Ce nombre résulte du calcul suivant

On a :

Chaleur de combustiou do Tacide citrique solidei dégaffe + i8fic.

donc :

C" H" 0«* dl88. + 180 = 12 C0« disB. + 8 HO, désage 486 + 6,4 + «,8 X 1» = -»- 5S6c. 6,4 et 2,8 étaut loi chaleurs do dissolution de l'acide citrique et de raeide carbouiiia«.

de sel dégage jjrj x 45 = 19 Calories environ. Si toute cette clia-

leur était appliquée à un litre d'eau, ou, ce qui est très près de la vérité, si Pc était égal à Tunité pour le liquide artificiel, on aurait obtenu une élévation de température de 19 degrés, abstraction faite des causes de déperdition énuraérces plus haut. Nous avons observé seulement 40 degrés.

86. La théorie et Texpérience sont ainsi d'accord pour montrer que la réduction des nitrates par le D. deniirificam est accompagnée d'un grand dégagement de chaleur. II ne manque donc rien au phé- Boméne pour qu'il ait les caractères d'une véritable fermentation.

Quant au microbe, il dispose d'une énergie extérieure bien supérieure à celle qui lui est nécessaire pour son développement, et se trouve, par ce fait , plus favorisé que la plupart des ferments les mieux définis \

1. Peu de fermentations fournissent autant de chaleur ««>f5/6^ que la dènitrification. Oë ferra plus loin que le thermomètre n'a accusé aucune élévation de température tes la fermentation butyrique du glucose et de Tamidon. La fermentation alcoolique cfle-méme, dans les mêmes conditions expérimentales, donne peu de chaleur; Pexpésoivante en est la preuve :

Le 15 décembre, on a mis dans le ballon fi de la figure 13 de Teau de levure à 180 grammes (l'équivalent du glucose) par litre; dans le ballon fi', la même de levure sucrée à 18 grammes (le dixième de Téquivalcnt) par litre: dans B, et B,' de Teau, comme dans Pexpérience n** 82. Les ballons fi et B' ont été ensemencés taiHement avec une levure haute de brasserie en pleine activité.

La fermentation s^est déclarée rapidement; la mousse a été épaisse et abondante; ao beat de trois jours, la mousse commence à tomber. Le 18, on met fin à rexpérience et Ton dose le glucose restant : dans B, il en reste 77 grammes par litre; il y en a donc en 103 grammes par litre transformes en alcool et acide carbonique; dans B\ il ne fCsCe rien; tout a fermenté.

Voici le tableau des températures observées et les excès qu'on en déduit :

IfC 15 di6e«mbr«, 4 11 h. da matin.

1^ 15 — 4 10 h. da matin.

— 4 6 h. da Roir . .

£^ 17 — 4 11 h. du matin.

— 4 7 11. du soir . .

18 — 4 9 h. da matin .

TBMPéRATUBKS

OBSBByÉBS

BZOès

DB TBMPl^BATUBBS

dansB.

dans B'.

moyeDne de B| et de B'f

dans B.

dans B'.

OoOO

Ainsi, poar plus de 100 grammes de sucre disparu par litre en trois jours, la température s^est élevée de moins de 2 degrés dans B, et pour 18 grammes disparus dans

ANN. 8CIBNGE AGRON. 1^<)

87. On ne peut cependant ranger la dénitrification dans la classe des fermentations proprement dites, dont la fermentation alcoolique est le type, parce qu'ici il n'y a pas de corps fermentescible unique, tel que le sucre, dont le dédoublement dégage la chaleur indispensable à la vie du ferment. D'une part, en effet, le nitrate, loin de fournir de la chaleur, en absorbe au contraire pour se décomposer^ D'autre part, les substances qui, avec le nitrate, constituent nos li^ — quides de culture, ne permettent pas, seules, la vie du B. denilrif^^ caiis, en dehors de Toxygène de l'air, car nous avons vu que, des vases complètement remplis et ensemencés avec du ferme" jeune et actif, le liquide artificiel, exempt de nitrate, conserve ind^ ^ finiment une limpidité parfaite, et que le bouillon, dans les mèia^ -c conditions, devient à peine opalescent. Mais ces substances qcm^i sans oxygène libre, ne sont pas fermentescibles pour notre microt^^, sont néanmoins favorables à son développement au contact de Fair*^ puisque, dans ce cas, les liquides en grande surface se recouvreii^ d'une couche épaisse et membraneuse de bactéries.

Le concours simultané du nitrate et de la substance organique du milieu est donc indispensable pour constituer la matière fermentescible. Ce qui le prouve encore, c'est que le dégagement gazeux

fi', rexcès n'a pas dépassé 0°60. Ce dégagement sensible de chaleur est donc beaacoup plus faible que dans la dénitrification, puisque, toutes choses égales d'ailleurs, la réduction de 10 grammes seulement de salpêtre par lilre a donné un excès de 5*45. Le calcul conduit d'ailleurs à un chiffre plus faible pour la fermentation alcoolique que pour la dénitrification. On a en effet :

C" H« O" di»i. = 2 C< H» 0« diss. + 4 C0« gax. + x.

état initial .... C", H»«, O".

— final a 0^ H* 0> disi., 4 CO* gu.

i C" + H" + O" = C«» H»« 0»« di»8 267e

1er cycl«. ) ç„ H„ Qt, jjg^ - 2 c< H» 0> disi. -h 4 C0« gas . . . x

f» cycle • { 4 Q

C« + H»» 4- O^ = 2 C* H« O* di«i 146

+ 80 = 4C0« gaz 188

d'où X = 67.

Abstraction faite des causes de déperdition, la chaleur théorique dégagée serait de 67 calories pour 180 grammes, soit de 37,2 calories pour 100 grammes de glucose, tandis que, pour la réduction de 100 grammes de salpêtre par le B. deniUi/lcans, elle est, au minimum de 106 calories, soit trois fois plus forte.

RECHERCHES SUR LA RÉDUCTION DES NITRATEi". 291

cesse et les liqueurs s*éclaircissent, dès que la décomposition du sel

est achevée.

88. Les remarques qui précèdent ne permettent pas non plus d'expliquer la dénitrification par une réaction secondaire, comme on le fait pour la formation d'acide sulfhydrique aux dépens du soufre dans les expériences si intéressantes de M. Miquel *. On ne peut en efifet, comme dans ce dernier cas, produire, à volonté, des réactions successives ou simultanées. Ici, le nitrate et le milieu sont décomposés simultanément ; sinon, il n'y a pas réaction.

89. Comme on vient de le voir, le B. denitrificans ne peut pas, sans le concours d'un nitrate, faire fermenter les matières organiques que nous lui avons présentées, et il les laisse toutes intactes, y compris même le glucose et l'amidon; il ne les décompose et ne s'en nourrit qu'en présence de l'oxygène libre ou d'un nitrate. Dès lors, on ne peut expliquer les phénomènes que nous avons étudiés par Taction d'un corps réducteur ayant pris naissance dans la dé-

• composition des matières dont il s'agit.

Mais d'autres microbes font fermenter ces matières et engendrent descoqps réducteurs, tels que de l'hydrogène naissant. Il était intéressant de rechercher si les nitrates, placés dans ces nouvelles conditions, seraient également décomposés, 90. Nous avons, dans ce but, isolé à l'état de pureté un BaciUus

(mylobacter, dont nous allons donner d'abord les caractères, et que

nous ferons agir ensuite sur des liquides nitrates. Nous avons choisi de préférence ce microbe, parce que, dans leurs

recherches sur la réduction des nitrates dans la terre arable,

MM. Dehérain et Maquenne ' paraissent lui attribuer le rôle actif. Il est facile de se le procurer, car il se développe spontanément

dans toutes les macérations de matières amylacées. On l'isole et on

le purifle en combinant des cultures successives avec la dilution,

1 aclion de la chaleur et celle du vide. Celui qui nous a servi présente la forme de bâtonnets de 0.8 à

'• Ifiqael, Bulletin de la Société chimique, t. XXX.II, p. 127. — Duclaux, Chimie -• ^Haies agronomiques, t. KC, p. 6, 1883.

1.1 |JL de laij^eur sur une longueur très variable comprise pourtant, en général, entre 5 et 10 ji. Chaque bâtonnet donne facilement une ou deux spores rondes ou légèrement ovoïdes, d'un diamètre presque toujours supérieur au sien et pouvant atteindre jusqu'à 1 .2 et même 1.8 [jl.

Le bacille est mobile, d'un mouvement assez lent, mais ses articles sont rigides et ne sont jamais flexueux comme ceux du vibrion butyrique du lactate de chaux.

L'iode le colore souvent en bleu, surtout un peu avant la formation des spores.

11 fait fermenter butyriquement le sucre, le glucose, l'empois d'amidon ; il sécrète une diastase qui fluidifie ce dernier, puis le saccharifie, avant de le dédoubler ; le gaz qui se dégage est composé d'hydrogène et d'acide carbonique ; il est sans action sur le lactate de chaux, additionné ou non de nitrate de polasse, ce qui le distin^e encore du vérilable vibrion butyrique. 11 se rapproche 5 ce point de vue du Bacillus butylicxis de M. A. Fitz ou du Tyrothrix urocephulum de M. Duclaux*, dont il diflere d'ailleurs par d'autres caractères.

91. On peut colorer ce bacille par les procédés décrits à propos du Baderium denitrificans, mais avec quelques modifications.

Comme il ne sécrète aucune matière visqueuse ou alburainoîde, il est nécessaire d'additionner les liquides de culture d'une petite quantité d'albumine avant de les étaler syr la lame de verre. II faut de plus éliminer, s'il y a lieu, le glucose non décomposé ; on y arrive par un lavage à l'alcool, après fixation de la préparation par la chaleur. Quand l'alcool est évaporé, on ajoute la solution colorante, et on procède ensuite selon le mode ordinaire. Malgré ce lavage, il est fort difficile d'obtenir une bonne préparation colorée, si le liquide contient une forte proportion de glucose ; presque toujours dans ce cas, l'adhérence des microbes à la lame de verre est nulle et la plupart des organismes sont entraînés dans le lavage à l'eau.

La décoloration du fond de la préparation est plus difficile qu'avec la bactérie des nitrates ; aussi le séjour dans l'eau distillée doit-il être un peu plus prolongé.