ASS
peut avec avantage projeter rapidement 10 centimètres cubes de sang dans un ballon contenant 200 centimètres cubes de liquide érythrolytique, et agiter vivement. On laisse reposer le ballon pendant 5 à 10 minutes, on décante la partie supérieure et l’on distribue le reste entre plusieurs tubes à centrifuger.
Enfin, lorsqu'on fait une ponction d’organe, poumon, rate, tumeur, dans laquelle le liquide vient assez lentement, on procède de la façon suivante : on prend une seringue de 20 centimètres cubes contenant 19 centimètres cubes d'alcool au tiers ou d’acide acétique et l’on aspire un centimètre cube de sang. On agite immédiatement et l’on met le mélange dans les tubes à centrifuger.
5° CONCENTRATION. — La centrifugation doit suivre le plus tôt possible l’érythrocytolyse.
S1 l'on a opéré avec l'acide acétique, nous trouvons déjà les protoplasmas des leucocytes modifiés, bien qu'ils restent très reconnaissables par leurs noyaux. Lorsqu'il s’agit de recherches bactériologiques, cela a moins d'importance.
L'emploi de la solution alcoolique est pour cela plus pratique. Si l’on arrive à éviter la coagulation, en procédant comme nous l’avons indiqué, on
peut retrouver non seulement les microbes, mais les parasites et les cellules.
La durée de la centrifugation doit être assez courte, trente secondes, une minute suffisent généralement.
6° ETALEMENT. — Aussitôt le dépôt obtenu, on décante le liquide coloré, qui surnage au-dessus du culot formé. A l’aide d’une pipette, on recueille ce dépot. Il est déposé par gouttes sur plusieurs lames porte-objets parfaitement nettoyées et séchées. L’étalement se fait comme pour le sang, à l’aide d’un agitateur en verre ou avec une lamelle.
70 FrxarTion. — Les préparations sont séchées à l'air ou légèrement au-dessus de la flamme et traitées par les fixateurs habituels variables suivant la nature des recherches.
Pour les microbes, il peut suflir de fixer par la chaleur, en passant à deux ou trois reprises la lame dans la flamme d’un bec Bunsen.
Mais, d’une façon générale, nous employons des procédés moins brutaux pour retirer de l’examen tous les renseignements possibles.
L'acide osmique employé en vapeurs ou en solution à 1 ou 2 p. 100, nous a donné de très
bons résultats. Peut-être l’action légèrement fixatrice du liquide alcoolique était-elle un imconvénient. En tout cas, si l’on veut l’employer, il est utile de colorer à l’hématéine de Mayer.
L’acide chromique en solution à 1 p. 100 est préférable pour les recherches histologiques.
On peut aussi suivre le procédé conseillé par Jolly pour la fixation du sang, c’est-à-dire ne pas attendre que la lame soit complètement séchée et la plonger dans le liquide fixateur.
L'alcool à 90°, le chloroforme, mais mieux en. core, le mélange à parties égales d'alcool et d’éther nous ont donné de bons résultats.
Evidemment, il complète l'action de fixation commencée par le liquide hémolysant et permet toutes les recherches. C’est surtout pour les interprétations de cellules anormales trouvées dans le sang qu'il est utile d'employer d’autres procédés.
8° COLORATION. — Nous nous sommes servi des colorants habiluels pour les microbes, bleus, vio-. lets, réaction de Gram. Pour le bacille de Koch, nous avons employé exclusivement. la fuchsine phéniquée dé Ziehl avec décoloration à l'acide nitrique au tiers ou à l’aniline.
Les éléments cellulaires ont été colorés à l’hé-
Es AŸre
matoxyline, hémaléine, éosine, orange, bleu de méthylène, bleu de Unna, toluidine, magenta, Benda, triacide d’Ehrlich. Dans quelques cas nous avons recherché la réaction glycogénée avec la gomme iodée suivant la méthode de M. Brault.
