DOSAGE DES CENDRES

avec soin sur un fillrc. Les liquides réunis sans perte sont évaporés, et le résidu est desséché à 200° et pesé. (Poids des sels solubles A.) Le filtre avec le charbon est séché et remis dans le creuset également séché, on brûle au rouge vif et on pèse ; la cendre traitée par l'acide chlorhydrique étendu et chaud se dissout, sauf le charbon échappé à la combustion qu'on lave, sèche et pèse, pour le déduire du poi ds total des cendres insolubles B .

Dosage du liquide A. — Solution aqueuse des sels solubles :

S'il est acide et contient du phosphate de chaux ou de magnésie, on le sursature avec de l'ammoniaque ; on filtre, on lave, on sèche et on pèse le dépôt après combustion du papier, et on l'ajoute à la masse B.

Le Hquide filtré ou le liquide primitif, si l'opération précédente n'était pas nécessaire, ne contiendra plus de chaux ni de magnésie, s'il renferme de l'acide phosphorique, ou inversement. Dans le premier cas, on ajoute un petit excès d'acide azotique et de l'azotate d'argent; le précipité de chlorure d'argent est filtré, lavé et pesé avec les précautions voulues.

Le liquide filtré est débarrassé de l'excès d'argent par l'acide chlorhydrique, filtré de nouveau et précipité par un excès de chlorure de barium à chaux. Le précipité de sulfate de baryte lavé, séché et calciné pour brûler le papier est pesé. On enlève l'excès de baryte au liquide par l'acide sulfurique, et on évapore à sec après filtra lion. Le résidu contenant l'acide phosphorique et les alcalis est traité par l'acide nitrique chaud, et un morceau d'étain

pur, égal à 3 ou 4 fois le poids de l'acide phosphorique présumé. L'acide stannique formé relient tout l'acide phosphorique, on le sépare par fillration (C). Le liquide desséché avec quelques gouttes d'acide sulfurique donne le poids des alcalis à l'élat de sulfates, après calcination du résidu. Les sulfates alcalins redissous dans l'eau (peu) sont précipités par le bichlorure de platine avec les précautions voulues, et le chloroplatinate de potasse recueilU sur un filtre taré d'avance est lavé et pesé après dessiccation.

Soient x la potasse et y la soude, S le poids trouvé des sulfates et P celui du chloroplatinate, on aura :

5,193 . a; = P, et 1,8 i9a; + 2,290?/ = S.

L'acide stannique C est dissous avec le filtre dans l'eau régale ; la solution sursaturée par l'ammoniaque est additionnée d'un excès de sulfhydrate d'ammoniaque et le liquide filtré est précipité par le sulfate dje magnésie. Le précipité de phosphate ammoniaco-magnésien est filtré, lavé avec de l'eau ammoniacale et calciné ; le poids donne l'acide phosphorique à l'étal de pyrophosphate de magnésie. (Méthode de M. Reynoso modifiée par M.. Girard.)

Dans le second cas (absence d'acide phosphorique), on ajoute du chlorhydrate d'ammoniaque, de l'ammoniaque et de l'oxalate d'ammoniaque ; on laisse reposer douze heures, on filtre l'oxalate de chaux qu'on calcine après lavage à l'eau chauds pour peser la chaux à l'état de

DOSAGE DES CENDHES.

carbonate. Le liquide est additionné de phosphate d'ammoniaque, au bout de douze heures on filtre le phosphate ammoniaco-magnésienje liquide filtré et évaporé à sec est débarrassé d'acide phosphorique, et les alcalis sont dosés comme plus haut d'après le procédé Reynoso et Crirard.

Dosage de la dissolution 5. — On évapore à sec, oh reprend par l'acide azotique chaud avec un fragment d'é tain. L'acide stannique filtré et lavé retient du fer et tout l'acide phosphorique; on le dissout dans l'eau régale, la solution sursaturée d'ammoniaque et de sulfhydrate d'ammoniaque donne le fer à l'état de sulfure. Ce sulfure est redissous dans l'acide chlorhydrique avec un peu d'acide nitrique et précipité à l'état d'oxyde par l'ammoniaque. L'acide phosphorique se dose comme plus haut (méthode Girard). Le Uquide séparé de l'acide stannique donne le fer (partiel) par l'ammoniaque; on l'ajoute à l'autre partie déjà précipitée. Il ne reste plus qu'à précipiter successivement la chaux et la magnésie parl'oxalate d'ammoniaque et le phosphate de soude.

Nous n'avons indiqué ici que la marche à suivre pour le dosage des parties constituantes minérales; pour les détails opératoires, la manière de peser et en général de traiter les précipités partiels, nous renvoyons aux ouvrages spéciaux d'analyse, et notamment à celui de ÎHM. Gerhardt et Chancel.

La sihce se dose à part en suivant la marche tracée pour sa détermination quaUtative.

Il en est de même de l'acide carbonique des cendres

-iOS • CHIMIE PHYSIOLOGIQUE.

qu'on dose par différence en le chassant par l'acide chlorhydrique d'un échantillon de cendres obtenues par une combustion immédiatement complète, après avoir toutefois pris la précaution de restituer l'acide carbonique qu'une température trop élevée a pu enlever au calcaire ; il suffit pour cela de chauffer les cendres avec du carbonate d'ammoniaque jusqu'à expulsion de l'excès.

On met la cendre ainsi préparée et bien pesée dans une petite fiole A, qui se ferme par un bouchon percé de deux orifices; dans l'un, est fixé le tube courbé et plongeur d'une petite picette à acide B, construite avec un tube d'essai, et dans l'autre, s'adapte un tube dont l'extrémité

libre s'engage dans un tube çlus large remph de chlorure de calcium C [fig. 2).

Le tube B est rempli d'acide sulfurique étendu.

Après avoir taré l'appareil, on aspire pour faire passer l'acide dans la fiole, et, ^^9- 2- lorsque la réaction est

terminée, on aspire encore une fois pour chasser l'acide carbonique qui remplit l'appareil, et on détermine la perte éprouvée.

MATIÈRES 0RGAN1QUI.S.

E<a dialyse et la diffusion cnYisaffées comme méthodes d'aualjse piiysiologiquc.

La dialyse et la diffusion peuvent être considérées comme des méthodes d'analyse destinées ù recevoir des applications importantes en physiologie.

S'agit-il d'opérer la séparation d'un colloïde et d'un cristalloïde mélangés, sur une plaque en gutla percha, on dispose un anneau d'un diamètre de O'",200 à 0'",250 et de 0'°,075 de profondeur, on le ferme avec une feuille de papier parchemin (papier modifié par l'action de l'acide sulfurique, il se trouve dans le commerce), de manière à donner à l'appareil la forme d'un tamis. On y verse une couche de 0'",012 de la solution sur laquelle on veut opérer, et on fait flotter le tout sur une quantité relativement considérable d'eau. Le cristalloïde passe seul à travers le septum. (Moyen de séparer le sucre, l'urée, les sels, etc., de l'albumine ou autres corps semblables.)

On opère la séparation des cristalloïdes d'inégale diffusibilité en introduisant leur solution au moyen d'une pipette au fond d'une éprouvette étroite pleine d'eau. La substance la plus diffusible monte et se sépare de plus en plus des autres. (Graham.)

Matières organiques. Caractère», leur recherche et leur dosage dans l'organisme.

Substances hydrocarbonées. — Glycogène.— W prend

une coloration violette ou rouge marron par l'iode, se Iràiisforrne en glucose par l'ébullition avec l'acide sulîurique étendu. Pour son dosage, on détermine par Tun des procédés suivants la quantité de sucre formée.

Glucose. — Ce n'est que dans les cas de diabète que l'on peut trouver le sucre dans l'urine et le doser sans préparation préalable.

Lorsque la quantité de glucose dans l'urine est faible, on ajoute de l'acétate de plomb, on filtre et on précipite le liquide par l'ammoniaque. Le précipité obtenu, bien lavé, est décomposé par l'acide oxalique, on filtre, on sature par le carbonate de chaux, on filtre de nouveau. Le liquide acidulé avec un peu d'acide acétique est évaporé à sec aubain-marie, le résidu repris par peu d'eau donne une liqueur propre aux déterminations qualitatives et quantitatives, si toutefois on a mesuré l'urine et pris les précautions nécessaires pour ne rien perdre. (Brueke.)

Pour la recherche du sucre dans le sérum ou tout autre liquide albumineux, on neutralise avec de l'acideacétique, on coagule par la chaleur, on filtre, on lave. Le liquide est évaporé à sec et repris par l'alcool absolu. La solution additionnée dépotasse alcoolique donne un précipité visqueux, épais (glucosate de potasse), qui, dissous dans l'eau, servira aux déterminations qualitatives et quantitatives.

(Lehmann.)

On reconnaît la glucose en solution : 1° par sa saveur sucrée ; 2° par la fermentation avec la levûre (dégagement d'acide carbonique, formation d'alcool ). C'est le caractère le plus certain quand on peut le mettre en pratique. 3° En

l'absence de toute autre substance active, par la déviation qu'elle imprime au rayon polarisé. On ne peut appliquer ce procédé qu'à l'urine diabétique ; le liquide doit être décoloré par filtration sur du noir animal, ou par précipitation par le sous-acétate de plomb. 4° Par la réduction à chaud du sous-nitrate de bismuth en présence de la potasse caustique. Ce sel noircit sous l'influence du sucre de raisin. Il n'en faut qu'une pincée avec un petit fragment de potasse pour déceler la glucose. (Boettger.) 5° Au moyen de la liqueur de Fehling (tartrate de cuivre alcalin). La glucose chauffée à 100° avec ce réactif le réduit énergiquement et précipite de l'oxydule rouge de cuivre (Cu^O). On prépare la liqueur de Fehling en dissolvant:

Sulfate de cuivre cristallisé, très-pur et sec 34g'',65

Eau 200 ,00

On mélange avec une solution de i 73 grammes de sel de Seignette pur dans 480'='' de lessive de soude caustique à 18°,5 AB, on étend à un litre. Cette solution sert aussi au dosage : lO*^" valent 0^',05 glucose. 6" Chauffée avec la potasse caustique en solution aqueuse, la glucose donne une liqueur brune. 7° Par la preuve de Trommer, elle se rapproche de Tessai par la liqueur de Fehling, et consiste à ajouter au Hquide à examiner d'abord de la potasse, puis quelque peu de sulfate de cuivre. La solution d'un beau bleu doit se troubler par la chaleur et déposer de l'oxydule rouge de cuivre.

Pour le dosage on emploie : 1° le saccharimètre de M. Soleil, mais dans les cas de diabète seulement et

après décoloration de l'urine^ 100 divisions de l'échelle correspondent à une colonne liquide de G", 20 à 223,97 de glucose par litre d'urine (1).

2°Laliqueur deFehling, en se servant soit de l'urine, soit des extraits préparés comme il a été dit ci-dessus ; dans ce dernier cas, on étend le produit saccharifère de manière à former 50 ou 20 ou 10", selon la masse dont on dispose. On met pour l'essai 10 ou 5 ou 2",5 de solution de cuivre dans une petite fiole en verre blanc, on chauffe au bain de sable, et on ajoute goutte à goutte avec une burette la liqueur sucrée tant qu'il se forme un précipité Jaune rougeâtre et tant que la liqueur est colorée en bleu. Lorsque le point est atteint, on filtre et on essaye par l'hydrogène sulfuré si le liquide renferme encore du cuivre. S'il n'y a plus de précipité noir, on recommence l'essai en s'arrêtant à 0",5 avant la limite supérieure trouvée en premier, on filtre à chaud après addition d'un peu d'eau; le liquide filtré doit encore renfermer du cuivre, on continue à verser le sucre par gouttes, et on arrive à saisir exactement le point d'arrêt. Le volume de liquide qui précipite 1" de solution de cuivre contient 0^',005 de glucose. Nécessairement il faut être exercé pour réussir.

Nous ferons remarquer en passant que parmi les principes de l'organisme l'acide urique se comporte vis-à-vis de la liqueur de Fehling comme la glucose.

(1) Pour les détails opératoires et la description de l'appareil, consulter les Traites de physique^ la Chimie de Uegnault et la brochure de M. Clerget, annexée à tous les appareils construits par M. Duboscq-Soleil, et extraite des Annales de chimie, 3« série, t. XVI.

Lactose. — La lactose réduit la solution deFehling et le sous-nitrate de bismuth en présence de la potasse. Elle fermente moins vite que la glucose ; l'acide nitrique la convertit facilement en acide mucique peu soluble dans l'eau et insoluble dans l'alcool. L'examen des cristaux la distingue du sucre de raisin, quand il est isolé sous cette forme. Le dosage de la lactose se fait par la liqueur de Fehling absolument comme celui du sucre de raisin ; mais il faut se rappeler que 10 parties lactose = 7 sucre de raisin sous le rapport du pouvoir réducteur. La recherche qualitative et quantitative du sucre de lait ne se fait que pour le lait. Ce liquide additionné d'acide acétique est chauffé à 60°, le coagulum filtré ; le petit-lait peut être directement employé. Pour avoir le sucre en nature, il faut évaporer dans le vide sec, reprendre par l'alcool chaud, filtrer, concentrer à sirop, ajouter un peu d'alcool absolu et abandonner à cristallisation.

Inosine. — Scherer indique une réaction qui permet de reconnaître facilement ce corps observé dans l'urine dans certains cas de diabète. La matière à examiner est chauffée avec de l'acide nitrique sur une lame de platine ; avant l'évaporation complète on y ajoute de l'ammoniaque et une goutte de chlorure de calcium, et on dessèche avecprécaution, la masse prend une belle coloration rouge rosée. Mais, avant d'appliquer la réaction de M. Scherer, il faut isoler l'inosine dans un état de pureté relatif.

A cet effet on coagule le liquide organique par la chaleur en neutrahsant préalablement par l'acide acétique, on précipite d'abord par l'acétate neutre de plomb ; le

facile de se régler d'après cela. Le sucre (glucose) et l'albumine dans l'urine peuvent se déterminer simultanément par le saccharimètre. A cet elTet, on mesure la déviation initiale, puis on coagule l'albumine et on détermine la glucose par son pouvoir rotataire. (Hoppe.) Un calcul trèssimple donnera l'albumine. La méthode chimique repose sur la propriété fondamentale de Talbumine de se coaguler par la chaleur vers 100°. Lorsque le liquide albumiiieux est alcalin, comme cela arrive dans le sérum, il faut se garder de le chauffer sans précaution. Il convient de tenir compte des observations faites par Scherer à cet égard. Le liquide, s'il est trop concentré, doit être étendu d'eau et neutralisé, même très- légèrement acidifié avec de l'acide acétique, puis porté à l'ébullition au bain-marie, dans un petit vase à précipités. L'albumine se sépare alors en flocons faciles à recueillir et à laver sur un filtre taré. La graisse entraînée peut être éliminée par de l'alcool bouillant. Les matières minérales sont déterminées par incinération après la pesée. Dans la pesée il faut observer toutes les précautions prescrites par les livres d'analyse à propos des substances hygroscopiques. (Sécher à 120% laisser refroidir dans l'exsiccateur et peser le filtre entre deux verres de montre qui s'ajustent bien l'un sur l'autre.)

Fibrines. — Pour la recherche des diverses variétés de fibrines insolubles, nous renvoyons à ce qui a été dit pages 33 et 34, et pour son dosage dans le sang voir Analyse du sang.

Caséine. — Le procédé suivant présente seul quelque

garantie lorsqu'il s'agit de démontrer avec certitude la présence de la caséine dans un liquide organique autre que le lait.

La liqueur est portée à l'ébuUition avec addition d'un peu de sel ammoniac ; le précipité est séparé parle filtre; une partie du liquide refroidi est mélangée à du sulfate de magnésie; s'il y a un trouble, on filtre de nouveau, et la liqueur filtrée est portée à l'ébuUition; l'apparition d'un précipité sera déjà un indice assez sûr de la présence de la caséine. Ce résultat doit être confirmé par l'essai suivant. On ajoute à une partie du liquide coagulé par la chaleur avec le sel ammoniac, un morceau de membrane interne fraîche et bien lavée de l'estomac de veau, et on maintient une à deux heures à 30 ou 40° ; au bout de ce temps, toute la caséine, s'il y en a, est coagulée. (Lehmann. )

Dans le lait, il suffit de verser quelques gouttes d'acide acétique pour précipiter la caséine, ou mieux de la coaguler directement par la caillette fraîche.

Tissus à gélatine. — Les tissus à gélatine se reconnaissent par la propriété qu'ils ont de donner par une coction prolongée avec de l'eau des solutions qui renferment de la gélatine ou de la chondrine.

La gélatine en solution se reconnaît aux réactions suivantes :

l'Elle précipite par le tannin, le sublimé corrosif et l'alcool.

2° Elle ne précipite pas par le sous-acétate de plomb, l'acide acétique et le cyanure jaune en présence de l'acide acétique.

3° Les solutions concentrées prennent par le refroidissement une forme gélatineuse.

La recherche de la gélatine dans le sang a une certaine valeur dans le diagnostic, puisque Scherer en a trouvé dans certains cas de leuchémie.

Le sérum est coagulé avec addition d'acide acétique par la chaleur; le hquide filtré est évaporé à consistance sirupeuse, dans le cas de la présence de gélatine, il se prendra en gelée et précipitera des flocons blancs par l'alcool.

La chondrine gélatinise aussi et précipite par l'alcool, mais elle se distingue de la gélatine, parce que ses solutions précipitent par l'acide acétique; le précipité est insoluble dans un excès de réactif, soluble dans les sels alcalins ; elle précipite par les acides minéraux étendus et l'alun, le précipité se dissout dans un excès de réactif. L'acétate de plomb donne également un précipité.

Principaux dérivés des substances protéiques. — Hématine. — Elle se distingue de tous les autres corps par sa couleur, la présence de quantités sensibles de fer dans ses cendres, ses solutions alcalines sont d'un rouge brun foncé ou brun verdâtre, selon l'état de concentration^ et deviennent brun clair après addition d'acide sulfurique. Pour rechercher l'hématine en présence d'autres produits organiques (albumine, fibrine, etc.), on dessèche la matière à examiner, et on la traite par l'alcool acidulé avec de l'acide sulfurique.

Le dosage de l'hématine n'a d'intérêt que pour le sang (voir Analyse du sang). Sa détermination qualitative est

Utile toutes les fois qu'il s'agit de décider si un liquide organique est ou non mélangé à du sang.

Acides de la bile. — Les acides tauro et glycoeholique se caractérisent par la réaction de Pettenkofer (coloration roùge violette par l'acide sulfurique et le sucre) ; il ne faut cependant pas perdre de vue que l'acide oléique la donne aussi. L'acide taurocholique se distingue de l'acide glycoeholique, puisqu'enl'absence de sulfates ou de matière protéique ou après élimination de ces corps, il donne de l'acide sulfurique par la déflagration avec du chlorate de potasse et du carbonate de soude pur. Ces essais peuvent se faire directement avec la bile ; mais quand il s'agit de déterminer la présence de ces corps dans un autre Hquide (sang — urine — contenu de l'estomac et de l'intestin), on procède dej la manière suivante. Le liquide, débarrassé de produits albumineux par coagulation à 100" en présence d'un très-léger excès d'acide acétique et d'un sel alcalin (SO^NaO), est précipité par le sous-acétate de plomb. Le précipité étant additionné d'une solution de carbonate de soude, on dessèche et reprend par l'alcool absolu. La solution évaporée donne ijn résidu qu'on traite par un peu d'eau; la liqueur ainsi préparée servira à la réaction de Pettenkofer. (Neukomm.) Quelques gouttes sont versées dans une petite capsule en porcelaine avec deux à trois gouttes d'acide sulfurique (1 p^'-S03,H0 + 4''H0) et une petite pincée de sucre, on chauffe doucement, il doit se former une couleur pourpre violette. S'il y a lieu de croire que les acides biliaires ont pu se décomposer en leurs dérivés insolubles dans l'eau, mais solubles dans

l'alcool ou dans l'éther, ce n'est plus dans l'extrait aqueux, mais dans les extraits alcooliques ou éthérés qu'il faudra chercher des produits capables de fournir la réaction de Pettenkofer.

Pigments biliaires. — Parmi les pigments biliaires, le plus important est la bilifulvine (hématoïdine). Quelle que soit la matière sur laquelle doit porter l'examen (urine, sérum, contenu de l'estomac ou de l'intestin, etc.), on peut employer le procédé suivant dû à Yalentiner : la masse liquide, ou demi-liquide ou solide^ est agitée avec le tiers de son volume de chloroforme, la solution de la bilifulvine dans le chloroforme est soutirée, filtrée au besoin sur un filtre mouillé avec du chloroforme et évaporée. On peut obtenir ainsi le pigment en nature et souvent même en cristaux. Cette même solution, concentrée au besoin, est très-propre à donner la réaction caractéristique de Gmelin ; en y versant de l'acide nitrique chargé de vapeurs nitreuses, la biUfulvine passe successivement par les teintes suivantes : vert foncé, bleu, violet, rouge orange. Il n'est pas toujours nécessaire de traiter préalablement par le chloroforme (urine ictérique, même albumineuse, très-foncée; vomissements biliaires sans mélange de résidus d'aliments ; bile ) , pour déceler la bilifulvine. On verse simplement le liquide dans une éprouvette à pied, étroite et profonde, puis au moyen d'un entonnoir à long col, on fait arriver en dessous l'acide nitrique nitreux ; par suite du mélange progressif, il se formera des zones colorées différemment ; en allant de bas en haut, les teintes sont : l'orangé, le rouge, le

MATIÈRES OllGANIQUES.

violet, le bleu et le vert. La recherche de la bilifulvme est très-importante pour le diagnostic médical, parce qu'elle permet de conclure avec certitude à la présence des produits biliaires dans la matière soumise à l'expérience; tandis que la détermination des acides de la bile est beaucoup plus difficile et donne le plus souvent des résultats négatifs, en dehors de la bile elle-même ou du contenu de l'intestin grêle.

Le clinicien n'a aucun intérêt à procéder à l'examen d'un liquide au point de vue de la biliverdine. Elle se dissout en vert dans l'alcool chaud en présence des acides (Scbwerdfeger) et se décolore par l'acide nitrique nitreux sans les changements de teinte de la bilifulvine. On doit la chercher surtout dans le précipité fourni par l'acétate basique de plomb. Scherer précipite la matière colorante par le chlorure de barium ; le précipité est décomposé par le carbonate de soude et le liquide filtré précipité par l'acide chlorhydrique, la matière colorante est lavée et dissoute dans un mélange d'alcool et d'éther.

Tyrosine et leucine. — Ce que nous avons dit dans le précédent chapitre de l'apparition anormale de ces deux corps dans l'urine, le sang, le foie et d'autres organes, rend assez évidentes rutilité et l'importance, au point de vue médical, des analyses faites dans le but de rechercher ces produits.

S'agit-il d'un organe parenchymateux, le tissu, finement haché, est mis à digérer avec le double de son volume d'alcool et exprimé au bout de vingt-quatre heures; le liquide est évaporé à consistance sirupeuse, et le résidu

repris par l'eau est successivement précipité par l'acétate neutre et par le sous-acétate de plomb (ce dernier dépôt peut servir à la recherche de l'inosine). Le liquide filtré et purgé de plomb par l'hydrogène sulfuré est concentré à consistance sirupeuse et abandonné à la cristallisation. La leucine se sépare sous forme de grains globulaires (agglomération de cristaux), et la tyrosine en houppes doubles d'aiguilles accolées par leur sommet. (Neukomm.) Dans le sang, on coagule Talbumine par la chaleur après addition d'un peu d'acide acétique^ le liquide filtré est égalementprécipitépar l'acétate neutre etbasique de plomb,puis concentré à consistance sirupeuse. Quant à l'urine, on la précipite directement par les sels de plomb , le liquide filtré est évaporé.

Comme caractères de la leucine, on peut employer 1° l'odeur d'amandes amères qu'elle développe soas l'influence d'un mélange de peroxyde de manganèse et d'acide sulfurique étendu (cyanure de butyle) ; 2° la réaction de Scherer. Il prescrit d'évaporer sur la lame de platine avec de l'acide nitrique et de chauffer le résidu peu coloré avec une goutte de soude caustique ; elle donne un liquide oléagineux plus ou moins coloré^ peu adhérent à la lame et se réunissant sous forme de globule. (L'acide hippurique donne le même caractère.)

La tyrosine offre trois réactions assez caractéristiques : 1» Celle de B. Hoffmann. L'azotate de mercure colore en rouge à chaud une solution de tyrosine qui n'est pas trop étendue.

2° D'après Piria, la tyrosine mouillée au fond d'une

capsule avec de l'acide sulfurique concentré se dissout à une douce chaleur avec une coloration rouge fugace. La solution étendue d'eau, neutralisée par le carbonate de bai7te et filtrée, prend une coloration violette sous l'influence du perchlorure de fer, si toutefois il n'y a pas trop de leucine en présence.

3° La réaction de Scherer permet de déceler la tyrosine même en présence de la leucine, et de plus elle a l'avantage d'être extrêmement simple. La substance soupçonnée être de la tyrosine est chauffée avec de l'acide nitrique sur une lame de platine, il se développe une couleur jaune orangé, le résidu de l'évaporation est brillant, jaune, transparent; par addition d'un peu de soude caustique, il devient jaune rougeâtre à froid et brim noirâtre à chaud.

La leucine etlatyrosinenepeuvent se doser qu'en nature.

La xanthine, l'hypoxanthine, la xanthoglobuline, la créatinine et lacréatine n'ont aucune valeur séméiotique au moins jusqu'à présent ; nous indiquerons cependant en quelques mots comment il faut les rechercher dans un organe, dans le sang ou l'urine.

Le tissu haché et mélangé à du sable est additionné d'alcool, de manière à former une bouillie claire ; le mélange est chauffé et exprimé. Le résidu est encore digéré quelques heures avec de l'eau à 50" et exprimé de- nouveau. Les deux liquides sont mélangés ; on distille l'alcool, on filtre, on concentre, et on précipite successivement par l'acétate neutre, par le sous-acétate de plomb, et enfin par l'acétate de mercure. Les deux derniers préci-

pités décomposés par l'hydrogène sulfuré donnent des liqueurs A qui contiennent l'inosine, la xanthine et l'hypoxanthine. Le liquide B, filtré de ces précipités, peut après concentration servir à la recherche de la créatine et de la créatinine. (Staedeler.)

La solution A dépose les deux premiers corps après concentration et refroidissement. Leur séparation ne peut s'effectuer que par un procédé qui exige passablement de matière, elle est fondée sur l'inégale solubilité de leurs combinaisons chlorhydriques dans l'acide chlorhydrique, (le chlorhydrate d'hypoxanthine est plus soluble que l'autre). (Scqerer.)

L'hypoxanthine chauffée sur la lame de platine avec de l'acide nitrique donne un résidu blanc jaunâtre, mat, non boursouflé ; il se colore en jaune rougeâtre par la soude et par l'évaporation, il ne prend une teinte rouge violacé sur les bords que si l'hypoxanthine est mélangée de xanthine. Ce dernier corps donne dans les mêmes circonstances un résidu jaune intense après éUmination de l'acide nitrique et une magnifique coloration violette par l'évaporation avec la soude.

La xanthoglobuline trouvée par Scherer dans le foie des ictériques, dans l'urine humaine normale, et par Fox dans le foie de bœuf normal, se présente sous forme de globules arrondis, jaunes, à texture cristalline. A froid, 3,800 parties d'eau dissolvent 1 partie de xanthoglobuline; il en faut 400 parties pour 1 partie, à chaud. Elle est soluble dans l'ammoniaque, d'où elle se dépose en globules durs, peu solublesdans l'acide chlorhydrique froid. Chauf-

fée sur la lame de platine avec de l'acide azotique, elle donne un résidu jaune, mat, non transparent, qui devient rouge foncé par la soude à froid ; à chaud, la couleur disparaît ou devient d'un brun sale. (Scherer.) On ne connaît pas encore exactement sa composition.

Le liquide B dépose par refroidissement et lorsqu'il est suffisamment rapproché des cristaux de créatine, et l'eau mère additionnée de chlorure de zinc donnera des cristaux de chlorure double de -zinc et de créatinine. Le meilleur caractère de la créatine est sa forme cristalline. Elle réduit à l'ébullition l'oxyde de mercure. Ses cristaux sontlixes et perdent leur transparence à 100°.

Pour la recherche de ces produits dans l'urine, on précipite de même et successivement par les deux acétates de plomb et l'acétate de mercure, etc. Dans le sang, on fera de même après coagulation de l'albumine. (Méthode de Staedeler.) Pour le dosage de la créatinine dans l'urine, Neubauer prescrit de rendre l'urine alcaline (300") par addition de lait de chaux, de précipiter les phosphates par le chlorure de calcium. Au bout de deux heures le liquide est filtré et évaporé rapidement" au bain-marie presque à sec ; on mélange encore chaud à 40" d'alcool à 95 7o. Au bout de cinq heures on filtre en lavant le dépôt à l'alcool, on ajoute à la liqueur 0",5 de chlorure de zinc dissous d'une densité = 1,2. Le mélange est couvert et abandonné trois à quatre jours dans un endroit frais ; les cristaux formés sont recueillis sur un filtre taré, lavés à l'alcool, séchés et pesés. Les autres produits (créatine, xanthine, etc.) sont pesés en nature après cristallisation.

Acide urique, sa recherche dans le parenchyme des organes, le sang et l'urine.— ho, tissu haché et traité par l'alcool, puis exprimé, est épuisé par l'eau ; le liquide est successivement précipité par l'acétate neutre , puis par l'acétate basique de plomb. Ce dernier dépôt est décomposé en présence de l'eau par l'hydrogène sulfuré, la hqueur filtrée dépose par concentration des grains cristallins d' acide urique .

Dans le sang on opère de même après coagulation de l'albumine.

Dans l'urine la détermination est plus facile ; on évapore 100" d'urine à sec, on lave à l'alcool chaud, puis à l'eau acidulée avec de l'acide chlorhydrique. Le résidu représente l'acide urique qu'on peut en même temps doser en le recueillant sur un filtre taré, lavant à l'alcool et à l'éther et en séchant à j 10°.

Le meilleur caractère de l'acide urique, à côté de sa forme cristalline, est la manière dont il se comporte avec l'acide nitrique. Ces deux corps chauffés ensemble sur une lame de platine donnent un résidu rouge qui devient bleu violacé intense par addition de soude et à chaud.

Acide hippurique. — On n'a guère à le chercher que dans l'urine ; à cet effet, on mélange l'urine avec la moitié de son volume d'un mélange de 2 volumes eau de baryte saturée et de 1 volume solution de nitrate de barjle saturée. Après filtration le hquide est exactement neutralisé avec de l'acide nitrique étendu et additionné de perchlorure de fer, neutre autant que possible. Le précipité jaune rougeâtre est de l'hippurate de fer. On peut le décomposer par l'ammoniaque, filtrer, chasser l'excès d'alcali par l'éva-

poration, précipiter par l'acétate de plomb, décomposer l'hippurate de plomb par l'hydrogène sulfuré, filtrer et concentrer pour obtenir l'acide en nature et sous forme de cristaux. Dans ces essais il faut opérer sur l'urine fraîche ; si elle a eu le temps de s'altérer, le précipité par le perchlorure de fer ne sera plus que du benzoate de fer. Les meilleurs caractères de l'acide hippurique sont la forme de ses cristaux (prismes allongés), et sa décomposition en acide benzoïque, par l'ébuUition avec de l'acide chlorhydrique.

Wreden dose l'acide hippurique au moyen d'une liqueur normale de perchlorure de fer.

Préparation de la liqueur normale. — On neutralise 0^%5 d'acide hippurique pur avec du bicarbonate de soude, et on étend à 250". 50"= de cette solution contiennent 0^%1 d'acide; on les mesure avec une pipette jaugée, puis on y verse avec une burette une solution de perchlorure de fer neutre, en essayant de temps en temps pour juger du terme de l'essai : à cet effet on met un morceau de papier joseph imbibé de cyanure jaune sur une assiette , on le recouvre d'un double de papier à filtre, et on le presse avec une baguette trempée dans l'essai ; une coloration bleue du papier intermédiaire indique un excès de fer en solution, et partant la précipitation complète de l'acide. Soit M, le volume du perchlorure employé (M doit être < 10"), il correspond à 0^%1 d'acide hippurique. On l'étendra d'assez d'eau pour qu'il occupe un volume de 10" = 0,1 acide hippurique.

Dosage dans Vurine. — 60" d'urine sont précipités par

30 OU 60" de la solution barylique précédente, selon l'élal de concentration; on filtre et on mesure un volume correspondant à 50" d'urine (75" dans le premier cas, 100" dans le second); après neutralisation par l'acide nitrique étendu, l'essai se poursuit comme pour le titrage de la solution de fer; le maximum d'erreur que comporte ce procédé est de 15 milligrammes pour 50" d'urine. Cette méthode peut encore s'employer avec l'urine putréfiée, puisqu'un équivalent d'acide hippurique donne un équivalent d'acide benzoïque qui précipite la même quantité de fer.

Urée. — Nous avons à nous occuper en détail de la recherche et du dosage de l'urée dans l'urine, le sang et les liquides parenchymateux ou séreux, comme intéressant particulièrement le physiologiste et le médecin.

Pour démontrer avec certitude la présence de l'urée dans un organe ou un liquide, il convient d'isoler ce corps tout au moins sous forme de nitrate d'urée, et, si c'est possible, par l'intermédiaire de ce dernier à l'état d'urée pure. On arrive facilement à ce résultat, si la quantité de substance dont on dispose n'est pas trop minime, en décomposant parle carbonate de baryte les cristaux de nitrate d'urée, en évaporant à sec et en reprenant par l'alcool absolu. S'agit-il d'un organe, la matière hachée finement est digérée pendant douze heures, avec deux fois son Volume d'alcool, le liquide exprimé est concentré à sirop, le résidu repris par l'eau est précipité par l'acétate et le sous-acétate de plomb, le liquide filtré débarrassé du plomb par l'hydrogène sulfuré est concentré à sirop, le résidu est repris par l'alcool absolu, et enfin le liquide alcoolique concentré

est additionné d'acide nitrique; le précipité de nitrate d'urée peut être examiné au microscope, transformé partiellement en urée ; sur la lame de platine il ne doit pas donner de résidu. M. J. Picard prescrit la marche suivante pour la recherche de l'urée dans le sang, ainsi que pour sa détermination quantitative. Le sang (100 à 150^') est mélangé au sortir de la veine à son volume d'alcool fort (96 °/o), acidulé avec quelques gouttes d'acide acétique et chauffé au bain-marie. Le coagulum exprimé dans une toile est délayé une seconde fois dans l'alcool et exprimé de nouveau. Les hquides sont évaporés rapidement au bain-marie avec addition de 2 à 3 grammes de plâtre. Le résidu est mis à digérer avec de l'alcool filtré, et le liquide filtré est évaporé à sec ; le résidu traité par un mélange d'alcool et d'éther (2? alcool -\- 1? éther) lui cède de l'urée, des graisses, de l'extractif et des traces de sel marin; on évapore, on distille et on reprend par l'eau; les matières extractives sont précipitées par le sous-acétate de plomb ; le liquide filtré est débarrassé du plomb par l'hydrogène sulfuré et concentré ; il peut servir alors, soit au dosage de l'urée par le nitrate de mercure (voir plus loin), soit à la précipitation par l'acide nitrique. On a fait à ce procédé (Redlinghausen) le reproche de déterminer la transformation partielle de l'urée en carbonate d'ammoniaque, et de ne pas éliminer tout le sel marin qui gêne dans le dosage par la méthode de Liebig : il est en tous les cas trop long. Après la coagulation par l'alcool et l'évaporation, on pourrait reprendre par l'eau, précipiter par l'acétate et le sous-acétate de plomb. Le liquide filtré et débarrassé du

plomb par l'hydrogène sulfuré serait alors évaporé, et le résidu repris pai' l'alcool absolu.

Rien n'est plus facile que de démontrer la présence de l'urée dans l'urine ; il suffit de concentrer au sixième, et d'ajouter de l'acide nitrique pur, on verra se former un dépôt abondant de nitrate d'urée.

Les propriétés de l'urée qui peuvent servir à la caractériser le mieux sont : la forme cristalline du nitrate et de l'urée elle-même, la volatilité complète de ces deux produits sur la lame de platine ; sa précipitation par l'acide nitrique, l'acide oxalique, le nitrate de mercure en solution neutre, et, en l'absence de carbonate d'ammoniaque, le dégagement des gaz azote et carbonique sous l'influence de l'acide nitreux ou hypochloreux (en l'absence des sels ammoniacaux).

Le dosage de l'urée se fait dans les liquides préparés comme il a été dit plus haut, par la méthode de Liebig, lorsqu'il s'agit du sang ou d'un organe.

Dosage de Vurée dans Vurine. (Méthode de Liebig.) Les opérations à faire sont les suivantes : 1° Mesurer 50" d'urine, ajouter 25" de solution barytique B, filtrer et essayer par une goutte de solution B si tout l'acide phosphorique est précipité ; si le liquide se trouble encore, verser 25" de B dans le Hquide et filtrer sur le même filtre, laisser égoutter sans laver.

2° Mesurer avec une burette de Mohr 15 ou 20"" de l'urine barytique, valant 10" urine ordinaire (suivant qu'on a employé 25 ou 50" de solution B), laisser couler dans un vase à précipiter, neutraliser avec de l'acide nitrique

et verser peu à peu avec une burette la solution mercurielle A, jusqu'au moment où l'on voit apparaître un précipité qui ne se dissout plus par l'agitation, noter le volume M de solution A employée.

3° Mesurer de nouveau i5 ou 20" d'urine barytique = 10" urine normale, neutraliser avec l'acide nitrique, et verser d'un trait un volume M (égal à celui de la liqueur À employée précédemment) de la liqueur C de nitrate d'ar^ gent, filtrer et laver. Le liquide filtré et l'eau de lavage vont servir au dosage de l'urée.

4" On y verse goutte à goutte avec une burette de Mohr la solution raercurielle D, en neutralisant à peu près et de temps en temps avec une solution concentrée de carbonate de soude. Après chaque demi-centimètre cube de 11quem' D employée, on porte avec une baguette quelques gouttes du liquide essayé dans un verre de montre, on laisse couler une goutte de carbonate de soude ; l'opération est terminée lorsqu'il se produit par là un précipité non plus blanc, mais jaune. Tant que ce résultat n'est pas atteint, on fait tomber avec une picette le contenu du verre de montre dans le vase où se fait l'expérience. Il ne reste plus qu'à noter le volume de la liqueur D, nécessaire pour produire l'effet voulu ; chaque centimètre cube correspond à0^^01 d'urée^,

Théorie. — Les opérations n"^ 1 et 2 ont pour but de déterminer la quantité de sel marin ; cette donnée est nécessaire, afin qu'on puisse précipiter complètement ce corps par l'opération 3. En solution neutre le nitrate de mercure précipite l'urée, le chlorure ne la précipite pas;

486 CHIMIE PHYSIOLOGiyUK.

de plus, le nitrate de mercure et le sel marin mis en présence font double échange de leurs métaux ; si donc on verse une solution de nitrate mercurique dans de l'urine qui renferme à la fois de l'urée et du sel marin, la précipitation ne commencera que lorsque tout le chlorure de sodium aura été transformé en sublimé. La solution mercurielle A est composée de telle sorte, que 1" équivaut à 0^%01 sel marin. Dans l'opération n° 3, on précipite le chlore par une solution de nitrate d'argent C, dont 1" vaut aussi O^^Ol de sel marin; enfin, dans l'essai 4, on précipite l'urée dans 10" d'urine privée de phosphates et de chlore ; par laUqueur D, dont 1" = 0,01 urée, le Uquide devient de plus en plus acide, aussi faut-il verser de temps en temps du carbonate de soude. L'essai au verre de montre se comprend facilement, une partie du composé mercuriel d'urée reste en solution à la faveur de l'excès d'acide ; par le carbonate de soude il se dépose en blanc pur, mais dès qu'il y aura excès de sel métallique, il se formera en outre, du carbonate de protoxyde de mercure qui est jaune.

Préparation des liqueurs titrées. — A. Nitrate de mercure pour dosage du chlorure de sodium, 1" = 0,01 ClNa = 0,00606 de chlore.

Peser 20 grammes de mercure pur au décigramme près, oxyder à chaud et complètement par l'acide nitrique dans un vase à précipiter, évaporer à consistance sirupeuse, étendre à 1 litre. Pour véritier et titrer, on prépare une ^ solution normale de sel marin à 10 grammes par litre, en pesant très-exactement 10 grammes de sel marin purifié et préalablement fondu, et en dissolvant de manière à for-

mer 1 litre. On mesure 10" de cette solution, on ajoute 1 centimètre cube d'une solution normale d'urée pure (20 grammes bien pesés par litre) ; avec une burette, on verse la solution mercurielle jusqu'à ce que le précipité cesse de se redissoudre ; s'il en a fallu 9",6, par exemple, on étendra 960" de liquide A avec 40°'= d'eau, et on conservera pour l'usage.

B. Solution barytique. Mélanger 2 parties d'eau de baryte saturée et 1 partie de solution saturée de nitrate de baryte pur.

C. Nitrate d'argent, 1" = 0,01 ClNa = 0,00606 chlore. Peser 18^S461 d'argent pur, dissoudre dans un vase à précipiter dans l'acide nitrique pur, évaporer à sec, dissoudre et étendre à un litre. Pour la véritication, on précipite 10" par l'acide chlorhydrique et on pèse le chlorure d'argent.

D. Nitrate de mercure pour le dosage de l'urée, 1" = 0,01 urée. Peser à peu près 72 grammes de mercure distillé, transformer en nitrate mercurique, évaporer à sirop, étendre de manière à former 1 litre ; pour vérifier et titrer, prendre 10'^'' de la solution normale d'urée, et opérer comme il a été dit plus haut pour le dosage de l'urée dans l'urine; si l'on a employé lO'^^B de D, on ajoutera 5" d'eau pour chaque 195" de liqueur, on vérifiera une deuxième fois, et si les résultats sont tels que 10" de solution d'urée emploient exactement 20" de D , on conservera pour l'usage.

Les solutions normales une fois prêtes, l'opération est très-rapide et n'exige pas plus de 20 à 30 minutes.

Analyses spéciales.

Urine. — Le médecin peut au lit même du malade, ou dans une salle voisine, trouver facilement et en opérant dans des tubes, l'albumine, le sucre elles pigments biliaires. Tout le reste doit se faire au laboratoire; il convient même de confirmer par des recherches exécutées avec plus de soins les premières données obtenues surplace. La chimie clinique ne peut avoir qu'une utilité très-restreinte, vij qu'il est impossible au pratricien de porter sur lui une trousse de réactifs ; pour le professeur de clinique, elle a plus d'intérêt en lui permettant de vérifier, sous les yeux de ses élèves, la Justesse du diagnostic qu'il vient de poser; malheureusement elle n'est pas encore de nature à prendre un grand développement, la plupart des essais exigeant des manipulations préparatoires assez longues.

L'analyse complète d'une urine n'a de valeur réelle que si elle porte sur le liquide émis en vingt-quatre heures; le médecin qui désire être renseigné doit donc recommander aux gardes de verser le Uquide, à mesure qu'il est émis, dans un flacon bien bouché ; l'examen ne doit pas être remis au delà des vingt-quatre heures nécessaires pour recueillir le produit. Si l'urine est sujette à se décomposer rapidement, il conviendra d'analyser chaque partie immédiatement après son émission. .

Le chimiste chargé de l'essai mesure avec des vases bien jaugés le volume total (1) ; il note la couleur, Tas-

(1) Cette mesure doit être faite à une température connue. On réduit

ANALYSES SFÈCIALES. 489

pect, la réaction au papier de tournesol ; il examine les dépôts s'il y en a, les filtre et les analyse à part ; vient ensuite la détermination de la densité, cette donnée est très-utile parce qu'elle permet de calculer rapidement le poids approximatif des matériaux solides au moyen d'une formule donnée par M. Trapp.

Densité X 2 000 — 2 000 = poids des matériaux de 1 litre d'urine.

Neubauer donne le coefficient 2,328 qui se rapproche de celui de MM. Haeser etBird (2,330).

Pour mesurer la densité, on peut se servir : 1° de la méthode du flacon perfectionnée par M. Regnault.

Le flacon est formé par un tube mince de verre, prolongé par un conduit étroit et terminé par un goulot large que l'on ferme avec un bouchon rodé. On remplit cet appareil comme un flacon ordinaire, puis on le plonge dans la glace fondante, et, sans le laisser se réchaufl'er, on enlève avec un tortillon de papier Joseph tout le hquide qui dépasse un trait marqué sur la tige; de cette manière on introduit toujours dans le flacon un même volume Y de liquide à zéro, et dont le poids est YX, si la densité estX,

ou bien ^— , si ce liquide est de l'eau.

[d° = la dilatation de l'eau de 4° à 0" = 0,000126.) 1° On équihbre le flacon plein d'urine avec une tare.

le volume observé à une température f à ce qu'il serait à 0°, en divisant par le volume qu^occupe à t l'unité de volume d'eau mesurée à 0°; on suppose que l'urine a le même coefficient de dilatation que l'eau. Ces nombres se trouvent dans tous les ouvrages de physique. (Voir Jamin, Table d'Haelstrom pour la dilatation de l'eau, page 45, t. II.)

2" On enlève l'urine et on la remplace par de l'eau, soit P', le poids additionnel qu'il faudra ajouter au flacon pour rétablir l'équilibre avec la même tare.

3° On vide le flacon, on le sèche et on remet sur la balance , soit P le poids additionnel à lui ajouter pour contrebalancer la tare.

La densité x de l'urine à 0° sera donnée par la formule :

p — P'g (1 + do\ ^~(P — P') (1 + rfo)

a = poids d'an centimètre cube d'air au moment de la pesée. 1" d'air à 0° et 760 pèse 0,001293 ; si la pression est H et la température on a :

Ce procédé a l'inconvénient d'être très-long ; il peut avec beaucoup d'avantages être remplacé par l'emploi du densimètre de M. Berlin, dont les indications très-rapides ne diffèrent de celles de la méthode du flacon que de \ \% centième au plus. Yoici la description de l'appareil telle que la donne l'auteur lui-même : « Le densimètre se compose essentiellement de deux tubes de verre de mêmes diamètres, fixés sur une planchette verticale et communiquant par le haut au moyen d'un tube de cuivre recourbé. A la partie supérieure de cette tubulure est soudé un ajutage portant un tuyau en caoutchouc qui tombe entre les deux branches d'une pince à ressort fixée dans le support.

Cette pince, très-usitée maintenant dans les laboratoires, est celle que les Allemands désignent sous le nom de Quetschhahn (ou presse-robinet). ^Quand on presse les deux boutons entre le pouce et l'index, la pince s'ouvre et le caoutchouc aussi. Les deux tubes plongent dans deux vases pleins de liquide posés sur des supports en bois.

Le plus grand de ces vases est destiné à recevoir l'eau, et l'autre reçoit le liquide dont on veut déterminer la densité. Le vase à eau a une section 400 fois plus grande que le tube qui y est plongé, de sorte que le niveau de l'eau y reste sensiblement stationnaire quand on aspire les liquides dans les tubes. Le vase à liquide peut avoir une section très-petite; dans mon appareil cette section est 50 fois plus grande que celle du tube, de sorte que le niveau y baisse de 0'",002 quand il monte dans le tube de 0",100. Les deux tubes sont appliqués contre des échelles portant des divisions de 0"',002. Deux plaques d'ivoire fixées au bas du tube indiquent les niveaux primitifs, l'arête inférieure de ces plaques est au-dessous du point 100 à 100 divisions du côté de l'eau et à 98 du côté du liquide.

Pour prendre la densité d'un liquide, on le met dans le vase correspondant, après avoir rempli d'eau distillée le vase le plus large, et on commence par régler les niveaux de manière qu'ils affleurent dans les deux tubes aux deux points de repère, puis, pressant les deux boutons de la pince, on aspire avec la bouche parle tube en caoutchouc, jusqu'à ce que le liquide à essayer soit monté au-dessus de la centième division ; arrivé à ce point, on abandonne le caoutchouc et la pince. En pressant ensuite légèrement

sur celle-ci, il est facile de faire redescendre tout doucement le liquide à essayer jusqu'à ce qu'il affleure exactement au point 100, et en même temps l'eau s'élève dans le second tube jusqu'à une certaine division n, qui exprime en centièmes la densité cherchée.

L'expérience faite et répétée aussi souvent qu'on le voudra, si l'on veut prendre une autre densité, il faudra d'abord laver le tube à liquide. Pour y parvenir, il sufflt de mettre un vase plein d'eau à la place de celui qui renfermait le liquide et d'aspirer plusieurs fois. »

L'emploi de cet appareil peu dispendieux remplace avec avantage l'urinomètre (aréomètre pour la densité de l'urine) ; nous nous dispensons donc de parler de ce dernier instrument.

Pour la détermination directe du résidu solide de l'urine on doit, à cause de ses propriétés hygroscopiques, le peser dans un vase fermé. À cet effet, on évapore et l'on dessèche à 110° 20" d'urine dans une capsule en porcelaine à fond plat et à parois élevées, avec des bords rodés sur lesquels on peut placer une plaque de verre également rodée ; cette capsule est tarée d'avance avec un poids supplémentaire suffisant.

Lorsqu'on juge la dessiccation terminée, on ferme avec la plaque et on laisse refroidir sous une cloche au-dessus de l'acide sulfurique, enfin on pèse. Le seul inconvénient de ce procédé, c'est de n'être pas très-exact, vu qu'à \ 10" déjà, l'urée se décompose en partie sous l'influence des sels de l'urine, et au-dessous la dessiccation n'est pas complète.

La partie minérale est analysée comme il a été dit plus haut (analyse des cendres).

La recherche et le dosage de l'urée, de l'acide urique, de l'acide hippurique, de la créatinine, de la tyrosine, de la leucine, du sucre et des principes biliaires, se fait d'après les procédés déjà décrits. Nous connaissons aussi par quelle méthode on peut doser le sel marin ou plutôt le chlore ; il nous reste à parler de deux moyens assez simples de titrage de l'acide phosphorique.

1° Procédé de Liebig.

Si le volume total de l'urine émise en vingt-quatre heures est moindre que 2 htres (c'est le cas ordinaire), on en mesure la dixième partie et on l'étend de manière à en former 200". A ces 200", on ajoute 10" d'une solution d'acétate de soude contenant 400 grammes par litre et 10" d'une solution d'acide acétique à 200 grammes d'acide purparlitre. Total, 220. La moitié (110") de ce mélange est divisée en cinq parties égales de 22" chaque. On ajoute à la première 2, à la deuxième 2 1/2, à la troisième 3, à la quatrième 3 1/2, à la cinquième 4 centimètres cubes d'une solution d'alun ammoniacal de fer, contenant exactement OT^'jSS d'alun pur par litre et dont jcc Qe' Q{ acide phosphorique.

Au bout de dix minutes on essaye chacun de ces mélanges de la manière suivante. Un papier à filtre imbibé de cyanure jaune est placé sur une assiette et recouvert d'un double de papier joseph, on comprime avec une baguette portant quelques gouttes de l'essai. Le papier intermédiaire prendra une teinte bleue pour le mélange à excès de

fer. On a ainsi deux limites entre lesquelles tombe la valeur exacte. Pour arriver à une approximation plus grande, on ajoute aux 110 " qui restent, cinq fois la dose, limite inférieure de liqueur titrée de fer, puis on procède par additions successives de demi- centimètres cubes en essayant chaque fois comme'avant. Si, dans cette expérience sur les 110" = IQOç« d'urine étendue, on a employé 18'J 1/2 de sel de fer avant l'apparition d'une couleur bleue, ces 100" d'urine contiennent 18,5 X 0^\0i d'acide phosphorique et l'urine totale 18,5 X 0«%2.

Cette méthode est fondée sur les faits suivants : le phosphate de fer est insoluble dans l'acide acétique et l'eau ; si un phosphate soluble de formules :

Pho5,3MO;PhOS,2MO.HO;PhO»,MO,2HO

est mis en présence d'un sel de sesquioxyde de fer

3S03,Fe203

et d'acétate de soude, on a les réactions suivantes :

(1) PhOS,3MO + 3S03,Fe203 = PhCFe^Oa -f- 3S08MO. (2) PhO%2MO,HO + 3S03,Fe203 + ANaO = Ph05Fe'-03 + 2S0SM0. . . -f SOSNaO + A . 3) Ph05,MO,2HO + 3S03,Fe203 + 2ANaO = PhOsPe^O^

SO'MO + 2S08NaO + 2A.

2° Procédé de M. Neubauer et Pincus.

Ces chimistes ont modifié, pour le rendre volumétrique, le procédé de dosage de M. Leconte, au moyen de l'acétate d'urane.

On prépare une solution d'acétate d'urane dont 1" = 0«%005 acide phosphorique .A cet effet, on dissout l'oxyde

ANALYSES SPÉCIALES. -iQb

jaune d'urane dans l'acide acétique, et on détermine le titre avec une liqueur normale de phosphate de soude contenant 0^',02 d'acide phosphorique par centimètre cube, puis on étend d'assez d'eau pour que la liqueur uranique corresponde au quart de la solution phosphatique.

Essai. — A 50" d'urine filtrée on ajoute 5" de la solution d'acétate de soude et 5'== d'acide acétique (les mêmes que dans le premier procédé), et avec la burette on verse l'acétate d'urane jusqu'à ce que le précipité ne se forme plus d'une manière évidente. On essaye de temps en temps sur une soucoupe en porcelaine une goutte de la liqueur qui n'a pas besoin d'être filtrée, avec une goutte de cyanure jaune ; tant que la tache ne devient pas brune, on continue l'addition du sel d'urane.

Il convient quelquefois de doser l'acide phosphorique combiné à la chaux et à la magnésie. On y réussit facilement en précipitant 200" d'urine par l'ammoniaque, laissant reposer douze heures, filtrant et lavant le dépôt avec de l'eau ammoniacale, après quoi on le dissout dans l'acide acétique chaud et étendu ; on étend à 50" et on dose l'acide phosphorique par l'acétate d'urane comme avant (Neubauer).

' En précipitant une seconde portion de 200" d'urine par l'ammoniaque, filtrant, lavant, séchant et pesant le dépôt, onpeut, avec cette donnée et la précédente, calculer le poids de la chaux et celui de la magnésie. Si, en effet, nous transformons en phosphate tribasique de chaux tout l'acide phosphorique trouvé, en multipliant par 2,18309, et si nous retranchons de là le poids trouvé des phospha-

496 CIIIMIK PHYSIOLOGIQUE.

tes terreux, D étant la différence, nous pouvons poser

{Ph053CaO — PhOîi2MgO) = 44 : Ph052MgO = 111 : : D : a; pyrophosphate de magnésie.

a-=DX'^ = DX 2,5227 (Neubauer).

Le procédé à l'acétate d'urane est plus exact que le premier et doit lui être préféré toutes les fois que faire se peut.

Calculs urinaires. — L'acide urique, les urates acides de soude et d'ammoniaque, l'oxalate de chaux, la xanthine, la cystine, le phosphate tribasique ou bibasique de chaux, le phosphate ammoniaco-magnésién et le carbonate de chaux sont les seuls principes organiques et minéraux trouvés jusqu'à présent dans les dépôts et calculs urinaires. Ces produits sont le plus souvent isolés ou associés deux à deux, ou trois à trois au plus, dans un même calcul, et alors même l'un d'eux prédomine beaucoup.

Les caractères physiques peuvent déjà servir à faire reconnaître les diverses variétés de calculs (voir ce qui a été dit sur les concrétions urinaires), mais il importe pour la sûreté du diagnostic de faire l'analyse chimique.

On chauffe un petit fragment de matière sur la lame de platine, on ju^e ainsi facilement par l'aspect et le volume des cendres si c'est la matière organique ou l'élément minéral qui prédominent. Un résidu blanc terreux, insoluble dans l'eau et faisant effervescence avec les acides, alors que le calcul lui-même ne donne pas cette réaction, sera un indice presque certain de la présence de l'oxalate de chaux. L'acide urique et la xanthine se trouvent

facilement en traitant le calcul pulvérisé par l'acide chlorhydrique et en soumettant la partie insoluble sur une lame de platine à l'action de l'acide nitrique et de la soude (réaction de Scherer). L'ammoniaque sert à séparer les deux corps; elle dissout la xanlhine et laisse l'acide urique.

La solution chlorhydrique peut renfermer de l'oxalate de chaux, de l'acide phosphorique, de la chaux et de la magnésie, des alcalis (potasse, soude et ammoniaque), enfin de la cystine (très-rare) ; l'effervescence pendantle traitement à l'acide chlorhydrique indique la présence du carbonate de chaux. Une partie de la liqueur est examinée dans le but de rechercher l'ammoniaque. S'il y en a, on peut supposer la préexistence de l'urate acide d'ammoniaque dans le cas où l'on a trouvé de l'acide urique, ou du phosphate ammoniaco-magnésien. Pour acquérir à ce sujet une certitude complète, il faut faire bouillir avec de l'eau une partie du calcul, filtrer à chaud, concentrer et examiner au microscope le dépôt qui se forme : l'urate acide d'ammoniaque se précipite en grains arrondis, allongés ou irrégulièrement radiés, tandis que le phosphate ammoniaco-magnésien a une forme cristalline bien déterminée. Il est de plus facilement soluble dans l'acide acétique, insoluble dans l'ammoniaque.

Les urates acides de soude et de potasse qui se déposent en même temps de la solution aqueuse ne se distinguent pas au microscope de l'urate acide d'ammoniaque ; leur forme est indéterminée, mais leur diagnostic dans le dépôt vésical est établi par la découverte de la potasse

OU de la soucie dans la solution chlorhydrique. Cette dernière, sursaturée par l'ammoniaque, laisse déposer les phosphates terreux et Toxalate de chaux, et ne retient plus que de la cystine, de l'acide phosphorique et des alcalis, ou, en l'absence de l'acide phosphorique, de la cystine, des alcalis, de la chaux et de la magnésie. Si le dépôt est neutre après lavage et alcalin après une forte calcination, en faisant effervescence avec l'acide chlorhydrique, on peut conclure à la présence de l'oxalate de chaux, qui doit être de plus insoluble dans l'acide acétique ; le produit de la calcination est analysé comme la partie insoluble des cendres (voir plus haut).

Une portion de la solution ammoniacale bouillie avec de la potasse caustique donne une proportion notable de sulfure alcalin, qui noircit l'argent et les sels de plomb ; dans ce cas il y a delà cystine. Le reste de la liqueur étant évaporé à sec et le résidu calciné, les cendres sont analysées comme la partie soluble des cendres en général (recherche de PhO^ KO, NaO ou de KO, NaO, CaO, MgO).

Les dépôts urinaires renferment souvent des cristaux d'oxalate de chaux en trop petite quantité pour qu'on puisse les examiner autrement, sous ce point de vue, qu'au microscope, mais l'apparence de ces cristaux est telle qu'on ne peut les Confondre avec aucun autre corps; ce sont des octaèdres quadrangulaires, surbaissés, offrant au microscope la forme d'une enveloppe de lettre. Leur solubilité dans l'acide chlorhydrique, ainsi que leur insolubilité dans l'ammoniaque et l'acide acétique, aident encore au diagnostic.

ANALYSES SPÉCIALES. 'iSO

L'analyse quantitative est, sauf le dosage des nnaiières organiques, semblable à celle décrite pour les cendres. L'acide urique et la xantliine se séparent de tout le reste parle traitement à l'acide clilorhydrique ; la xantliine se sépare de l'acide urique par l'ammoniaque. La cystine se dose le mieux par la détermination du soufre contenu dans le calcul ; à cet etfet, on triture 4 à 5 décigrammes de matière avec un mélange de 1 salpêtre et 3 ^ de carbonate de soude sec et pur. Le tout est introduit dans un tube à combustion fermé par un bout, long de 30 centimètres, contenant déjà une couche de 2 centimètres de salpêtre carbonaté, et on achève de remplir avec du nitrate de potasse carbonaté. Le tube est chauffé d'abord en avant, puis sur toute son étendue, et plongé encore chaud et bien essuyé dans une éprouvette remplie d'eau ; il se brise, et son contenu se dissout ; on acidulé avec l'acide chlorhydrique, on filtre et on précipite à chaud par le chlorure de baryum. Le précipité de sulfate de baryte recueilli sur un filtre est lavé, séché et calciné dans un creuset de platine pour brûler le papier, humecté avec quelques gouttes d'acides nitrique et sulfurique, calciné de nouveau et pesé .Le poids du sulfate de baryte multiplié par 0, 1373 donne le soufre, et ce dernier multiplié par 3,75 donne la cystine correspondante.

Pour le dosage de l'acide oxalique, on utilise la propriété que possède un mélange de peroxyde de manganèse et d'acide sulfurique, d'oxyder l'acide oxalique et de le transformer en acide carbonique.

C*H208 + 2Mn02 2S03110 = 2SO»MnO -f- C^O» + 2H0

CBIMIE PHYSIOLOGIQUE.

On peut se servir à cet effet du petit appareil [fig. 3) décrit à propos du dosage de l'acide carbonique des cen-

légèrement; lorsque la réaction est terminée, on aspire de nouveau pour remplacer l'acide carbonique par de l'eau, et on détermine la perte de poids. 1 gramme d'acide carbonique perdu équivaut à ls%454 d'oxalate de chaux.

Analyse du sang. — Nous nous occuperons d'abord des moyens proposés pour le dosage des divers principes du sang, puis nous passerons aux méthodes qui permettent de les déterminer simultanément.

1° Dosage de la fibrine. — La fibrine du sang est le principe qui se sépare spontanément après la saignée. Tous les procédés d'analyse quantitative de la fibrine reposent donc sur sa coagulation inévitable ; dans les uns on bat le liquide issu de la veine, la fibrine se sépare sous forme de flocons plus ou moins volumineux sans emprisonner beaucoup de cellules; d'après Scherer, il convient

Fig. 3.

dres. L'acide sulfurique est contenu dans la petite picette B ; la fiole A reçoit 1 gramme de calcul pulvérisé, et 4 à 5 grammes de peroxyde de manganèse lavé préalablement à l'acide nitrique étendu et à l'eau.

On tare, puis on aspire l'acide et on chauffe

mieux d'abandonner le sang à lui-même et de laver et d'exprimer le caillot dans un nouet de linge. Le poids de la fibrine fournie par cette dernière méthode est toujours un peu plus élevé que celui de la première. Les indications à remplir sont d'éviter l'évaporation du sang, dont on ne peut prendre le poids qu'après le refroidissement, et de ne peser la fibrine qu'après lavage et dessiccation complètes.

M. Hoppe prescrit de recueillir 40 — 50 de sang dans un petit vase à précipiter fermé par une plaque en caoutchouc, qui laisse passer un agitateur en fanon de baleine ; le vase est pesé d'avance et repesé après le refroidissement et la précipitation de la fibrine déterminée par le mouvement de la spatule. La fibrine est lavée plusieurs fois par décantation avec de l'eau, filtrée sur un filtre taré, lavée à l'alcool bouillant et séchée à 120°; on laisse refroidir, avant de peser, au-dessus de l'acide sulfurique concentré.

2° Dosage des globules du sang. — La seule méthode directe pour la détermination des cellules repose sur le fait observé par Berzehus, qu'en ajoutant au sang défibriné par battage deux fois ou plus de son volume d'une solution de sulfate de soude ou de sucre, on peut filtrer les globules et les séparer du sérum par des lavages avec du sulfate de soude. l,e filtre est traité par l'eau bouillante pour coaguler les matières protéiques des cellules, et le coagulum lavé, séché et pesé donne le poids des globules secs. On peut faire à ce procédé proposé par M. Figuier plusieurs reproches importants. 1° Dans beaucoup de cas

la fîltration ne peut être effectuée sans qu'il ne passe de cellules à travers les pores du papier; 2° on arrive trèsdifficilement à enlever tout le sérum; 3° l'addition du sulfate de soude au sang défibriné détermine des échanges endosmotiques entre le contenu des globules et les matériaux du sérum. Tous les autres procédés donnent soit les globules secs, soit les globules humides, c'est-à-dire dans leur état physiologique, par des voies indirectes.

Méthode de MM. Prévost et Dumas.

Une partie du sang sert à la détermination de la fibrine, comme il a été dit plus haut. Une autre, abandonnée au repos dans un vase cylindrique et couvert, se sépare en caillot et en sérum qu'on pèse séparément, pour avoir le rapport de ces deux parties ; puis on dessèche et on pèse une portion déterminée de chacune d'elles ; en admettant que toute l'eau perdue par le caillot dérive du sérum emprisonné on peut calculer le poids des globules secs. Soient en effet :

a le poids de fibrine de 100? de sang.

m le poids du caillot humide.

100 — m celui du sérum séparé.

p le résidu sec du poids m de caillot humide.

q ^ 100 — m de sérum.

On aura m — p pour l'eau perdue par le caillot; elle correspond à x = aoo->r») (m-p) ^^^^ nous

tirons pour le poids des globules secs

Comme il est difficile de dessécher le caillot sanguin, MM. Bequerel et Rodier ont modifié cette méthode.

Ils dessèchent le sang défibriné, ou une partie, après avoir établi le poids de la fibrine et celui du sang défibriné pour une quantité déterminée de sang (100 parties, par exemple); d'un autre côté, ils déterminent la richesse en eau du sérum pur obtenu par coagulation spontanée.. Soient :

a le poids de la fibrine sèche de lOO parUes de sang. 100 — a celui du sérum avec les globules, m le poids du résidu sec du poids. 100 — « de sang défibriné. p la quantité d'eau de 100 parties de sérum pur.

On a pour le sérum de 100 parties de sang :

et pour les globules secs :

Le principe est, comme on le voit, celui du procédé de MM. Dumas et Prévost, mais le perfectionnement pratique a beaucoup de valeur.

Une modification proposée par Popp consiste à laisser le sang défibriné en repos, les globules gagnent le fond, et on détermine d'une part, l'eau "/o du liquide clair surnageant, et de l'autre celle du dépôt. Ce procédé ne diffèrci du précédent que parce qu'il n'exige pas la coagulation^ lente d'une deuxième portion.

Le procédé de Bequerel donne des résultats assez concordants, quand on l'applique plusieurs fois de suite au même liquide.

Scherer détermine, comme nous l'avons déjà dit, le poids de la fibrine par lavage et expression du caillot. Il

dessèche d'un autre côté du sang défibriné, et pèse le résidu ; la somme des deux pesées calculées °jo donne les matériaux solides et secs. Une partie du sang défibriné versée dans l'eau bouillante additionnée d'un peu d'acide acétique, donne les matières coagulables, moins la fibrine contenue dans le sang ; la même opération répétée avec le sérum donne l'albumine ; avec ces résultats, on peut calculer les matières solides des globules.

La méthode de Scherer donne moins de cellules que les précédentes.

Par des considérations qu'il serait trop long de développer ici, C. Schmidt a trouvé qu'en multipliant par 4 le poids des globules secs donné par le procédé de MM. Prévost et Dumas, on peut calculer celui des globules humides dans leur état physiologique. Il se fonde surtout sur cette observation, que le contenu solide du sérum est à celui du caillot bien contracté dans un rapport assez constant. Le facteur 4 est probablement trop élevé et devra être abaissé à 3 1 /2.

Sacharjin a cherché à prouver que toute la soude du sang appartient au plasma. Ses expériences, si elles n'établissent pas encore ce fait d'une manière certaine pour toutes les espèces de sang, le rendent au moins très-probable. En partant de là et en dosant la soude du sang et celle du sérum, on peut calculer immédiatement le poids des globules frais. Soient :

m le poids de soude de. .

„ de.

n — de fibrine de

100 parties de sang.

100 — de sérum.

100 — de sang.

ANALYSES SPÉCIALES. 50ï>

On a :

pour le sérum de 100 parties de sang et 100 — (a; + p) pour les globules humides.

' Zimmerman emploie le dosage du chlore dans le sang et le sérum pour arriver au même résultat, en supposant que les cellules ne contiennent pas de chlorure.

Le procédé de Hoppe repose sur une condition qui ne peut pas toujours être remplie ; aussi, bien qu'exact, ne doit-il pas être considéré comme général. Pour sa réussite, il faut que la séparation de la fibrine n'ait lieu que lorsque le dépôt des cellules s'est en partie effectué, afin qu'on puisse enlever avec une pipette une quantité suffisante de plasma clair.

On dose la fibrine avec les précautions indiquées plus haut dans le sang et dans le plasma ; le reste est une affaire de calcul.

a la fibrine de 100 parties de sang.

ô de 100 — de plasma.

X le poids du plasma de 100 — de sang

(sérum + fibrine)

On a:

le poids des cellules humides = 100 — x.

Les déterminations de Sacharjin et de Hoppe donnent moins de cellules humides que celles de C. Schmidt, 330 environ au heu de 432 pour 1 000 parties de sang.

Yierordt et Welker comparent la contenance des diverses espèces de sang en globules, en comptant les cel-

506 CBIMIE PHYSIOLOGIQUK.

Iules sur le porte-objet du microscope. Ce procédé ne donne pas le poids des globules, mais seulement leur nombre. Pour diminuer la longueur de cette opération, on peut, comme le prescrit Welker, étendre de sang, ou même moins, avec une solution convenable de sucre, de manière à former un volume déterminé dont on mesurera une dose très-faible avec un tube capillaire calibré, pour la verser sur le porte-objet.

Nasse se sert des poids spécifiques du sang défibriné et du sérum pour calculer avec une formule le poidsdes globules.

Enfin, on peut employer pour la comparaison du sang au point de vue de ses éléments morphologiques colorés, une méthode depuis longtemps proposée par les fabricants d'indienne pour la détermination de la richesse des matières colorantes. On dose ainsi réellement l'hématine, mais il est probable que dans la plupart des cas le poids des globules est proportionnel à celui du principe coloré.

Welker étend le sang de 1000 fois son poids d'eau, et compare la nuance à celle d'une échelle chromatique, dont chaque terme correspond à une richesse déterminée d'avance en hématine ou en cellules.

Hoppe se sert d'une solution titrée de matière colorante (hématine) préparée de la manière suivante :

1 litre de sang défibriné est versé dans un flacon et agité avec une quantité d'éther telle, qu'il n'y ait pas séparation des deux liquides. On filtre sur un entonnoir couvert. Le liquide filtré est précipité par le carbonate de potasse. Le dépôt filtré est exprimé, desséché et épuisé par l'alcool. On dose le fer de la matière organique contenue

dans 10" de la solution alcoolique, l'oxyde de fer Fe"^0^ multiplié par 10,1 donne le poids deriiématine. Le liquide alcoolique est étendu d'une quantité d'eau telle que 100" de la nouvelle solution contiennent 0,01 d'hématine. On prend 10°' de sang défibriné, on y ajoute 1" d'une lessive de soude de 1 ,2 densité et on étend avec 89" d'eau. Il ne reste plus qu'à comparer la nuance des deux liqueurs dans un appareil convenable (colorimètre), et à ajouter assez d'eau à l'essai pour le rendre égal à la liqueur normale. Le volume de l'eau ajoutée permettra de calculer le poids d'hématine du sang.

L'intérêt qui s'attache à la question des globules nous a engagé à donner en résumé tous les procédés successivement proposés pour leur dosage, par les savants qui se sont occupés de cette question.

Le dosage des cellules par la richesse en hématine au moyen d'une liqueur titrée est de toutes la plus rapide, elle est susceptible d'être encore simplifiée, et pourra prendre place un jour parmi les procédés d'analyse clinique dont la simplicité et la rapidité sont des conditions essentielles.

Analyse du lait. — La nature et la quantité des sub-^ stances minérales en tout et en particulier se déterminent d'après la méthode générale. On peut aussi, après avoir coagulé en présence d'un fragment de caillette de veau lavée, extraire les sels solubles par lavage à l'eau chaude, évaporer à sec et brûler la matière organique restée en dissolution. L'incinération du coagulum donnera les sels insolubles.

Le poids des matériaux solides s'obtient facilement en

évaporant 20" de lait avec une quantité connue de plâtre calciné (3 grammes), en desséchant au bain-marie, puis à l'étuve à H0° ; le poids trouvé moins 3 grammes retranché du poids du lait donne la quantité d'eau. Le résidu épuisé par l'éther lui cède sa matière grasse, de sorte que l'on pourra déterminer le poids de cette dernière par la perte sous l'influence de l'éther, ou directement par l'évaporation de la solution éthérée. M. Marchand agite 10" de lait additionné d'une goutte de soude caustique, avec 10" d'éther dans un tube gradué, divisé en dixièmes de centimètres cubes ; il ajoute encore 1 0" d'alcool à 90 °/o, agite de nouveau et laisse reposer le tube maintenu vertical dans un bain-marie à 40°, jusqu'à ce que le volume de l'huile qui se réunit à la partie supérieure n'augmente plus. Ce volume en centimètres cubes multiplié par 23,3 et augmenté de 12,6 donne le poids du beurre contenu dans 1 litre de lait (approximativement).

Le sucre de lait se dose avec la liqueur de Fehling, en opérant avec le pétillait ou même avec le lait sans préparation aucune ; M. Boussingault a en effet observé que les autres principes du lait ne gênent pas l'expérience.

Comme toute substance active, la lactose peut être dosée avec l'appareil de Soleil ; il suffit de multiplier par 0,961 la quantité de glucose correspondante à la déviation observée pour avoir le poids de la lactose. A cet effet, on ajoute à 2 volumes de lait 1 volume d'une solution d'acétate de plomb marquant H ° à l'aréomètre de Baumé ; on fait bouillir un instant, on filtre et on laisse refroidir. Si le lait est acide, on neutralise avec un peu de carbonate de soude avant

d'ajouter l'acétate. Il faut se rappeler aussi que le liquide examiné ne renferme plus que Vs de lait réel (IIoppe).

La caséine peut se déterminer en épuisant le résidu de l'évaporation du lait additionné déplâtre, successivement par réther et l'alcool, pesant, puis incinérant ce qui reste pour retrancher le poids des cendres du premier poids.

En se fondant sur ce fait que la caséine représente à très-peu de chose près la seule matière azotée du lait, et que 100 parties de caséine contiennent 15,4 d'azote, on arrive assez exactement au poids de la caséine par le dosage de l'azote au moyen de la méthode de MM. Will et Warentrapp combinée à l'acidimétrie. Le produit de l'évaporation de 1 gramme de lait est mélangé à de la chaux sodée et calciné, l'ammoniaque formée est recueillie dans un volume déterminé d'acide oxalique normal, au moyen d'une solution de soude normale on mesure la perte de titre de l'acide sous l'influence de l'ammoniaque ; ce qui permettra facilement de calculer l'azote ou la caséine. Chaque centimètre cube de la solution d'acide oxa- Hque à 63 grammes par litre (1 équivalent), saturé par l'alcaH volatil vaut 0^', 01 4 d'azote etpar conséquent 0,0900 de caséine. L'opération se fait dans un tube en verre vert peu fusible, entouré d'un clinquant et placé sur une grille à charbon ou à gaz (les tubes en verre de Bohême valent encore mieux) ; le tube est étiré d'un côté en pointe fermée et relevée; on y verse 1° 2 centimètres de chaux sodée pure; 2° le mélange ; 3° une couche de 10 centimètres de chaux sodée pure, et on y fixe par un bon liège deux petits flacons de Woollf à deux tubulures, reliés entre eux par

un caoutchouc et portant chacun deux tubes à angle droit, dont l'un plongeur ; le premier flacon est "vide, le second, celui qui est le plus éloigné du tube, reçoit 10" de solution normale. Lorsque l'expérience est terminée, on brise la pointe et on détermine une aspiration d'air pour faire passer dans l'acide toute l'ammoniaque formée.

Analyse de la bile d'après Lehmann. — La bile est additionnée de son volume d'alcool à 83 7o; le mucus et l'épithélium ainsi précipités seuls sont filtrés, lavés à l'alcool, puis à l'eau, séchés et pesés. Le liquide est évaporé au bain-marie, et le résidu séché dans le vide à 100° est refroidi et pesé à l'abri de l'humidité, car la masse est trèshygroscopique. Après la pesée on l'épuisé par l'éther qui dissout la graisse et un peu de cholates ; ces derniers sont éliminés après évaporation de l'éther par Talcool faible et réunis au reste. La partie insoluble dans l'éther est traitée par l'alcool absolu, et le liquide obtenu, concentré fortement, est additionné d'éther; les cholates se séparent, tandis que le liquide alcoolique éthéré retient un peu de savon alcoolique et de sel marin. Le dépôt de cholate peut être traité par le chloroforme, afin d'enlever le plus possible de bilifulvine, puis séché et pesé. Sur une partie on détermine les alcalis soit par incinération, soit en dissolvant dans l'alcool et en précipitant la soude et la potasse par l'acide sulfurique ; sur une autre partie on dose le soufre de l'acide taurocholique par le procédé qui nous a déjà servi pour la cystine. Ce procédé est trèsexact pour la détermination de l'acide taurocholique, vu que la bile ne contient pas de sulfate; 1 gramme

;de soufre équivaut à 16,093 d'acide taurocholique. Le poids de l'acide glycocholique s'obtient par différence.

Calculs biliaùes. — Us peuvent contenir de la cholestérine, des pigments libres et combinés à de la chaux, du phosphate, du carbonate et de l'oxalate de chaux.

Relativement aux trois derniers corps nous renvoyons à l'analyse des cendres et des calculs urinaires.

En agitant le calcul finement broyé avec du chloroforme le pigment libre (bilifulvine) se dissout. On le reconnaît par la réaction de Gmelin. En traitant ensuite par l'alcool bouillant, on dissout la cholestérine qui se dépose par le refroidissement et se reconnaît comme il a été dit plus haut. Le résidu traité par l'acide chlorhydrique cède à ce liquide la chaux et les sels minéraux; la partie insoluble dans l'acide chlorhydrique étant épuisée par l'alcool fournit la matière colorante combinée.

Une marche analogue servira aux dosages.

Analyse des os. — 10 grammes d'os frais réduits en poudre sont desséchés à 120° centigrades et pesés, la perte donne l'eau contenue dans le tissu osseux. La masse est alors épuisée par l'eau froide et ensuite par un mélange d'alcool et d'éther; les deux solutions étant évaporées à sec au bain-marie et les résidus séchés et pesés, on obtient l'extrait aqueux (matière organique et sels solubles) ■Bt l'extrait éthéré représentant les corps gras. La partie insoluble (matière organique et sels insolubles) est partagée en deux portions, dont l'une sert après incinération au dosage de l'acide phosphorique, de la chaux etde lamagnésie (voir analyse des cendres, partie insoluble). L'autre

moitié est introduite dans le petit appareil qui nous a servi à la détermination de l'acide carbonique des cendres, on se sert d'acide clilorhydrique ; la perte donne le poids de l'acide carbonique, la solution est propre au dosage de la chaux, de la magnésie et de l'acide phosphorique, et la partie insoluble représente l'osséine et les parois devaisseaux et de cellules. On chauffe cette partie insoluble placée avec de l'eau dans un petit ballon fermé à la lampe, dans la marmite de Papin, à 3 atmosphères pendant trois à quatre heures; l'osséine se dissout seule et peut se séparer du reste de la matière organique (parois de vaisseaux et decellules), il n'y a plus qu'à sécher et à peser chaque partie séparément.

Dans l'analyse complète d'un parenchyme on procédera à peu près de la même manière, c'est-à-dire que l'on sépare successivement les parties solubles dans l'eau, l'éther et l'alcool. Dans le résidu on isole les substances organiques qui se modifient et deviennent solubles dans l'eau sous l'influence de la surchauffe, de celles qui ne jouissent pas de cette propriété.

Dans les extraits aqueux, alcooliques et éthérés, on recherchera les divers principes qu'ils peuvent contenir d'après les méthodes connues. La détermination des produits minéraux se fera sur une portion séparée du parenchyme.

Pour la séparation des principes constitutifs spéciaux, du cerveau et des nerfs, nous renvoyons à ce qui a déjà été dit à propos du tissu nerveux.