VENIN GRANULEUX DU CRAPAUD COMMUN

PRÉPARATION. — Pour obtenir le venin en nature, on peut l'exprimer par pression directe des groupes glandulaires, tels que la parotide et les pustules de la face dorsale du corps. On peut également, si l'on veut obtenir une sécrétion généralisée, avoir recours à l'excitation électrique des lobes optiques préalablement mis à nu; ou à l'excitation du nerf d'une région si on veut mettre en évidence la richesse en glandes granuleuses de cette région.

On râcle ensuite la peau pour enlever le venin jaunâtre qui se concrète bientôt en une masse collante.

On peut enfin recevoir dans l'eau le venin directement exprimé et le traiter, ainsi que les peaux, pour en extraire les principes actifs, comme nous le verrons plus loin.

Propriétés générales du venin

C'est un liquide crémeux, de couleur blanc-jaunâtre, qui, au contact de l'air devient pâteux, puis se dessèche en donnant une masse dure, cornée, demi-translucide et cassante. Il devient plus fluide et plus opalin après une sécrétion prolongée de la glande, les fines granulations qu'il tient en suspension ne se régénérant pas aussi vite que la partie fluide, comme l'avaient déjà remarqué VuLpran, puis CALMEES.

Il répand une odeur aromatique particulière, La saveur en est amère et la réaction acide. Projeté directement dans l’eau, il s'y dissout partiellement, donnant un résidu floconneux blanc. L'émulsion examinée au microscope montre des granulations venimeuses à peu près uniformes ei plus petites que celles du venin de Salamandre. Les réactifs histochimiques les colorent avec la même électivité que lorsqu'elles sont encore incluses dans l’acinus glandulaire.

Extraction et propriétés des principes actifs

En 1817, PELLETIER a été le premier à rechercher les propriétés du venin de crapaud ; il en constate l'acidité et la solubilité partielle dans l'alcool.

Plus tard (1863), Jonx Davy constate aussi ces propriétés ; il voit, de plus, que les solutions aqueuses ou alcooliques précipitent légèrement par le sublimé, mais non par l'acétate de plomb, qu'elles virent à la teinte pourpre sous l'influence de l'acide azotique, et remarque que l’extrait alcoolique a une saveur amère comparable à celle de la teinture d'aconit.

La première tentative d'extraction des principes actifs est faite en 1892 par GRATIOLET et CLoEz. Ils traitent à froid le venin desséché par l’éther rectifié. La solution est évaporée et le résidu, qui apparaît au microscope comme formé de granulations oléagineuses mélangées de fines aiguilles cristallines, est aussitôt inoculé à un Verdier, dont il détermine la mort en l’espace de quatre minutes. Ce résidu est donc très toxique ; il est traité par l'alcool qui en sépare plus ou moins complètement le principe actif. Celui-ci est complètement soluble dans l'eau acidulée d’acide chlorhydrique.

La solution ainsi obtenue précipite par les bichlorures de platine et de mercure, d’où les auteurs concluent à la nature alcaloïdique du principe actif.

En 1873, Casari et ForNara, en appliquant au venin de crapaud la méthode de Stas-Otto, en retirent un alcaloïde qu'ils appellent Phrynine et dont ils ne peuvent établir la composition centésimale. Ce corps blanc, amorphe, est peu soluble dans l’eau, mais très soluble dans l'alcool, l’éther et le chloroforme. Il précipite par les acides picrique et iodique, ainsi que par le chlorure de platine.

Forxara à montré, de plus, que cette substance agit comme la digitale sur la respiration et la circulation; en faisant contracter les artérioles et élevant la pression, elle accroît les contractions cardiaques et la diurèse.

CaLMELs, en 1884, déduit de ses recherches que le venin de crapaud contient surtout de l'acide méthylcarbilamine-carbonique ou isocyanacétique, et une petite quantité de méthylcarbilamine à laquelle il doit son odeur et une partie de sa toxicité. Burazint (1885) a obtenu avec le venin de Crapaud la diazo-réaction, indiquant ainsi la présence d’une substance réductrice encore inconnue.

En 1893, MM. C. Prisazix et G. BERTRAND, au cours de leurs recherches sur la toxicité du sang de Crapaud commun, ont signalé aussi l'existence de produits alcaloïdiques dans le venin en faisant toutefois remarquer que c'était à d'autres produits de nature encore inconnue qu'il fallait rapporter presque toute l'activité de cette sécrétion toxique. Mais, quelques années après, en 1897, R. Hewzer revient à l’idée d’un alcaloïde comme substance active, sans doute en raison de l’amertume du venin. Ayant traité celui-ci, de même que les glandes, par l’alcool absolu, il obtint après filtration et évaporation un résidu grisätre, amorphe, soluble dans l’eau distillée et plus encore dans l’eau acidulée d'acide chlorhydrique. Cette solution présente, d'après l’auteur, toutes les réactions de la digitaline.

Quelques années après (1902), En. Faust publiait un travail d'après lequel le venin de crapaud doit son activité à deux substances, qu'il nomme Bufonine et Bufotaline, ayant toutes deux, mais à un degré différent, la même action physiologique. Pour extraire ces substances, l’auteur tue les animaux par le chloroforme, les dépouille et fait macérer les peaux dans l'alcool à 96° pendant plusieurs semaines. L’extrait alcoolique repris par l’eau laisse la bufonine insoluble ; on purifie cette substance en la recristallisant après dissolution dans l'alcool chaud. Quant à la bufotaline, passée en dissolution dans l’eau, on la sépare, soit par précipitation avec l’iodure double de potassium et de mercure, soit par agitation avec du chloroforme. Les deux substances ainsi obtenues ne contiennent pas d'azote ; la bufonine est une substance neutre, la bufotaline, au contraire, a une réaction acide. L'auteur prétend qu'on peut passer de la première à la seconde par oxydation à l’aide du mélange chromo-sulfurique.

L'action physiologique de ces deux substances serait presque identique à celle de la digitaline.

Les résultats obtenus par Fausr ne rendant pas compte de tous les caractères physiologiques du venin et étant sur quelques points contradictoires avec les expériences poursuivies depuis 1893 par MM. Parsartx et BERTRAND, ces auteurs en cherchèrent les raisons dans les différences de préparation des principes actifs.

La méthode employée par Fausr enlève effectivement à la peau du crapaud des substances qui n’ont aucun rapport avec le venin, ce qui

explique pourquoi MM. Prisaix et BERTRAND n'ont pu retrouver la bufonine dans le venin exprimé directement des glandes.

Pour séparer les principes actifs, les auteurs expriment sous l’eau, au moyen d'une pince à mors plats, le contenu des parotides jusqu’à enrichissement suffisant de l’eau en venin, c’est-à-dire jusqu'à saturation. Le liquide lactescent ainsi obtenu a une réaction acide ; il est filtré à la bougie de porcelaine et évaporé à consistance d'extrait. Pendant l’évaporation, il se sépare une substance peu soluble, sous forme d’une pellicule blanche, qu'on écume au fur et à mesure de sa formation. On lave cette substance à l'eau distillée, puis on la redissout dans l'alcool absolu ou le chloroforme ; il se sépare un peu de matières albuminoïdes et le liquide filtré est évaporé complètement.

Le corps ainsi obtenu est un des principes actifs du venin, celui qui agit sur le cœur de la grenouïlle et l’arrête en systole. Il se présente sous la forme d’une résine transparente, presque incolore, et dont la composition centésimale correspond à la formule brute C9 HI 0%. Fausr attribuait à la bufotaline la composition C7 H% O5. Malgré la différence de ces deux formules, Paisauix et BERTRAND pensent que le corps isolé et la bufotaline sont identiques ; mais la bufotaline de Fausr, retirée de l’extrait de la peau entière, s'y trouve souillée par un corps acide, car la bufotaline retirée du venin seul est neutre.

La bufotaline pure est très soluble dans l'alcool, le chloroforme, l’acétone, l’acétate d’éthyle et l'acide acétique, moins dans l’éther, très peu dans le tétrachlorure de carbone, insoluble ou presque dans le sulfure de carbone, le benzène et l’éther de pétrole. Lorsqu'on ajoute de l’eau à sa solution alcoolique, elle précipite en donnant une émulsion blanche qui finit par se dissoudre dans un grand excès d’eau. Cette solution a servi aux auteurs à leurs expériences physiologiques.

Bien que très diluée, elle a une saveur très amère et laisse sur la langue une sensation spéciale très persistante.

Le second principe, que MM. Prisauix et BERTRAND appellent bufoténine, celui qui agit sur le système nerveux et détermine la paralysie, reste dans l'extrait aqueux d'où a été séparé le poison cardiaque. Il renferme encore une certaine quantité de celui-ci et quelques autres substances parmi lesquelles une matière albuminoïde et du chlorure de sodium. Pour le purifier, on le reprend par l'alcool à 96° ; la solution filtrée est distillée et le résidu, dissous dans l’eau, est déféqué par le sousacétate de plomb et l'hydrogène sulfuré. On obtient de la sorte une solution peu colorée, qu’on épuise successivement par le chloroforme ‘ pour en extraire le poison cardiaque, et par l’éther, qui enlève presque tout l’acide acétique ; la bufoténine se trouve dans le résidu de la solution évaporée à sec dans le vide.

En résumé, d’après MM. Pmisarix et Berrran», le venin de crapaud doit son activité à deux substances principales, la bufotaline, de nature

résinoïde, soluble dans l'alcool, mais peu soluble dans l’eau, et la bufoténine, très soluble dans ces deux dissolvants.

Injecté à la grenouille, qui lui est très sensible, le venin de crapaud amène l'arrêt du cœur en systole à cause de la première substance, tandis que la seconde entraîne la paralysie.

Action physiologique

Les auteurs anciens sont tous d'accord pour reconnaître à la sécrétion laiteuse dorsale des Salamandres et des Crapauds des propriétés venimeuses ; On trouve dans ARISTOTE, dans THÉOPHRASTE, dans PLINE et dans Dioscoripe plusieurs passages qui s’y rapportent.

La réputation du venin de Crapaud, en particulier, s'est étendue jusqu'aux auteurs dramatiques, qui y font très souvent allusion : Shakspeare, dans « Macbeth », en fait un des ingrédients essentiels que les sorcières ont à introduire dans leur chaudron. L'opinion populaire, en pays de Galles, voulait qu'un chien qui tourmente un crapaud devint fou. Si le chien ne devient pas fou au sens propre du mot, il lâche du moins prise aussitôt, en salivant beaucoup et en proie, semble-t-il, à des hallucinations. On rapporte des observations d’empoisonnement chez des chiens après introduction de venin de crapaud dans la bouche Vox MÉnELy (cité par G.-A. Boulenger) a observé le fait sur un petit fox-terrier. BriNGARD (1905) en signale également des cas. Plus anciennement, GEMMINGER (1862) a vu mourir empoisonné un Epervier qui avait saisi un crapaud dans son bec.

Les premières expériences précises sont dues à GRATIOLET et CLOEZz (1851) ; elles montrent que 2 milligrammes de venin sec introduits sous la peau d’un Verdier déterminent la mort en 5 à 6 minutes, sans convulsions : l'oiseau ouvre le bec, chancelle comme en état d'ivresse, ferme les yeux et tombe mort. Une dose moindre serait aussi efficacement foudroyante.

Ces auteurs virent de même que les chiens et les cobayes sont tués en 30 à 90 minutes par l’inoculation sous-cutanée de venin de crapaud. Ils notent une période d’excitation suivie d’une période d'’affaissement et une période nauséeuse aboutissant parfois aux vomissements. Chez les cobayes seulement, il se produirait, pendant un temps assez long, une période convulsive qui manque chez le chien ; mais la mort est précédée chez celui-ci d'une sorte d'ivresse qui dure environ deux minutes.

VuLpran, vers la même époque (1854-1856), s'est également occupé du venin de crapaud et ses travaux sont de ceux auxquels on se rapporte les plus volontiers. Cependant, les symptômes de l’envenimation n'y sont pas analysés très finement, à part l’action cardiaque, tantôt diastolique et tantôt systolique, mais en tous cas suivie de mort, et l'absorption possible du venin par les plaies cutanées chez le chien et le cobaye et par la peau intacte des grenouilles et des tritons, qui sont tués en deux

ou trois heures. L'introduction directe du venin dans la bouche d'un chien n'a déterminé que des vomissements, suivis de la guérison en moins d’une heure.

Malgré ces expériences concluantes sur les effets du venin dorsal de crapaud, Rainey (1855) n'obtient, pas plus que Davy, d'effets sensibles en appliquant le venin frais sur une plaie récente de l'oreille d’un chat, non plus qu'en introduisant en séton, dans la peau de souris blanches, un fil trempé dans le venin frais, ou même en inoculant des cra: pauds avec leur propre venin. L'auteur admet toutefois que ces résultats n'ont pas la valeur des faits positifs et qu'ils laissent simplement subsister un doute sur ceux qu'ont obtenus les auteurs français.

ForNARA (1877) a, mieux que VuzriAN, mis en lumière l’action tétanisante que le venin exerce sur le ventricule, action qui se produit encore après la section de la moelle ; il a réduit les convulsions au rang de symptôme secondaire et accessoire. Il employait soit l'extrait alcoolique, soit l'extrait aqueux du venin, soit l’eau de lavage du crapaud mis en sécrétion généralisée par l'excitation électrique, ce qui donnait dans tous les cas un mélange en proportions diverses des deux sécrétions. Malgré la variété de ces mélanges, c'est le venin dorsal qui y dominait, car les effets en sont assez bien décrits. Les résultats contradictoires dûs à la présence du venin muqueux sont mentionnés à titre d'exception.

CaLmELs, en 1883, a donné un résumé succinct, mais exact, de l’action du venin de crapaud ; il a vu, en outre, ce fait significatif que si, avant d'électriser le crapaud pour en faire sécréter la peau, on a soin de laver le ventre pour éliminer toute trace du venin descendu des flancs et du dos, « on ne rencontre plus avec le liquide ventral les effets nets et caractéristiques observés avec le liquide dorsal ». Le produit essayé dans ces conditions ne pouvait être que du venin muqueux, dont CALMELS constate ainsi implicitement l’action toxique. Il n'avait d’ailleurs pas à s'étonner de ce résultat, puisqu'il considérait les glandes muqueuses comme un stade de l’évolution des glandes granuleuses. Ce qui semble plus surprenant, c'est que P. ScHuLrTz, après ces expériences de CALMELS, refuse aux glandes muqueuses, dont il constate la présence sur le ventre à l'exclusion des autres, la possibilité de sécréter un venin, en fondant son opinion sur leurs caractères histologiques !

Les recherches physiologiques plus récentes que nous avons entreprises depuis 1895 ont montré que cette sécrétion muqueuse est cependant la plus intéressante des deux sécrétions cutanées par les symptômes qu'elle détermine et par les propriétés variées qu’elle manifeste. Enfin, G. PIERROTTI, en 1906, a donné une importante monographie de 120 pages faite à Pise sous la direction du professeur Apucco, et comprenant la bibliographie de la question. Cet auteur emploie soit le venin en solution aqueuse, soit les extraits alcoolique, éthéré, ou l’extrait aqueux dialysé.

Il fait remarquer que la partie active de la sécrétion n'est influencée par aucun des agents physiques ou chimiques ordinaires : temps, lu-

mière, chaleur, putréfaction, dialyse, alcool, éther, solutions légèrement acides ou légèrement alcalines, et pense, sans avoir fait de recherches chimiques à ce sujet et sans tenir aucun compte de celles qui ont été faites antérieurement, que cette portion active est vraisemblablement composée de un ou plusieurs alcaloïdes.

ACTION GÉNÉRALE. — Action sur la Grenouille. — La grenouille est un des Batraciens les plus sensibles au venin de crapaud. La dose mortelle par la voie sous-cutanée ou péritonéale correspond à 35 milligr. de venin brut par kilo et à 25 milligr. si on emploie le résidu de l'extrait aqueux dialysé. Par la voie gastrique, cette dose minima mortelle est plus élevée et correspond à 76 milligrammes (Prerrorr).

L'inoculation d’une dose non mortelle détermine les symptômes suivants : au début, c'est une période d’agitation et d'hypersensibilité générale, compliquée d'état nauséeux ; puis, au bout d'une dizaine de minutes, surviennent de l'abattement et de la torpeur, phénomènes qui s'interrompent par des efforts de vomissements ; les battements cardiaques deviennent rares et amples, la systole ventriculaire est énergique, mais elle se fait péristaltiquement de la base à la pointe ; quelquefois même les mouvements sont dissociés, de telle sorte que la base et la pointe se contractent successivement et semblent alors séparés par un étranglement ; mais une légère excitation mécanique amène la rétraction immédiate du ventricule, qui reste pâle et contracté et s'arrête toujours dans les cas de mort avant les oreillettes.

Cette action sur le cœur est donc caractérisée au début par un ralentissement considérable dû à l'excitation des centres modérateurs et par une paralysie des centres accélérateurs et du sympathique, s’accordant avec le rétrécissement observé de la pupille; puis survient la phase d'irrégularité avec contractions péristaltiques du ventricule ; enfin, arrêt de celui-ci par rétraction progressive du muscle.

La paralysie des centres nerveux et des nerfs ne pourrait expliquer l'arrêt, puisque la même action se produit lorsqu'on isole le cœur ; c’est donc une action sur les ganglions cardiaques et le muscle lui-même.

Simultanément à cette action cardiaque, la respiration est modifiée ; les mouvements hyoïdiens sont d'abord anxieux, amples et rares ; ils se régularisent ensuite peu à peu si la dose n'est pas mortelle, sinon ils subissent des arrêts de plus en plus fréquents avant l'arrêt définitif qui précède celui du cœur.

La motricité est également affectée ; on constate d'abord des contractions fibrillaires des muscles, de la parésie, puis de la paralysie du train postérieur.

L'ensemble des symptômes caractéristiques et constants du venin de crapaud observés sur la grenouille se résume ainsi : affaiblissement de la respiration, dont l'arrêt précédant celui du cœur, entraîne la mort; ralentissement précoce des battements cardiaques, puis arrêt tardif, ven-

tricule en systole ; paralysie musculaire à début postérieur ; nausées, myosis.

Prærrortr a observé des convulsions chez la grenouille, mais elles sont inconstantes, alors que chez le cobaye, le pigeon et le poulet, elles sont la règle et sont alors précédées d’un état spasmodique.

À l’autopsie de la grenouille, on trouve les poumons et l'intestin exsangues, le foie congestionné, le cœur arrêté en systole ventriculaire ; mais les oreillettes sont distendues par du sang noirâtre.

Action sur les Oiseaux (Poulet, Pigeon). — Malgré l'opinion de Fornara et celle de Lewix, les oiseaux sont très sensibles au venin de crapaud. PreroTTI à fixé à 20 milligrammes par kilogramme d'animal la dose minima mortelle de venin brut inoculé par la voie intra-péritonéale ou pectorale.

Après une courte période d’excitation, les oiseaux deviennent somnolents et vacillent, exécutant des mouvements qui indiquent un état nauséeux. Puis éclatent de violents accès convulsifs du cou et des membres, le cou se tord, les ailes et les pattes sont agitées de mouvements cloniques ; la mort survient dans un accès convulsif.

À l’autopsie, le cœur est arrêté ventricules en systole, les oreillettes sont gonflées de sang, le foie est congestionné, les poumons et l'intestin anémiés.

Action sur les Mammifères (Rat, Cobaye, Lapin, Chien, Chat).— Chez ces animaux, la dose minima mortelle de sécrétion brute introduite par la voie péritonéale ou sous-cutanée est respectivement égale, par kilogramme d'animal, à 24, 16, 28,5 et 4,5 milligrammes. Le chat et le chien sont donc très sensibles au venin. L’envenimation se développe comme il suit : on observe d’abord une phase d’excitation générale ; les animaux ont le poil hérissé ; ils salivent quelquefois (chien) ou constamment (chat). PrerorTri a noté chez tous de l’hypothermie. Le chien, d’après nos propres observations, a des hallucinations et de la dyspnée. Dans une seconde période, l’abattement et la somnolence succèdent à l'excitation ; les sujets ont du malaise et des attitudes anormales ; le train postérieur, d’abord parésié, se paralyse. La conscience est conservée quoique un peu moins vive. En même temps, on observe le ralentissement des battements cardiaques. Chez le chien, le cobaye, le rat, survient du ralentissement respiratoire, alors que c’est au contraire de l’accélération chez le lapin et chez le chat. L’hypothermie s’accentue (chien, cobaye, lapin).

Dans une troisième phase, il se produit un état nauséeux (sauf chez les souris blanches), aboutissant aux vomissements chez le chien et le chat ; chez tous, des accès convulsifs ; chez le chat, du myosis, qui persiste jusqu’à la mort.

Vers la fin de l’envenimation seulement, on constate qu'il y à perte de la conscience ; le cœur accélère ses battements, qui deviennent en outre irréguliers, la respiration est anxieuse et difficile, le réflexe cornéen

aboli. Chez le cobaye, le chien et le chat, le cœur s'arrête avant la respiration ; c est l'inverse qui se produit chez la souris et le lapin (PræroTT1).

Cette symptomatologie se précipite lorsque le venin est introduit directement dans le sang ; les symptômes sont exaltés par leur superposition, la mort survient plus rapidement.

Par la voie stomacale, le venin détermine aussi une intoxication, contrairement à ce qui arrive pour le venin des Serpents ; mais tandis que les animaux qui vomissent, tout en étant très sensibles, guérissent (chien, chat), ceux qui n’ont que des nausées succombent (cobaye, lapin).

À l’autopsie des animaux envenimés, on trouve les ventricules cardiaques fortement contractés, les oreillettes et les grosses veines distendues par du sang noir ; le foie est congestionné et noir, les veines du système nerveux central sont turgides, des hémorrhagies se rencontrent parfois autour des centres nerveux, quelquefois sur le cœur ; les poumons et la rate sont pâles, la vessie et les intestins contractés. Les animaux entrent rapidement en rigidité cadavérique.

Le venin dorsal du crapaud a donc une toxicité très grande, qui se traduit chez les Vertébrés supérieurs, comme chez la grenouille :

1° Par l'affaiblissement précoce el l'arrêt de la respiration, précédant celui du cœur chez quelques-uns (souris, lapin), le suivant chez d’autres (chien, chat) ;

2° Par l'action cardiaque systolique chez tous ; 3° Les nausées et les vomissements ; 4° L'action myotique chez quelques-uns (grenouille, chat) ;

5° La paralysie musculaire tardive à début postérieur, précédée d'état spasmodique pouvant aller jusqu'aux convulsions ;

6° L'hypothermie constatée chez les Mammifères, phénomène qui serait constant et comparable à celui que C. Pnisarix à signalé dans l’envenimation vipérique.

AGTION LOCALE. — Déposé sur une plaie, le venin en nature détermine une douleur vive accompagnée de gonflement ; sur la peau intacte, une sensation de causticité atténuée, que l’on perçoit surtout quand le venin est projeté par compression des amas glandulaires, parotoïdes ou pustules. Lorsque dans les mêmes conditions il est projeté dans l'œil, il détermine une sensation de sécheresse de courte durée, puis une cuisson intense à laquelle fait suite de la gène douloureuse, du larmoiement, de la douleur des paupières. Cet état se prolonge pendant plus d’une heure avec des périodes d'accalmie, puis la douleur cesse ; il subsiste pendant quelques heures un trouble de la cornée qui gêne la vision. SrADERINI (1888) rapporte qu'une ophthalmie grave a été provoquée par la pénétration du venin dans l'œil, et signale de même que les effets inflammatoires sont accompagnés de douleur.

Larasre, dans une courte note (1876), s'étonne de ces effets locaux qui avaient déjà été signalés par VuLpran ; mais il est probable qu'il n’a jamais reçu le venin dans les conditions où on l’exprime d’un certain nombre de crapauds pour les essais physiologiques.

La bufotaline, comme l’a éprouvé C. Pnisarix, exerce aussi une action irritante sur la conjonctivite ; elle y détermine une douleur vive et piquante, qui persiste malgré le lavage à grande eau, puis qui devient intermittente et sourde, comme celle qui résulte d’une contusion, mais il n'y a ni larmoiement ni hyperthermie.

Après la phase de douleur chez les animaux ayant reçu le venin en inoculation sous-cutanée ou en instillation dans le sac palpébro-oculaire, PreroTTI (1906) à observé une action anesthésique qui se produirait même avec de faibles doses pourvu qu'elles suffisent à déterminer des symptômes généraux.

Le venin de Crapaud exerce donc à la fois son action sur le système nerveux, la respiration et la circulation, frappant ainsi directement tout l'organisme.