TECHNIQUE EXPERIMENTALE
La source d*ozone était fournie par l'appareil de M. H. Bordier, qui en a donné ailleurs le principe et qui a insisté particulièrement sur sa description et son fonctionnement.
FlG. 4.
Dispositif expêrimeotal.
rP', Source du courant ; R, Rhéostat;
1, Interrupteur Wehnelt-Carpentier modifié par H. Bordier ;
A, Ampèremètre;
B, Bobine de Rnhmkorf ; ct\ Condensateurs;
DD', Boules du détonateur ;
H, Résonateur d'Oudin ;
M, Cloche de l'appareil ozonenr ;
E, Ballon contenant une culture;
L, Compteur;
T, Trompe à eau ; ce', Tampons de coton.
Au sommet de la cloche M, qui recouvre l'hélice et la spirale de cuivre H {fig- ^j, est adapté un tube de verre coudé deux fois. Ce tube est destiné à amener l'air ozonisé en contact avec les microbes.
l'ozone sur le baulle de la diphtérie. 83
La culture est contenue dans un flacon E à deux tubulures, garnies de bourres d'ouate, qui, au moment de la mise en marche de l'appareil, sont recouvertes de paraffine, afin d'intercepter l'arrivée de l'air extérieur.
L'un des tubes du flacon, qui plonge dans le liquide nutritif, est réuni au tube venant de la cloche; l'autre tube, dont l'extrémité inférieure se trouve à une distance la plus grande possible de la surface du liquide, est relié à une trompe à eau T. La trompe que nous employons est celle de Beriemont. Entre le flacon et la trompe, nous avons installé un compteur L destiné à nous donner en litres la quantité de gaz traversant l'appareil.
L'ozone produit dans la cloche aux dépens de l'air atmosphérique sous l'influence des effluves électriques est aspiré par la trompe à eau et traverse successivement le flacon contenant la culture et le compteur. Une pince située sur le trajet du compteur à la trompe nous permet d'établir la circulation d'air ozonisé à volonté et, en général, après que l'appareil à haute fréquence est en marche depuis une minute environ.
Afin de nous mettre en garde contre toutes les causes d'erreur provenant de la contamination des milieux nutritifs par les germes de l'air, nous filtrons le gaz à travers des tampons de coton ce* avant son entrée dans le flacon.
Pour éviter que, par suite de l'intensité du courant d'air, les tampons d'ouate ne soient entraînés dans le sens du courant jusqu'au contact du liquide, ces tampons sont maintenus à l'extrémité des tubes du flacon : comme nous avons pris soin de leur donner une certaine longueur, nous les avons attirés d'un centimètre environ hors des tubes et fixés en les pinçant entre le tube de verre et le tube d'union.
Outre ce procédé de filtra tion, nous avons fait usage dans nos dernières expériences d'un flacon à deux tubulures, dont l'un des tubes plonge dans Teau et l'autre est libre au-dessus de la surface du liquide. De cette façon, l'air abandonne dans l'eau les poussières qu'il entraine avant son passage dans le bouillon de culture, et les chances de contamination sont, de ce fait, diminuées. Jamais par ce procédé nous n'avons eu à constater l'apport de nouveaux germes dans le milieu contenant en suspension les microbes.
L'ozone, qui attaque le caoutchouc, rendait l'usage de cette substance difficile. Toutes les fois qu'il nous a été possible, nous avons employé le liège. Quand nous avons dû nous servir de caoutchouc» nous
84 AUCHIVES D'ÉLKCTmCITÉ MÉDICALE.
avons fait en sorte que le tube de caoutchouc fût très épais, et que les extrémités des tubes de verre qu'il avait pour but de réunir fussent amenées au contact Tune de Tautre très exactement, afin de tapisser entièrement la surface interne du tuyau d'union et de ne laisser aucun espace de caoutchouc en contact avec Tozone. Nous avons eu cependant à constater l'usure des tubes et nous étions forcés pour chaque expérience de les remplacer.
Les flacons dont nous faisons usage ont une capacité de a litres et de 4 litres. Malgré leur volume, le bouillon de culture ne s'élève que jusqu'à 1 ou a centimètres de leur hauteur; la circulation du gaz au milieu de la matière albuminoïde provoque un tel bouillonnement et la production de bulles en si grand nombre que le liquide se serait sans cette précaution échappé et aurait été entraîné vers la trompe; par son contact avec le coton, obturant le tube de verre, il aurait provoqué sa contamination.
Tels sont les procédés que nous avons employés pour obvier aux difficultés que nous avons rencontrées au cours de nos recherches.
La quantité de gaz est calculée dans chacune de nos expériences au nK>yen du compteur. Pour les dosages nous nous sommes conformés auxchifl'res fournis par M. Bost(i)> Comme cet auteur se servait du même appareil que nous-mêmes, il nous fut facile de nous placer dans des conditions identiques.
La force électromotrice du circuit primaire PP' provenant du courant de la Compagnie du gaz de Lyon est de i lo volts : l'intensité est égale à la ampères. La distance entre les boules DD' du détonateur de l'appareil ozoneur équivalait à a3 millimètres. Nous avons annexé, à la bobine donnant 6o centimètres d'étincelles, l'interrupteur Wehnelt-Carpentier modifié par M. Bordier.
La quantité d'ozone oscille autour d'une moyenne de a5 milligrammes par litre.
ACTION DE l'ozone SUR LES BACILLES.
Expérience 1. — 6 février 190t. — Dans deux flacons A et B de deux litres chacun, nous ensemençons du bouillon nutritif avec une culture de diphtérie (culture Manol). Immédiatement après l'ensemencement, nous faisons
r*) BosT, Élude toxicologique de Vozoïxe (Thèse pour le doctorat en pharmacie, Lyon» 1903).
l'ozone sur le bacille de la diphtérie. 85
passer pendant i5 minutes dans le flacon A et 3o minutes dans le flacon B un courant d'air ozonisé. La quantité de gaz qui barbote à travers les cultures est égale k :
Flacon A 9o4 litres.
Au moment du passage du courant, nous n'observons dans le milieu aucune modification.
Les flacons sont portés à Tétuve à 37*.
7 février, — On ne constate aucun développement dans les flacons.
8 février. — Les liquides commencent à se troubler; la culture est plus abondante dans le flacon B.
9 février. — Mêmes constatations que la veille.
iO février. — On n'observe un dépôt que dans les deux flacons, moins abondant dans le flacon B.
La prolifération bacillaire n'a donc pas été entravée : arrêtée tout d'abord, elle s'est développée avec une intensité d'autant moindre que l'ozone aurait été plus abondant.
ExpÉBiENCE II. — 2i février i90i. — On ensemence dans le bouillon une culture de dipbtérie (culture Manol ex Manol de vingt-quatre heures). En même temps, on ensemence une seconde culture que l'on réserve comme témoin. On fait sur-le-cbamp passer un courant d'ozone. La quantité d'air ozonisé circulant pendant i5 minutes est égale à 37 litres.
La culture est portée à l'étuve à 370.
22 février. — La culture est soumise une seconde fois à l'ozone.
Temps i5 minutes.
QuanUté i58 litres.
23 février. — Troisième exposition à l'ozone.
Temps 3o minutes.
QuanUté a84 litres.
25 février. — Quatrième exposition à l'ozone.
Temps i5 minutes.
QuanUté 167 litres.
Après chacune de ces opérations, la culture fut toigours placée dans les conditions de température les plus favorables à son développement et, malgré le passage du courant d'ozone pendant plusieurs jours de suite, la végétabilité n'a pas été enrayée.
Nous avons pratiqué des inoculations pour nous assurer de l'influence de l'ozone sur la virulence. Quatre cobayes sont inoculés, deux avec la culture ayant subi l'action de l'air ozonisé, l'autre avec la culture témoin. Culture ozonisée :
Cobaye i i/4 centimètre cube.
— 3 Wa —
Culture ordinaire :
Cobaye 3 1/4 centimètre cul>e.
ô mars. — Nous constatons les résultats suivants : Les cobayes i et 3 sont morts le 27 février. Le cobaye 4» le 3 mars.
22 mars. — Le cobaye 2 survit jusqu'à cette date. Nous pratiquons l'autopsie qui nous don(ie comme lésions :
Œdème au point d'inoculation. Pas de lésions généralisées.
Nous ne trouvons ni pleurésie, ni hyperémie des capsules surrénales, ni congestion de l'intestin.
L'action de Tozone, qui, dans cette expérience, ii*a pas été effectuée sur la végétabilité, paratt s'être exercée d'une façon plus évidente sur la virulence. L'autopsie du cobaye qui a survécu un mois environ à Vinoculation de i/a centimètre cube de culture ne nous a révélé aucune lésion viscérale. Malheureusement, nous n'avons pas les résultats comparatifs fournis par les cobayes témoins, ayant négligé de constater les lésions qu'ils présentaient.
ExpÉRiENGK m. — 28 février, — Ensemencement dans le bouillon nutritif de diphtérie (culture Manol), dans deux ballons A et B et dans un ballon devant servir de témoin. Circulation d'un courant d'air ozonisé pendant i5 minutes, la quantité qui passe à travers les cultures est respectivement
^^« ^ Flacon K . 100 litres.
f*' mars. — On ne remarque aucun développement dans le flacon A; le liquide du. flacon B est légèrement trouble. Les deux flacons sont de nouveau soumis à l'ozone :
Flacon A. . . iio litres. 1 r^^^^ . . ,«i„„ioo n o i temps : lô nunutes.
Ils sont portés, ainsi que les jours suivants, à l'étuve à 370. 2 mars. — On observe un trouble dans les flacons A et B : le développement est moins prononcé dans A que dans B; l'intensité de A est à celle de B dans le rapport de 2/3.
La prolifération est accentuée dans la culture témoin. Les flacons sont de nouveau traversés par un courant d'air ozonisé pendant un quart d'heure.
A ^ i54 litres.
à mars. «— Aucune modification dans la culture A; dépôt plus abondant dans B.
Quatrième exposition à l'ozone :
A io4 litres.
5 mars. -^ Le rapport de l'intensité de développement dans les deux flacons peut être considéré comme équivalent à 3/4. La somme des quantités de gaz ayant barboté dans les cultures est égale à
A 468 Utres.
