendant 20 minutes à 5o° vaccine la grenouille contre l’action mortelle du venin entier, mais encore que, si on l’inocule à doses petites et répétées au cobaye, il immunise celui-ci contre la dose mortelle de venin de Vipère.

Ces recherches que nous avons étendues à un certain nombre de Batraciens : Salamandra maculosa, Rana esculenta, Pelobates cultripes, Discoglossus pictus, Alytes obstetricans, Siredon axolotl, Rana temporaria, Siren lacertina, de même qu’à des poissons, l’Anguille et le Protoptère, ont niontré qu'il est possible de vacciner les animaux sensibles avec la plupart des mucus de la peau.

Vaccination de la Grenouille verte contre son venin muqueux. — Nous avons vu que le mucus d’une seule grenouille suffit à en tuer une plus petite par inoculation intra-péritonéale. Mais le chauffage en pipette

close à 100° pendant 5 à 6 minutes fait perdre à ce venin ses propriétés

toxiques, en même temps qu'il met en évidence ses propriétés vaccinantes. La dose de venin muqueux qui serait mortelle, si elle était inoculée fratche, devient un vaccin quand elle est chauffée ; après deux inoculations intra-péritonéales faites à trois jours d'intervalle de une, puis de deux fois la dose qui serait mortelle, le sujet peut subir avec succès l’épreuve de la dose mortelle ; l’immunité déjà manifeste au bout de 24 heures, est complète au bout de 48 heures.

On obtient les mêmes résultats quand on emploie comme substance immunisante le mucus frais de Discoglosse ; il suffit de l’eau de lavage d’un seul sujet, pour immuniser par injection intra-péritonéale, la grenouille contre la dose mortelle de son propre venin.

Vaccination du Cobaye contre le venin muqueux. — Elle a été réalisée avec du venin muqueux d’Axolotl. La dose mortelle pour un jeune cobaye du poids de 100 gr., correspond à la macération de la moitié de la peau du ventre d’un sujet qui mesure 18 cm. de long.

Le même mucus chauffé à 58° pendant 15 m. conserve ses propriétés vaccinantes.

Deux inoculations sous-cutanées faites à trois jours d'intervalle avec des doses équivalentes au 1/3 puis aux 2/3 de ce que fournit la peau du ventre d’un Axolotl, suffisent pour prévenir l’action de la dose mortelle du venin entier. À l’épreuve, le cobaye ne manifeste qu’un peu de stupeur passagère.

Vaccination du Lapin contre le venin muqueux. — L'’immunisation la plus rapide s'obtient en inoculant la solution venimeuse directement dans les veines. Mais, comme l’action du venin entier est dans certains cas foudroyante (venin d’Alytes obstetricans, de Discoglossus pictus, de Rana esculenta...), il est nécessaire de détruire l’action phlogogène et la toxicité par un chauffage approprié. Il est commode également de n’employer qu’un mucus de toxicité moyenne, et qui ne présente pas de grandes variations d'activité. Le mucus de la Salamandre terrestre répond à ces conditions ; il présente en outre l’avantage de conserver ses propriétés après une ébullition prolongée pendant plus d’une demi-heure, ce qui permet de réaliser des inoculations aseptiques. On a vu qu'il faut le mucus entier de quatre sujets, en moyenne, pour déterminer la mort du lapin par inoculation intraveineuse ; or, deux inoculations successives faites à quelques jours d'intervalle les unes des autres, avec des doses de mucus chauffé, doubles de la dose. mortelle, vaccinent le lapin contre la dose mortelle de venin non chauffé ; l’animal ne manifeste aucun des symptômes qu’on observe sur les sujets neufs : asthénie, stupeur, paralysie, hypothermie, mydriase.

On obtient les mêmes effets immunisants si l’on emploie, sans chauffage préalable, des venins peu toxiques comme celui de Pélobate cultripède, ou des venins plus actifs, mais très dilués, comme ceux d’Alyte, de Discoglosse ou de Grenouille verte ; mais il faut dans ce dernier cas

procéder avec grande précaution pour ne pas perdre d'animaux au cours de l’immunisation ; et on observe toujours à chaque inoculation les symptômes, atténués, il est vrai, mais manifestes, des solutions concentrées.

De plus, l’immunisation commencée avec le venin muqueux d’un Batracien peut être continuée avec celui d’une autre espèce ; c’est ainsi qu'un sujet, inoculé d’abord avec du mucus de Pélobate et quelques jours après avec du mucus de Discoglosse, s’est montré aussi bien immunisé que ceux qui n’avaient reçu qu’un même mucus.

Ce fait d'équivalence immunisante entre les mucus d’espèces zoologiques différentes offre une commodité très précieuse au point de vue de son utilisation pratique ; il est analogue à celui des équivalents toxiques des poisons.

Vaccination contre le venin de Vipère aspic. —- Nous avons vu que le venin muqueux des Batraciens a une grande analogie d’action physiologique avec celui du venin de Vipère. Ce fait entrevu par C. Pnisazix a été pleinement confirmé par nos propres recherches.

C. Prisauix a montré que les Grenouilles qui ont été vaccinées contre le venin muqueux de la Salamandre du Japon et qui ont subi avec succès l’inoculation d’épreuve de ce venin résistent deux jours après à la dose mortelle de venin de Vipère.

Toutes nos expériences confirment ce premier résultat : la Grenouille verte fortement immunisée contre l’action toxique de son propre mucus, l’est également contre le venin de Vipère, car, éprouvée trois jours après la dernière inoculätion de son venin, avec 1 milligr. de venin de Vipère, elle résiste à cette dose qui fait mourir en l’espace de 4 heures la Grenouille non préparée.

Mais le venin muqueux n’est pas antitoxique vis-à-vis du venin de la Vipère, car les sujets qui reçoivent un mélange de la dose mortelle de chaque venin meurent en même temps que les témoins.

De même le cobaye, vacciné contre le venin d’Axolotl, supporte l'inoculation de la dose mortelle de venin de Vipère. Il manifeste seulement l’action locale atténuée du venin, de la rougeur de la peau du ventre qui n’aboutit pas à l’escarre ; mais pas de symptômes généraux, notamment cette hypothermie progressive qui accompagne l’envenimation vipérique à terminaison fatale.

De même encore le lapin vacciné contre le venin de Salamandre terrestre par des inoculations intraveineuses de ce venin peut subir avec succès 5 jours après l’épreuve de l'injection intrapéritonéale d’une dose de 10 milligr. de venin, qui est deux fois mortelle pour un lapin de même poids non préparé.

Vaccination du Lapin contre le virus rabique. — Le venin muqueux de Salamandre, non plus que le venin de Vipère employés seuls ne confèrent au lapin une immunité manifeste contre la rage expérimentale produite par l’inoculation intra-cérébrale de virus fixe ; ils retardent seule-

ment l’éclosion de celle-ci ; mais fait particulier, les animaux immunisés successivement contre les deux venins, ou simultanément par des inoculations intra-veineuses du mélange de ces venins, se montrent réfractaires au développement du virus fixe.

Dans ces expériences, nous avons employé le venin de Salamandre terrestre stérilisé par ébullition et ensuite le venin de Vipère en solution aqueuse au 1/1000, ou bien encore, et avec le même résultat, le mélange des deux venins chauffé en pipette close pendant 15 minutes à la température de 75° qui ne détruit pas l’échidnovaccin du venin de Vipère.

Les inoculations, au nombre de quatre ou cinq ont été faites à 3 jours d'intervalle, et les lapins trépanés 6 jours après la dernière inoculation ; ils ont résisté et étaient donc immunisés.

La durée de l’immunité conférée par ce moyen est voisine de deux mois ; les lapins trépanés et inoculés à nouveau avec le virus fixe au bout de temps variables, depuis 6 semaines à 6 mois, n’ont de nouveau résisté que 6 et 7 semaines après la première épreuve de virus fixe ; les autres ont succombé comme les témoins.

Nous avons obtenu les mêmes effets immunisants contre le virus fixe en substituant au venin muqueux de Salamandre celui de l’Axolotl ou de la Grenouille rousse. La quantité de venin fournie par deux Axolotls ou trois Grenouilles rousses et celle fournie par une seule Vipère, soit 10 milligr. environ, suffisent à immuniser un lapin. Dans ces expériences, nous avons mélangé les produits venimeux, et après chauffage du mélange en pipettes closes à 75° pendant 15 minutes, nous l’avons inoculé de deux en deux jours aux doses croissantes de 1, 2, 3, 4, 5 cc. Les sujets éprouvés trois jours après la dernière inoculation intraveineuse par introduction de virus fixe dans le cerveau, ont tous résisté à cette inoculation.

Dans cette vaccination, il est à remarquer que la ou les substances immunisantes ne résultent pas d’une réaction chimique entre les venins employés, car on obtient les mêmes résultats quand on vaccine successivement par l’un puis par l’autre venin, ainsi que nous avons procédé dans nos premières expériences.

La durée de l’immunité ainsi conférée s’est montrée, comme dans les premières expériences, voisine de deux mois.