CT

cr -

inue url II

^ rî.

fê

wmf

fi.

fis

CA '7î

B tr

tt P

Oo(i W. SZCZAWINSKA

J*avais l'habitude de compter les globules sur 25 divisions dont je prenais ensuite la moyenne. Les trois Écrevisses désignées pour l'immunisation avaient avant les expériences : A 2o, 28 globules (dansO "^"»c 1 de sang), 028, 30 globules, C26, 12 globules.

Le tableau ci-dessus résume les changementsdu nombre des globules du sang chez nos trois Ecrevisses pendant les sept jours qui ont suivi les injections. L'état général de nos animaux était alors excellent.

Le 1*^ jour de l'expérience in titro, j'ai soumis le sang de mes Ecrevisses à l'action du sérum préparé : 3 gouttes de sérum actif -f 1 goutte de sang de l'animal injecté. Le précipité a apparu immédiatement dans la préparation : l'agglutination était assez forte, Thémolyse commençait après 1 minute d'action du sérum ;après 7 minutes presque toutes les cellules avaient l'aspect vésiculeux caractéristique. La préparation témoin, 3 gouttes de sérum actif 4- 1 goutte de sang de l'Écrevisse neuve, a montré même un faible retard dans l'hémolyse en comparaison avec les globules du sang de l'Ecrevisse injectée : les cellules n'ont pris l'aspect vésiculeux qu'au bout de 10 minutes. Cette épreuve nous a montré que l'injection du sérum aux Écrevisses était restée sans effet sur les globules de leur propre sang.

Les animaux étant très bien portants, bien que le nombre de leurs globules n'ait pas atteint le chiffre initial, je les ai soumis à une nouvelle injection : les Écrevisses A et // ont reçu l**" de sérum préparé, l'Écrevisse C fut injectée de la même quantité de sérum neuf de Cobaye. Vingt-quatre heures après l'injection je constatais une grande diminution dans le nombre des globules chez les trois Écrevisses: l'Écrevisse A avait 4,04 globules dans 0 ï»'"^ 1 de sang, l'Écrevisse B en avait 3,06, l'Écrevisse C 4,88. J'ai noté à ce moment le ralentissement de la plasmochise des globules en goutte pendante de l'Ecrevisse B; les globules restaient longtemps sans se détruire et émettaient de nombreux pseudopodes.

Quarante-huit heures après l'injection, le nombre de globules a encore diminué chez l'Ecrevisse JB; il a augmenté légèrement chez l'Ecrevisse A et est resté stationnaire chez l'Écrevisse C. Chez l'animal .1, je constatais un grand nombre de lymphocytes. L'aninïal lui-môme était vigoureux, ne ressentait point les effets de l'injection. 11 n'en était pas du tout de môme avec l'Écrevisse B,

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DES CYTOTOXINES lh)l

qui était visiblement affaiblie. Son sang contenait à peine quelques rares globules à grosses granulations, les lymphocytes prédominaient. L^animal C était resté vigoureux. La plasmochise de ses globules en goutte pendante ne se faisait pas comme ordinairement : les granulations disparaissaient, il est vrai, mais sur place, car les cellules gardaient leur forme. Les globules se comportaient comme s'ils étaient dans le sérum préparé, ils se détruisaient assez lentement.

Soixante-douze heures après l'injection, l'Écrevisse A continuait à se porter bien, le nombre de ses globules avait considérablement augmenté, il était monté à 16,36. Les globules à grosses granulations étaient devenus très nombreux, leursgranulations se détruisaient en goutte pendante, comme si les globules étaient dans le sérum; cette destruction se faisait lentement, on pouvait yoir les granulations encore 25 minutes après prélèvement du sang. Il n'y avait pas de plasmochise à proprement parler. Le bon état de l'Écrevisse se maintint encore pendant quelques jours, lorsque 8 jours après rinjection,ranimal devint très souflrant; le nombre de ses globules avait diminué (11,57). J'ai soumis alors son sang in vitro à l'action du sérum préparé. Ce sérum étant vieux de 15 jours, je pris 5 gouttes de sérum et je les mis en présence d'une goutte de sang de l'Ecrevisse A. Le précipité se forma lentement, mais il finit par envahir toute la préparation. Les granulations des globules résis tèrent pendant 15 minutes à l'action du sérum, elles se détruisirent activement après ce laps de temps. Après une demi-heure toutes les cellules ont pris l'aspect caractéristique. La même quantité de sérum avec une goutte de sang de l'Écrevisse neuve donna les ré actions suivantes : un peu plus de précipité que ne l'avait présenté le sang de l'Écrevisse préparée. La destruction des granulations devenait active au bout de 10 minutes d'action de sérum, quelques cellules gardaient encore leurs granulations une demi heure après. Cette expérience prouve, malgré l'afTaiblissement visible de l'action du sérum, que les globules du sang de l'Ecrevisse ayant reçu plus de 1 ^^ de sérum hémotoxique avaient peut être la sensibilité un peu diminuée à l'égard de ce sérum, comparativement aux globules des aniuiaux neufs. La préparation de l'Écrevisse n'a pas modifié les propriétés des substances préripitables de son sang. Cependant l'animal lui même a résisté à laction d'une

S;)8 W. SZCZAWINSKA

dose mortelle du sérum. Il a refait ses globules après une perte considérable et, s'il devint faible le huitième jour après l'injection, c'est parce qu'il devait muer quelques jours après. En effet, le iî2'n<' jour après l'injection, je l'ai trouvé immobile dans l'aquarium, en train de rejeter sa carapace. 11 est mort en muant, au H^^ jour après l'injection.

Les Écrevisses B et C devinrent très souffrantes, 72 heures après la dernière injection. J'ai trouvé l'Écrevisse C morte le lendemain, 4<^ jour après l'injection. Pour avoir une goutte de sang, j'ai dû piquer l'animal en plusieurs endroits. Ce sang montrait quelques rares globules vivants. Mis en présence du sérum préparé, le précipité se formait lentement comme avec le sang de l'Écrevisse A et d'ailleurs comme avec qelui de l'Écrevisse neuve (le sérum datait de quinze jours). La destruction des grosses granulations se faisait après 14 minutes d'action du sérum, les cellules prenaient alors peu à peu l'aspect vésiculeux caractéristique. A l'air, en goutte pendante, les cellules du sang résistaient longtemps à la plasmochise, elles gardaient encore leurs granulations, alors que les cellules de l'animal neuf les avaient perdues depuis bien longtemps. Une goutte de sang fut ensemencée sur gélose. Le résultat de l'ensemencement fut négatif.

A l'autopsie, l'ouverture du thorax nous a donné l'explication de la difficulté que nous avons éprouvée à prélever une goutte de sang : la cavité péricardique était remplie de coagulum, le sang formait une seule masse gélatineuse. Le cœur était dilaté, le foie enveloppé de coagulum, la vessie distendue. Le caillot ne contenait pas de globules. 11 était évident que la mort de l'animal était provoquée par la coagulation en masse du sang.

La santé de l'Écrevisse B s'améliorait pendant ce temps. Les globules avaient augmenté en nombre, ils étaient au nombre de 4,52 par 0 ™°»«^ 1 de sang. Ils présentaient une résistance particulière à la destruction en goutte pendante. Lorsque, 3 jours après, j'ai refait la numération des globules, je les ai trouvés au nombre de 22,84 par 0 "»'"^' 1 de sang. L'animal lui-même était dans un étal de santé excellent. Une goutte de son sang, mise en présence du sérum préparé, nous a donné h peu près les mêmes résultats que ceux obtenus avec le sang des Écrevisses A et C.

L'Ecrevisse B a vécu longtemps dans l'aquarium ; nos expériences

CONTRIBUTLON A L'ÉTI'DE DES CYTOTOXINES 359

ayant été faites au commencement de mois du juillet, Tanimal mourut le 25 novembre. Un mois après le dernier examen de son sang, j'ai de nouveau essayé sur lui l'action du sérum préparé de Cobaye ayant reçu 39 «c de sang d'Écrevisse. La comparaison de l'action du sérum sur le sang de cette Écrevisse avec son action sur le sang de Tanimal neuf n'a révélé aucune différence appréciable. Cependant l'animal lui même a résisté à la dose mortelle du sérum, comme l'animal A, les globules du sang des deux animaux ont acquis incontestablement la résistance à la plasmochise.

Dans une autre série d'expériences j'immunisais les Écrevisses contre l'action toxique du sérum neuf de Cobaye en leur injectant des doses faibles au commencement, que j'augmentais progressivement tous les 8 à 10 jours. Je ne me préoccupais pas alors des changements que pouvaient produire les injections dans le nombre des globules, chez les animaux en expérience. Je voulais les ménager pour pouvoir pousser l'immunisation le plus loin possible.

J'ai commencé les injections par la dose inofïensive de 0 <^<^ 1 de sérum neuf. Six Ecrevisses furent injectées en une journée, comme d'habitude, dans les espaces interannulaires de labdomen, du côté ventral et latéralement. Le "^r tableau résume les résultats de ces injections. Il est intéressant à consulter, car il prouve combien les recherches de ce genre sont difficiles à exécuter. Sur les six Ecrevisses vigoureuses soumises aux injections, trois (I, V et VI), moururent après la première injection d'une dose de sérum absolument inofïensive. La quatrième Écrevisse (!!« de notre tableau), ayant subi trois injections consécutives, mourut probablement par infection (Saprolégniées). Des deux Écrevisses survivantes, l'une a succombé 24 heures après avoir reçu la dose mortelle de sérum. Elle fut très malade le lendemain de l'injection. L'examen du sang montrait une notable diminution des globules, qui étaient tous immobiles et très altérés. L'animal mourut le môme jour. La seconde Ecrevisse a survécu à l'injection de la dose mortelle.

Elle a encore reçu 7 jours ciprès, une injection de 0^«8 de sérum neuf, et deux fois, à un intervalle de 7 jours, 1 ^« du môme sérum, qu'elle a bien supporté. Douze jours après]la dernière injection, j'ai fait l'examen de son sang : le nombre des globules était moindre qu'il n'était au début des injections. Leur état était cependant excellent.