TECHNIQUE

Avant d'aborder la course des faisceaux libéroligneux dans la fleur, je crois bon de parler ici :

l*' Du choix des sujets à étudier ;

2'' Des procédés employés ;

3* De la représentation et de l'exposition des résultats.

Choix des sujets. — L'âge des fleurs a plus d'importance qu'on se le figure tout d'abord. Il semblerait qu'on dût s'adresser à des fleurs très jeunes (où les ovules seraient en voie de formation, par exemple) pour avoir moins à couper. Ce serait une grave erreur. En effet, certains faisceaux dans la fleur ne sont définitivement formés qu'un peu avant l'épanouissement de la corolle, ainsi que je le montrerai plus loin, et les anastomoses que les faisceaux floraux peuvent contracter ne se différencient parfois qu'en dernier lieu. En s'adressant à des fleurs trop jeunes, on risquerait d'y trouver des faisceaux à l'état procambial et de les laisser inaperçus.

D'autre part, il ne faudrait pas tomber dans l'excès contraire et prendre une fleur trop âgée ou un fruit mûr, par

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exemple. A cet élal, les péricarpes sont Irop durs ou bien ce sont les téguments des graines qui sont trop résistants et ne se laissent plus ramollir par les procédés ordinaires, d où des insuccès lorsqu'on veut couper de telles fleurs : les ovules sautent sous le rasoir et les coupes se déchirent. Il convient donc de choisir des fleurs épanouies récemment, c'est-à-dire fécondées ou prêtes à Têtre.

Les procédés, — Bien des méthodes conduisent à Tétude de la course des faisceaux. 11 existe un procédé qui consiste à plonger l'objet dans Tacide sulfurique à Gô*" où on a fait dissoudre de la fuchsine. Après un temps plus ou moins long, suivant la grosseur de Tobjet, tout ce qui n'est pas lignifié se décolore, devient transparent car Tacide sulfurique chasse l'air. En plongeant ensuite Tobjet dans Teau, les faisceaux apparaissent en rouge dans la masse transparente e( incolore.

Un autre procédé consiste à plonger l'objet pendant quelques heures dans la potasse à 1/10; au bain-marie puis, après un lavage à l'eau, dans l'acide chlorhydrique également à 1/10; tout se décolore. Après immersion d'un quart d'heure environ dans la fuchsine ammoniacale suivie d'un lavage à grande eau, les faisceaux se colorent en rouge. 11 ne reste plus qu'à disséquer sous la loupe.

Ces procédés ne sont applicables qu'à des organes que l'on peut étaler et où la ramification des faisceaux ne se fait que dans un seul plan, comme les calices et les corolles. Je leur reproche de trop ramollir les objets qui sont très difficiles à manier; de plus, la cuticule qui recouvre Tépiderme se colore elle aussi en rose plus ou moins foncé, ce qui gêne l'observation. Quant aux faisceaux procambiaux ils passeraient inaperçus. .

Pour étudier la marche des faisceaux dans le réceptacle et dans le pistil, il faut avoir recours aux coupes en série;c'est sans contredit le moyen le plus long mais aussi le plus sûr. Ici se dresse une difficulté qui est loin d'être sans importance. Dans les fleurs, le réceptacle est généralement

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composé d'un tissu très dense et dont les cellules sont souvent gorgées d'amidon; dans un tissu aussi opaque, il est difficile de voir nettement les petits faisceaux même sur des coupes à 1/80 millimètre ; de plus, si on opère à la paraffine, la présence de Tamidon rend les objets très friables et les coupes se déchirent sous le rasoir. 11 faut donc absolument vider les cellules.

11 y a deux marches à suivre. Ou bien on fait les coupes une à une et on les décolore par Thypochlorite de soude; le procédé est fort long et permet difficilement d'obtenir la même orientation des coupes dans la série ; je préfère le suivant qui est indiqué dans tous les manuels d'anatomie végétale et m'a toujours très bien réussi. On plonge l'objet à couper dans l'hypochlorite de soude, à froid ; la durée de l'immersion est très variable suivant la taille de l'objet et la nature des tissus; il faut attendre qu'il soit devenu entièrement blanc. On le retire avec soin car il est très fragile, et après immersion dans l'eau pour chasser l'hypochlorite, on le plonge dans l'alcool à 90% puis dans l'alcool absolu et on soumet à la trompe. L'objet durcit dans l'alcool, se déshydrate complètement et se vide d'air ; on le passe alors au toluol qui le rend transparent, puis dans une solution de paraffine dans le toluol (1/5) et enfm dans la paraffine au bainmarie vers ôO** environ. On l'y laisse séjourner de six à douze heures ; à ce moment seulement l'objet est bon à être coupé.

On a préconisé l'emploi de la solution d'agar-agar pour coller les coupes sur le porte-objet; je lui préfère de beaucoup le mélange à parties égales d'albumine de l'œuf et de glycérine à 30* ; il n'en faut qu'une couche excessivement mince pour fixer les coupes.

Reste la coloration. Je me suis servi exclusivement de la solution aqueuse (1/100) de phénosafranine ; les coupes, débarrassées de la paraffine par le toluol, du toluol par l'alcool absolu, sont plongées dans le colorant pendant une dizaine de secondes seulement. On lave immédiatement à l'alcool absolu; la phénosafranine est très soluble dans

l'alcool^ c'est vrai, mais la déshydratation est obtenue avant la décoloration, et en chassant l'alcool absolu par le toluol qui ne dissout pas la phénosafranine, les coupes restent suffisamment colorées. On monte au baume du Canada dissous dans le toluol. Le parenchyme cellulosique prend une leinle rose sur laquelle tranchent nettement les parties lignifiées colorées en rouge foncé.

Dans certains cas, lorsque la fleur à couper présente une masse trop considérable, l'immersion dans l'hypochlorite de soude ne réussit plus, car les parties externes tombent en bouillie avant que le centre soit décoloré. Il est regrettable qu'il n'existe aucun procédé permettant de décolorer sans les décoller les coupes fixées sur le porte-objet. Il faut alors faire les coupes une à une.

La représentation et r exposition. — Un excellent moyen de faire comprendre d'un coup d'œil la marche des faisceaux dans la fieur est de donner des schémas de coupes transversales. De cette façon rien ne peut échapper et il est très facile de mettre en relief les connexions des différentes pièces florales. Les schémas de coupes longitudinales, utiles dans certains cas, ne peuvent forcément tout contenir et ne mettent en évidence qu'un nombre restreint de faisceaux.

Quant au mode d'exposition, j'ai supposé dans la partie descriptive du travail que les faisceaux venant d'en bas, passent du pédicelle dans les différents cycles en se divisant et en se ramifiant. Je ferai voir dans la seconde partie de quelle manière il faut interpréter les faits, mais, à vrai dire, il est beaucoup plus facile pour le lecteur d'aller du simple au composé. Cette méthode a le double avantage de mieux faire comprendre et de faciliter singulièrement les descriptions.