I. Duclaux, Chimie biologique, p 547 et
92. Voici quelques expériences qui établissent le mode d'action du £acillus amylobacter sur le glucose et sur Tamidon. Elles ont été faites avec des appareils de la forme de la figure 8 à la température de35*.
Le 3 juin, on ensemence avec du Bacillus amylobacter deux 9i)pi\reils contenant :
a. — BouiHon de bœuf étenda (d = 1004). Glucose : 5 p. 100.
b. — Boaillon de bœuf étenda (d = 1004). Amidon en empois : 2 p. 100.
La fermentation s'est établie, beaucoup plus active avec h qu'avec a; le 8, elle s'est arrêtée dans les deux appareils, sans doute parce que le liquide y est très acide.
Volume et composition du gaz dégagé :
Volume total du gaz 73" 168'«
Composé de :
Hydrogène 75.34 4<).46
Acide carbonique 24.66 50.54
n a disparu dans a 0.29 p. 100 de glucose, soit 0*^%42 pour le liquide employé, dont le volume était de 146 centimètres cul)es.
Dans l'appareil b, il ne reste plus d*amidon, car Piode n*est pas bleui ; on y trouve :
Glucose 0.64 p. 100.
Dextrinc 0.36 —
représentant environ 4 p. 100 d'amidon. Il y a donc eu à peu près 1 p. iOO d'amidon transformé par la fermentation butyrique.
93. Le 11 juin, nouvelle expérience dans les mômes appareils contenant :
a. — Bouillon de bœuf étendu (d = 1004).
Glucose : 2 p. 100.
b. — BoMillon de bœuf étendu (d = 1004).
Amidon en empois : 2 p. 100.
Le 12, fermentation avec grosse mousse dans a, sans mousse dans b.
Le 15, a ne fermente plus; dans b, fermentation très active.
Le 18, 6 ne fermente plus.
Comme dans l'expérience précédente, Tamidon convient mieux à ce bacille que le glucose. Le liquide fermenté est très acide dans les deux cas.
Gaz recueilli :
Volume total 58«%4 846««,0
Composition centésimale :
Hydrogène 80.47 44.10
Acide carbonique 19.53 55.90
Si l'on prend la moyenne des résultats assez concordants obtenus .
dans ces deux expériences, on aura des chiffres qui représenteront *
l'action relative du BaciUus amylobacier sur le glucose et sur l'ami* j don, dans les conditions spéciales où la fermentation s'est opérée.
Pour le glucose. Pour r«mtdan.
Hydrogène 77.90 46.78
Acide carbonique 22.10 53.22
94. En mettant dans l'appareil à glucose du carbonate de chaux, pour saturer les acides, à mesure qu'ils se produisent, on pousse plus loin la fermentation, comme on devait s'y attendre.
Ainsi, le 18 juin, on ensemence avec le B. amylobacier une fiole à fond plat contenant, avec du carbonate de chaux stérilisé et étalé en grande surface, du bouillon de bœuf étendu (d = 4004) et additionné de 2 p. 100 de glucose.
La fermentation a été très active ; on a obtenu jusqu'au 22 :
Volume lotal de gaz 59.">"
RKCHBRCUES SUR LA RÉDUCTION DBS NITRATES. 29Ô
Composé de :
Hydrogène 88.67 soit 230««,1
Acide carboaique 61.33 364 ,9
95. Nous voilà donc en possession d'un microbe qui peut dégager, si on le désire, de grandes quantités de gaz hydrogène à Tétat naissant, et qui, vraisemblablement, réduira rapidement les nitrates. Nous allons voir qu'il n'en est rien.
Et d'abord, on ne peut faire agir sur lui que de faibles quantités de nitrate, car son action sur le glucose ou sur l'amidon s'arrête dès que la proportion de sel dépasse 5 grammes environ par litre ; il faut, pour réussir, ajouter peu à peu ce sel à la liqueur en fermentation, ce qui exige l'emploi d'un dispositif spécial.
96. Dans divers essais, faits soit avec de la terre calcaire sucrée, soit avec du bouillon glucose, additionné de carbonate de chaux, nous avons constaté que le nitrate était à peine réduit, malgré le dégagemeni abondant d'hydrogène. Nous avons craint que l'état solide du carbonate ne fût une cause d'erreur et d'illusion. Si l'on considère en effet un grain de carbonate ou de terre entouré d une solution de glucose et de nitrate, l'action du bacille est très énergique en ce point, puisque la saturation des acides y est complète. L'hydrogène naissant peut réduire par conséquent tout le nitrate immédiatement voisin, mais s'il y en a en excès, ce qui est admissible, le gaz inutile sort bien vite, en se dégageant, de la sphère d'action du microbe. L'énergie qu'il possédait au moment précis de sa formation cesse alors d'être utilisable, et il traverse les couches supérieures du liquide, comme un simple courant d'hydrogène, sans attaquer le sel dissous.
97. Si peu importante que puisse être cette cause d'erreur dans un milieu toujours en mouvement par l'effet même de la fermentation, nous avons néanmoins voulu l'écarter complètement, en saturant les addes, au fur et à mesure de leur production, non par un carbonate solide, mais par une solution de carbonate de potasse.
L'appareil suivant permet d'ajouter aux liqueurs, quand on le veut, des solutions alcalines ou nitralées, sans introduire de gaz
étranger, et tout en conservant la pureté primitive Axx BaciUus amylobacler.
98. Cet appareil, représenté seul dans la fig. 16 et dans un bain d'eau à température constante (fig. 9), se compose d'une fiole ou ballon A dont le col porte un tube de dégagement B, et un petit tube t étranglé et muni d'une bourre de coton b ; l'ouverture du col est soudée à un tube à robinet R, surmonté d'un réservoir cylindrique T, de forme allongée et divisé en parties d'égale capacité. L'extrémité inférieure o s'ouvre à l'intérieur de A et l'orifice supérieur est recouvert du bouchon conique G des matras Pasteur.
L'appareil est stérilisé vide dans l'air chaud, avec son tube abducteur scellé à la lampe et le robinet R fermé. Pendant le refroidissement, l'air qui pénètre en A se purifie en b et celui qui entre en T se purifie sur le coton du bouchon conique G.
On introduit le liquide de fermentation, puis la semence, par la tubulure B, préalablement flambée et ouverte, en aspirant par le tube i; on ferme alors l'étranglement à la lampe.
La solution alcaline ou nitratée est versée en T, avec les précautions habituelles, comme dans une fiole de culture. Si l'on veut en faire écouler un volume connu dans le ballon A, il n'y a qu'à ouvrir le robinet R, de manière que le niveau supérieur du liquide parcourt un nombre déterminé de divisions.
99. 1"* Feiifnmiation butyrique du glucose, — Le 23 juillet, nous semons du BacUlus amylobacter très jeune dans deux de ces appareils, a et a, contenant chacun du bouillon de bœuf étendu (d = 1004) et 2 p. 100 de glucose.
Le réservoir de a reçoit une solution aqueuse de :
Fù/./û.
Carbonate de potasse 20 p. 100.
Celui de a\ une solution aqueuse de :
Carbonate de potasse 20 p. 100.
Kitrate de potasse 20 —
Les deux ballons sont mis dans un bain à la température de 35"".
Le lendemain 24, la fei^mentation est établie dans les deux ; le volume et la composition du gaz dégagé sont sensiblement les mêmes; on a en effet :
Dana a. Dans d.
Volume toUl du gaz à O*" et â 760 . . . 25'''' 19<'<'
Composition centésimale :
Hydrogène 85.83 85.41
Acide carbonique 14. 1 7 14.59
Celle composition diffère de celle de la page 295 : ce qui s'explique parce que, avant de se dégager, Tacide carbonique doit saturer le liquide.
L'état de la fermentation étant ainsi le même dans les deux appareils, on fait écouler du réservoir dans le ballon respectivement un centimètre cube de la solution alcaline de a et un centimètre cube de la solution alcaline nitralée de a ; c'est donc 200 milligrammes de carbonate de potasse et 200 milligrammes d'azotate de potasse que Von ajoute.
Le dégagement gazeux s'est tout d'abord un peu ralenti dans a ; puis il est devenu plus actif que dans a. Le 26, on a recueilli une première éprouvette de gaz ; le 1" août, la fermentation a cessé.
Le dosage de l'acide carbonique a été fait avec la potasse, celui de l'hydrogène par l'eudiomètre ; on a ainsi obtenu :
ATBO a. AVBC O'.
l'eéprou- 8«éproa- ri., ♦^♦.i l*"* éprou- 2« éprou- n— ♦ ♦-! vette. vette. «" «o*»»- vette. vett6. «««toUl.
